發(fā)布時間：2021-10-25 00:44

　　柑橘在世界范圍內(nèi)廣泛種植,各種生物及非生物脅迫對柑橘生長發(fā)育產(chǎn)生不良影響從而降低果實品質(zhì)和產(chǎn)量。由于其多胚、高度雜合、童期長以及自交不親和等生物性狀,使常規(guī)育種方法受到限制,而轉(zhuǎn)基因技術由于其目的基因來源廣、轉(zhuǎn)化系統(tǒng)不受基因型控制、能夠定向改良植物目的性狀等優(yōu)點而成為是目前柑橘育種最有效的工具。高效遺傳轉(zhuǎn)化體系是轉(zhuǎn)基因技術應用的前提,雖已有研究者構(gòu)建了有效的柑橘轉(zhuǎn)化體系,但大部分柑橘種類或品種轉(zhuǎn)基因效率依然很低,尤其是以成年態(tài)材料為外植體的遺傳轉(zhuǎn)化效率,因而柑橘遺傳轉(zhuǎn)化效率亟待提高。本研究以卡里佐枳橙和尤力克檸檬為材料研究了生長素極性運輸與莖段上下端芽再生差異的聯(lián)系及生長素在柑橘再生和遺傳轉(zhuǎn)化中的關鍵作用,并通過調(diào)控內(nèi)源與外源的生長素濃度提高外植體的再生效率及轉(zhuǎn)基因效率;同時以鳳梨甜橙、哈姆林甜橙、埃及糖橙、伏令夏橙、卡里佐枳橙以及尤力克檸檬上胚軸節(jié)間莖段為外植體,研究利用KN1基因和IPT基因促進柑橘內(nèi)源細胞分裂素的合成提高實生態(tài)柑橘遺傳轉(zhuǎn)化效率;另外,以成年態(tài)鳳梨甜橙、伏令夏橙和華盛頓臍橙為研究材料,研究利用KN1和IPT基因提高成年態(tài)柑橘轉(zhuǎn)基因效率,并通過生長素抑制劑以及甲基化抑... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學湖南省

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

外植體采用不同切法時不定芽的再生情況

圖 2-3 外植體在不同培養(yǎng)基中不定芽的再生情況A：外植體培養(yǎng)于 MS培養(yǎng)基，B：外植體培養(yǎng)于 MS + 3 mg/L 6-BA培養(yǎng)基Fig. 2-3 Shoots regeneration from explants with different medium.A: Explants culture in MS medium, B: Explants culture in MS + 3 mg/L 6-BAmedium2.2.2 生長素在外植上的分布情況為了便于觀察生長素在上胚軸節(jié)間莖段外植體上的分布情況，用 pBin19-DR5::uidA 表達載體轉(zhuǎn)化卡里佐枳橙獲得轉(zhuǎn)基因植株。由于 DR5 啟動子受生長素高度誘導，經(jīng)轉(zhuǎn)化后的抗性芽葉片在添加有或不添加 10-5M NAA的 10 mM 磷酸鉀緩沖液（pH 6，添加 150 mg /L Tim）中處理后，經(jīng) NAA 處理后 GUS 活性顯著增強的抗性芽即可判定為轉(zhuǎn)基因植株并用作后續(xù)試驗。轉(zhuǎn) DR5::uidA 基因經(jīng)誘導生根或試管嫁接進行擴繁。轉(zhuǎn)基因植株節(jié)間莖段切下進行 GUS 染色后，通過 uidA 表達量高低即可判斷生長素在外植體上的分布情況。轉(zhuǎn) DR5::uidA 植株的莖段切下后分別放在添加 20 mg/LNPA（1-N-Naphthylphthalamic acid，一種生長素極性運輸抑制劑）和不添加 NPA 的

第二章 內(nèi)源生長素在柑橘再生過程中的關鍵作用研究BCADE F得形態(tài)學上端生長素濃度降低并在形態(tài)學下端累積。而當莖段經(jīng) NPA 處理后，GUS活性在莖段上下端均可被檢測到（圖 2-4C），并且上下端分布較均勻 。而當莖段在MS培養(yǎng)基上培養(yǎng) 15 h 后，再用 NPA處理 15 h，最后 GUS染色結(jié)果表明 NPA本身并不具有誘導 DR5 的作用，說明圖 2-4C 中的現(xiàn)象確實是由于生長素的極性運輸被抑制而產(chǎn)生的。

【參考文獻】：
期刊論文
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[10]農(nóng)桿菌介導甜橙遺傳轉(zhuǎn)化的初步研究[J]. 謝玉明,鄧子牛,郭琛,焦徠,胡春華,熊興耀.  湖南農(nóng)業(yè)大學學報(自然科學版). 2005(06)

博士論文
[1]甜橙和金柑高效安全轉(zhuǎn)基因技術研究[D]. 楊莉.湖南農(nóng)業(yè)大學 2012



本文編號：3456317