果實(shí)后熟和軟化是決定其采后貨架期長短最重要的內(nèi)在因素。本文以’海沃德’獼猴桃（Actinidia deliciosa[A.Chev.]C.F.Liang et A.R.Ferguson var.deliciosa cv.Hayward）為材料,利用生物信息學(xué)分析、基因表達(dá)、啟動(dòng)子分析、煙草雙熒光素酶、凝膠遷移實(shí)驗(yàn)、瞬時(shí)過量表達(dá)以及轉(zhuǎn)基因等研究技術(shù)手段,篩選研究獼猴桃果實(shí)后熟軟化的相關(guān)基因,驗(yàn)證相關(guān)成員在獼猴桃果實(shí)中的基因功能,確定果實(shí)成熟軟化相關(guān)基因的調(diào)控模式,并為采后獼猴桃果實(shí)成熟軟化機(jī)制提供新依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1.測定了采后不同處理的獼猴桃果實(shí)多種生理指標(biāo),包括乙烯合成、可溶性固形物和淀粉含量、硬度和細(xì)胞壁組分。基于轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù),對獼猴桃果實(shí)后熟過程中多種性狀（乙烯合成、細(xì)胞壁和淀粉降解）的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄分析。共篩選出26個(gè)響應(yīng)外源乙烯處理最強(qiáng)烈的差異表達(dá)基因,包含12個(gè)結(jié)構(gòu)基因和14個(gè)轉(zhuǎn)錄因子,而差異表達(dá)基因在1-MCP（一種乙烯抑制劑）處理組呈現(xiàn)與乙烯處理相反的表達(dá)模式。利用雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)分析了差異表達(dá)基因在體內(nèi)的調(diào)控效應(yīng),發(fā)現(xiàn)一個(gè)C2H2-型鋅指蛋白AdDof... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
摘要
abstract
縮略語表
1 緒論
    1.1 果實(shí)成熟
        1.1.1 乙烯合成與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
        1.1.2 淀粉降解
        1.1.3 細(xì)胞壁降解
        1.1.4 獼猴桃果實(shí)的成熟衰老
    1.2 果實(shí)成熟的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究
        1.2.1 番茄果實(shí)成熟衰老轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究
        1.2.2 其他果實(shí)成熟衰老轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究
    1.3 Dof轉(zhuǎn)錄因子
        1.3.1 Dof結(jié)構(gòu)
        1.3.2 Dof生物學(xué)功能
        1.3.3 Dof與淀粉代謝
    1.4 研究目標(biāo)和內(nèi)容
2 AdDof3調(diào)控獼猴桃果實(shí)采后淀粉降解
    2.1 材料與方法
        2.1.1 植物材料和處理
        2.1.2 果實(shí)指標(biāo)測定
        2.1.3 RNA提取,cDNA合成和基因組DNA提取
        2.1.4 RNA-seq
        2.1.5 基因克隆與啟動(dòng)子元件分析
        2.1.6 實(shí)時(shí)定量PCR
        2.1.7 煙草雙熒光素酶分析
        2.1.8 EMSA實(shí)驗(yàn)
        2.1.9 亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)
        2.1.10 獼猴桃轉(zhuǎn)基因
        2.1.11 GUS染色
        2.1.12 獼猴桃果瞬時(shí)過表達(dá)分析
        2.1.13 統(tǒng)計(jì)分析
        2.1.14 基因登錄號
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 獼猴桃果實(shí)成熟分析
        2.2.2 后熟相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子和結(jié)構(gòu)基因的獲得
        2.2.3 后熟相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子和結(jié)構(gòu)基因在獼猴桃成熟過程中表達(dá)分析
        2.2.4 成熟相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子對結(jié)構(gòu)基因啟動(dòng)子的調(diào)控效應(yīng)
        2.2.5 AdDof3識別AdBAM3L啟動(dòng)子的結(jié)合位點(diǎn)研究
        2.2.6 AdBAM3L在'秦美'獼猴桃中過量表達(dá)轉(zhuǎn)基因
        2.2.7 AdDof3的獼猴桃果實(shí)瞬時(shí)過量表達(dá)分析
    2.3 討論
3 基于基因組的AdERF基因克隆與分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 AdAP2/ERF的提取與分離
        3.1.2 果實(shí)材料與處理
        3.1.3 果實(shí)指標(biāo)測定
        3.1.4 RNA提取和cDNA合成
        3.1.5 AdERF家族基因克隆
        3.1.6 實(shí)時(shí)定量PCR
        3.1.7 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 AdERF分離與聚類分析
        3.2.2 獼猴桃ERF結(jié)構(gòu)分析
        3.2.3 不同處理對獼猴桃果實(shí)后熟軟化的影響
        3.2.4 獼猴桃ERF基因?qū)σ蚁┨幚淼捻憫?yīng)
        3.2.5 獼猴桃后熟軟化相關(guān)ERF基因在氣調(diào)處理中表達(dá)
        3.2.6 獼猴桃后熟軟化相關(guān)ERF對結(jié)構(gòu)基因啟動(dòng)子的調(diào)控效應(yīng)
    3.3 討論
4 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 展望
參考文獻(xiàn)
附圖
作者簡歷及在學(xué)期間所取得的科研成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于乙烯受體下游轉(zhuǎn)錄因子的果實(shí)品質(zhì)調(diào)控機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 徐倩,殷學(xué)仁,陳昆松.  園藝學(xué)報(bào). 2014(09)
[2]21世紀(jì)以來世界獼猴桃產(chǎn)業(yè)發(fā)展以及中國獼猴桃貿(mào)易與國際競爭力分析[J]. 張計(jì)育,莫正海,黃勝男,郭忠仁.  中國農(nóng)學(xué)通報(bào). 2014(23)
[3]植物Dof基因家族功能研究進(jìn)展[J]. 蔡曉鋒,張余洋,張俊紅,李漢霞,葉志彪.  植物生理學(xué)報(bào). 2013(01)
[4]水果及其制品中果膠含量的比色法測定條件優(yōu)化[J]. 龐榮麗,張巧蓮,郭琳琳,方金豹,謝漢忠,李君,羅靜,吳豐魁.  果樹學(xué)報(bào). 2012(02)
[5]乙烯調(diào)控非躍變型果實(shí)成熟衰老研究進(jìn)展[J]. 蔣天梅,殷學(xué)仁,王平,孫崇德,徐昌杰,李鮮,陳昆松.  園藝學(xué)報(bào). 2011(02)
[6]乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與果實(shí)成熟衰老的研究進(jìn)展[J]. 殷學(xué)仁,張波,李鮮,陳昆松.  園藝學(xué)報(bào). 2009(01)
[7]中國獼猴桃種質(zhì)資源的研究與利用[J]. 徐小彪,張秋明.  植物學(xué)通報(bào). 2003(06)
[8]天然產(chǎn)物中的糖含量測定方法正確性的研究[J]. 林穎,吳毓敏,吳雯,田庚元.  天然產(chǎn)物研究與開發(fā). 1996(03)
[9]獼猴桃總淀粉酶活性與果實(shí)軟化的關(guān)系[J]. 王貴禧,韓雅珊,于梁.  園藝學(xué)報(bào). 1994(04)



本文編號：3449655