果實貯藏時間的長短與果實中乙烯釋放量的高低有著密切關(guān)系�！瞎妗≒yrus ussuriensis）是呼吸躍變型果實,其果實成熟受乙烯調(diào)控,近年來較多研究報道證實了乙烯可以與BRs（油菜素甾醇）相互作用影響果實發(fā)育成熟及貯藏時間,但目前的研究不能明確乙烯與BRs間的調(diào)控網(wǎng)絡。我們發(fā)現(xiàn)用0.1 mg·L-1濃度的EBR（表油菜素甾醇）處理后‘南果梨’貯藏過程中乙烯生成量減少。為明確BRs與‘南果梨’果實貯藏間的關(guān)系,我們通過轉(zhuǎn)錄組測序發(fā)現(xiàn),在‘南果梨’成熟前后（成熟期及室溫貯藏10 d）5個BRs合成及信號轉(zhuǎn)導通路相關(guān)基因BRU1-like, BES1/BZR1-like1, BES1/BZR1-like4, CYP450-90A1, BZR1表達存在差異。半定量PCR分析發(fā)現(xiàn)BZRl基因受乙烯抑制劑（1-MCP）的誘導。為了深入研究BZR1在果實成熟中的作用,我們構(gòu)建了‘南果梨’果實cDNA文庫并且以BZR1為誘餌進行了酵母雙雜交篩選。主要結(jié)果如下：1.對‘南果梨’成熟前后轉(zhuǎn)錄組比較分析,發(fā)現(xiàn)5個BRs合成及信號轉(zhuǎn)導通路相關(guān)基因（BRU1-like, BES1/BZR1-like1... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstracts
1 前言
    1.1 油菜素甾醇的研究進展
    1.2 BRs信號轉(zhuǎn)導通路及通路元件
        1.2.1 BRs信號轉(zhuǎn)導通路
        1.2.2 BRs信號轉(zhuǎn)導通路中的元件
    1.3 BRs與植物生長發(fā)育研究進展
        1.3.1 BRs對抗逆性的影響
        1.3.2 BRs對光形態(tài)建成的影響
        1.3.3 BRs對根系生長的影響
        1.3.4 BRs對花期的影響
        1.3.5 BRs對衰老進程的影響
        1.3.6 BRs對細胞伸長的影響
        1.3.7 BRs對果實發(fā)育成熟的影響
    1.4 乙烯對果實發(fā)育成熟的作用
    1.5 BRs與其他激素間的關(guān)聯(lián)
    1.6 酵母雙雜交技術(shù)原理
    1.7 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料與試劑
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 菌種及載體
        2.1.4 主要培養(yǎng)基及試劑配制方法
    2.2 試驗方法
        2.2.1 ‘南果梨’果實EBR處理
        2.2.2 ‘南果梨’果實1-MCP處理
        2.2.3 ‘南果梨’果實乙烯利處理
        2.2.4 ‘南果梨’果實硬度測定
        2.2.5 ‘南果梨’果實乙烯生成量測定
        2.2.6 ‘南果梨’果實總RNA提取
        2.2.7 RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.2.8 半定量PCR
        2.2.9 qRT-PCR
        2.2.10 BZR1基因克隆
        2.2.11 pGBKT_7-BZR1載體構(gòu)建及自激活檢驗
        2.2.12 ‘南果梨’酵母cDNA文庫構(gòu)建
        2.2.13 文庫質(zhì)量計算
        2.2.14 ‘南果梨’酵母雙雜交及共轉(zhuǎn)化驗證
3 結(jié)果與分析
    3.1 誘餌BZR1基因確定
        3.1.1 EBR處理后果實乙烯生成量變化
        3.1.2 乙烯利、1-MCP處理‘南果梨’果實后乙烯生成量及硬度變化
        3.1.3 BRs合成及信號轉(zhuǎn)導通路重要基因表達分析
        3.1.4 pGBKT_7-BZR1載體自激活檢驗
    3.2 ‘南果梨’果實cDNA文庫構(gòu)建
        3.2.1 ‘南果梨’果實各時期總RNA提取
        3.2.2 雙鏈cDNA合成與純化
        3.2.3 cDNA文庫構(gòu)建及庫質(zhì)量計算
        3.2.4 cDNA文庫插入片段大小檢測
    3.3 ‘南果梨’酵母雙雜交篩選
        3.3.1 雜交效率計算
        3.3.2 陽性克隆的篩選
        3.3.3 BZR1互作蛋白的共轉(zhuǎn)化驗證
        3.3.4 EBR處理后果實貯藏過程中ACO1相對表達量
4 討論
    4.1 EBR處理對果實成熟的影響
    4.2 乙烯利、1-MCP處理‘南果梨’果實后BZR1表達分析
    4.3 ‘南果梨’酵母cDNA文庫構(gòu)建
    4.4 酵母雙雜交篩選
5 全文結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]酵母雙雜交技術(shù)應用進展[J]. 王婷,葛懷娜,郭宏.  生物技術(shù)進展. 2015(05)
[2]轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控果實成熟和衰老機制研究進展[J]. 范中奇,鄺健飛,陸旺金,陳建業(yè).  園藝學報. 2015(09)
[3]干旱脅迫下棉花幼苗轉(zhuǎn)錄因子BES1/BZR1對外源油菜素內(nèi)酯的響應表達特征[J]. 安汶鎧,常丹,張富春.  西北植物學報. 2015(07)
[4]2,4-表油菜素內(nèi)酯（EBR）對網(wǎng)紋甜瓜光合特性和果實品質(zhì)的影響[J]. 石瑜,汪俏梅,葉紅霞,王翠,汪炳良.  核農(nóng)學報. 2015(05)
[5]油菜素內(nèi)酯的生物合成及信號轉(zhuǎn)導研究進展[J]. 熊書.  教育教學論壇. 2015(19)
[6]高通量轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)及其在鱗翅目昆蟲上的應用[J]. 楊帆,黃立華,張愛兵.  昆蟲學報. 2014(08)
[7]油菜素內(nèi)酯在植物生長發(fā)育中的作用機制研究進展[J]. 鄭潔,王磊.  中國農(nóng)業(yè)科技導報. 2014(01)
[8]油菜素甾醇信號轉(zhuǎn)導的調(diào)控機制[J]. 王斐,何偉,閆海芳.  植物生理學報. 2013(12)
[9]油菜素內(nèi)酯對火龍果果實生長和品質(zhì)的影響[J]. 李洪波,王俊寧,陳奕杰,李潤唐.  南方農(nóng)業(yè)學報. 2013(07)
[10]bzr1基因的轉(zhuǎn)化對番茄果實性狀的影響[J]. 李振,魏佳,賈承國,汪俏梅.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2010(09)

碩士論文
[1]蘋果ACC合成酶基因MdACS6在果實乙烯合成中的調(diào)控機制研究[D]. 李通.沈陽農(nóng)業(yè)大學 2014
[2]BZR1在番茄果實不同成熟時期表達水平鑒定[D]. 沈愛華.湖南農(nóng)業(yè)大學 2014
[3]油菜素內(nèi)酯（BR）與Ca2+/CaM信號轉(zhuǎn)導網(wǎng)絡的關(guān)系[D]. 黃新.河北農(nóng)業(yè)大學 2013



本文編號：3434322