黃燈籠辣椒（Capsicum chinense）是海南省特有的辣椒品種,隨著種植業(yè)的不斷發(fā)展病毒病已成為海南黃燈籠辣椒減產(chǎn)的首要因素。甜椒脈斑駁病毒（Pepper veinal mottle virus,PVMV）屬于馬鈴薯Y病毒屬（Potyvirus）病毒,是制約海南辣椒產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要因素。Potyvirus病毒基因組5’端有1個稱作VPg（virus genome linked protein）的基因組連接蛋白,在病毒侵染寄主的過程中VPg和真核翻譯起始因子4E（eukaryotie translation initiation factor 4E,eIF4E）相互作用,是完成病毒侵染復(fù)制所需。本研究通過克隆黃燈籠辣椒eIF4E家族的4個基因,利用LexA-酵母雙雜交體系和雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)探索PVMV-VPg和黃燈籠辣椒eIF4E家族編碼蛋白的相互作用,為通過eIF4E進(jìn)行基因編輯,獲得抗病毒育種的新材料打下基礎(chǔ)。具體結(jié)果如下:（1）利用生物信息學(xué)技術(shù)找出eIF4E家族的所有基因,設(shè)計引物。以黃燈籠辣椒嫩葉作為實驗材料提取RNA,然后用RT-PCR方法擴(kuò)增4個eIF4E基因的OR... 

【文章來源】：海南大學(xué)海南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＰＶＭＶ病毒主要癥狀??Ｆｉｇ．ｌ?ｔｈｅ?ｍａｉｎ?ｓｙｍｐｔｏｍｓ?ｏｆ?Ｐｅｐｐｅｒ?ｖｅｉｎａｌ?ｍｏｔｔｌｅ?ｖｉｒｕｓ?ｉｎ?Ｈａｉｎａｎ??

其基因組為一條正義單鏈?ＲＮＡ?（ｓｉｎｇｌｅ?ｓｔｒａｎｄ?ＲＮＡ?ｏｆ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｓｅｎｓｅ，＋ｓｓＲＮＡ），??大小約為９．８?ｋｂ，可以編碼通過自身裂解方式成為多個己成熟的蛋白的多聚蛋白。馬??鈴薯Ｙ病毒屬病毒基因組結(jié)構(gòu)如圖２所示，各基因編碼蛋白如表１。ＰＶＭＶ的全基因??組序列包含９７９３ｎｔ，３＇端具有ｐｏｌｙ（Ａ）尾結(jié)構(gòu)，５＇端共價結(jié)合ＶＰｇ蛋白（＼％１１５。１＂（＾１１－??ｌｉｎｋｅｄ?ｇｅｎｏｍｉｃ）?（Ａｎｄｒｅｗ?ＭＱＫ．，２０１２；?Ｇｏ?ｒｓａｎｅＦ．，２００１；?Ｚｈａｎｇ?Ｓｅｔ?ａｌ．，?２０１５）。??ＰＶＭＶ與其它的馬鈴薯Ｙ病毒屬家族一樣，會在侵染的寄主細(xì)胞質(zhì)內(nèi)形成車輪狀的??病毒粒子包涵體結(jié)構(gòu)或者核內(nèi)涵體（Ｇｉｂｂｓ?Ａ?ｅｔａｌ．，２０１０）。??ｒ？?－ＵＴＲ?「＇Ｉ?ＨＣ－Ｐｒｏ?Ｐ３?Ｃｌ?ＶＰｇ?Ｎｌａ?Ｎｂ?ＣＰ?３．－ＬＴＲ??■一一《丄?１?ＩＩ?１１?Ｉ?Ｉ?１?－?Ｐ〇＾（Ａ）??＂＊〇?〇＞?Ｏｉ??３?５?Ｓ??圖２馬鈴薯Ｙ病毒屬基因組結(jié)構(gòu)??Ｆｉｇ２．Ｇｅｎｏｍｉｃ?ｍａｐ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｇｅｎｕｓ?Ｐｏｔｙｖｉｒｕｓ??表１馬鈴薯Ｙ病毒屬病毒所編碼蛋白的功能（Ｕｒｃｕｑｕｉ－Ｉｎｃｈｉｍａｅｔａｌ．，２００１；李向東等，２００６）??Ｔａｂｌｅｌ．?Ｔｈｅ?ｆｕｎｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｎｃｏｄｅｄ?ｂｙ?Ｐｏｔｊ＾ｉｒｕｓ．??蛋白質(zhì)??Ｔｉ?蛋白酶活性，病毒復(fù)制，移動，寄主癥狀表達(dá)，干擾寄主防御方應(yīng)??ＨＣ－Ｐｒｏ?蛋白酶活性，復(fù)制，蚜傳，移動，沉默抑制子，寄主癥狀顯示??Ｐ３?復(fù)制

圖３?ｅＥＦ４Ｅ家庭成員的進(jìn)化（Ｊｏｓｈｉ?Ｂ?ｅｔ?ａｌ．，２００５）??Ｆｉｇ．３?Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ?ｏｆ?ｅＩＦ４Ｅ?ｆａｍｉｌｙ?ｍｅｍｂｅｒｓ?（Ｊｏｓｈｉ?Ｂ?ｅｔ?ａｌ．，?２００５）??１．３．２?ｅＩＦ４Ｅ參與真核生物蛋白質(zhì)翻譯的起始??ｅＩＦ４Ｅ能夠和侵染寄主的病毒的５’端帽子結(jié)構(gòu)的特異位點交叉結(jié)合從而啟動??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]植物CRISPR/Cas9基因組編輯系統(tǒng)與突變分析[J]. 馬興亮,劉耀光.  遺傳. 2016(02)
[2]甜椒脈斑駁病毒（PVMV）在海南的發(fā)現(xiàn)與檢測[J]. 梁潔,王健華,章紹延,余乃通,張雨良,王祥,劉志昕.  熱帶作物學(xué)報. 2015(05)
[3]小麥黃花葉病毒編碼VPg蛋白N端結(jié)構(gòu)是VPg與核仁蛋白Fibrillarin互作區(qū)域[J]. 邊靚,向榮,孫麗英,陳劍平.  浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2014(01)
[4]雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)（BiFC）分析玉米SSⅠ與PPDK1之間的蛋白互作[J]. 崔喜艷,張繼曉,竇瑤,孫小杰,尹悅佳,劉相國.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2013(07)
[5]雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)及其在植物病毒學(xué)研究中的應(yīng)用[J]. 鄭紅英,燕飛,侯明生,陳劍平.  病毒學(xué)報. 2009(04)
[6]雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)[J]. 樊晉宇,崔宗強(qiáng),張先恩.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2008(08)
[7]真核翻譯起始因子4E[J]. 鄭志芳,朱世澤.  醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志. 2008(02)
[8]馬鈴薯Y病毒屬病毒基因功能研究進(jìn)展[J]. 李向東,于曉慶,古勤生,劉金亮,竺曉平,郭興啟.  山東科學(xué). 2006(03)
[9]3種辣椒新病毒的發(fā)生與血清學(xué)鑒定[J]. 馮蘭香,張寶璽,謝丙炎,王立浩,楊宇紅,毛勝利.  中國蔬菜. 2005(12)
[10]無抗性標(biāo)記基因轉(zhuǎn)基因植物研究進(jìn)展[J]. 張余洋,歐陽波,葉志彪.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2004(05)

博士論文
[1]辣椒病毒病研究[D]. 張竹青.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009

碩士論文
[1]香蕉束頂病毒（BBTV）NSP與其它組份編碼蛋白互作研究[D]. 王祥.海南大學(xué) 2015
[2]番木瓜eIF4E和eIFiso4E的克隆及其與PRSV-VPg互作研究[D]. 吳金燕.海南大學(xué) 2010



本文編號：3414048