發(fā)布時(shí)間：2021-10-13 08:39

　　果實(shí)貯藏時(shí)間的長(zhǎng)短與果實(shí)中乙烯釋放量的高低有著密切關(guān)系。‘南果梨’（Pyrus ussuriensis）是呼吸躍變型果實(shí),其果實(shí)成熟受乙烯調(diào)控,近年來較多研究報(bào)道證實(shí)了乙烯可以與BRs（油菜素甾醇）相互作用影響果實(shí)發(fā)育成熟及貯藏時(shí)間,但目前的研究不能明確乙烯與BRs間的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。我們發(fā)現(xiàn)用0.1 mg·L-1濃度的EBR（表油菜素甾醇）處理后‘南果梨’貯藏過程中乙烯生成量減少。為明確BRs與‘南果梨’果實(shí)貯藏間的關(guān)系,我們通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序發(fā)現(xiàn),在‘南果梨’成熟前后（成熟期及室溫貯藏10 d）5個(gè)BRs合成及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)基因BRU1-like, BES1/BZR1-like1, BES1/BZR1-like4, CYP450-90A1, BZR1表達(dá)存在差異。半定量PCR分析發(fā)現(xiàn)BZRl基因受乙烯抑制劑（1-MCP）的誘導(dǎo)。為了深入研究BZR1在果實(shí)成熟中的作用,我們構(gòu)建了‘南果梨’果實(shí)cDNA文庫(kù)并且以BZR1為誘餌進(jìn)行了酵母雙雜交篩選。主要結(jié)果如下：1.對(duì)‘南果梨’成熟前后轉(zhuǎn)錄組比較分析,發(fā)現(xiàn)5個(gè)BRs合成及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)基因（BRU1-like, BES1/BZR1-like1... 

【文章來源】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstracts
1 前言
    1.1 油菜素甾醇的研究進(jìn)展
    1.2 BRs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及通路元件
        1.2.1 BRs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
        1.2.2 BRs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的元件
    1.3 BRs與植物生長(zhǎng)發(fā)育研究進(jìn)展
        1.3.1 BRs對(duì)抗逆性的影響
        1.3.2 BRs對(duì)光形態(tài)建成的影響
        1.3.3 BRs對(duì)根系生長(zhǎng)的影響
        1.3.4 BRs對(duì)花期的影響
        1.3.5 BRs對(duì)衰老進(jìn)程的影響
        1.3.6 BRs對(duì)細(xì)胞伸長(zhǎng)的影響
        1.3.7 BRs對(duì)果實(shí)發(fā)育成熟的影響
    1.4 乙烯對(duì)果實(shí)發(fā)育成熟的作用
    1.5 BRs與其他激素間的關(guān)聯(lián)
    1.6 酵母雙雜交技術(shù)原理
    1.7 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料與試劑
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 菌種及載體
        2.1.4 主要培養(yǎng)基及試劑配制方法
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 ‘南果梨’果實(shí)EBR處理
        2.2.2 ‘南果梨’果實(shí)1-MCP處理
        2.2.3 ‘南果梨’果實(shí)乙烯利處理
        2.2.4 ‘南果梨’果實(shí)硬度測(cè)定
        2.2.5 ‘南果梨’果實(shí)乙烯生成量測(cè)定
        2.2.6 ‘南果梨’果實(shí)總RNA提取
        2.2.7 RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.2.8 半定量PCR
        2.2.9 qRT-PCR
        2.2.10 BZR1基因克隆
        2.2.11 pGBKT_7-BZR1載體構(gòu)建及自激活檢驗(yàn)
        2.2.12 ‘南果梨’酵母cDNA文庫(kù)構(gòu)建
        2.2.13 文庫(kù)質(zhì)量計(jì)算
        2.2.14 ‘南果梨’酵母雙雜交及共轉(zhuǎn)化驗(yàn)證
3 結(jié)果與分析
    3.1 誘餌BZR1基因確定
        3.1.1 EBR處理后果實(shí)乙烯生成量變化
        3.1.2 乙烯利、1-MCP處理‘南果梨’果實(shí)后乙烯生成量及硬度變化
        3.1.3 BRs合成及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路重要基因表達(dá)分析
        3.1.4 pGBKT_7-BZR1載體自激活檢驗(yàn)
    3.2 ‘南果梨’果實(shí)cDNA文庫(kù)構(gòu)建
        3.2.1 ‘南果梨’果實(shí)各時(shí)期總RNA提取
        3.2.2 雙鏈cDNA合成與純化
        3.2.3 cDNA文庫(kù)構(gòu)建及庫(kù)質(zhì)量計(jì)算
        3.2.4 cDNA文庫(kù)插入片段大小檢測(cè)
    3.3 ‘南果梨’酵母雙雜交篩選
        3.3.1 雜交效率計(jì)算
        3.3.2 陽(yáng)性克隆的篩選
        3.3.3 BZR1互作蛋白的共轉(zhuǎn)化驗(yàn)證
        3.3.4 EBR處理后果實(shí)貯藏過程中ACO1相對(duì)表達(dá)量
4 討論
    4.1 EBR處理對(duì)果實(shí)成熟的影響
    4.2 乙烯利、1-MCP處理‘南果梨’果實(shí)后BZR1表達(dá)分析
    4.3 ‘南果梨’酵母cDNA文庫(kù)構(gòu)建
    4.4 酵母雙雜交篩選
5 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]BZR1在番茄果實(shí)不同成熟時(shí)期表達(dá)水平鑒定[D]. 沈愛華.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
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本文編號(hào)：3434322