獼猴桃（Actinidia sp.）是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)作物,已發(fā)現(xiàn)獼猴桃病毒病在我國(guó)有廣泛的發(fā)生。為明確侵染獼猴桃的病毒種類及其分子生物學(xué)特性,本研究采用常規(guī)RT-PCR結(jié)合小RNA（sRNA）測(cè)序和RNA測(cè)序（RNA-seq）技術(shù),對(duì)侵染獼猴桃的柑橘葉斑駁病毒（Citrus leaf blotch virus,CLBV）和一種新的長(zhǎng)線型病毒科病毒進(jìn)行了分子鑒定和分子特性研究,主要研究結(jié)果如下:1.2014-2015年,從湖北、云南、安徽、貴州、山東和福建6省份采集了 134株獼猴桃葉片樣品,所收集樣品多表現(xiàn)葉片褪綠斑駁、卷曲、花葉和脈黃等類似病毒病癥狀。采用CLBV特異性檢測(cè)引物CLBV1F/CLBV5R進(jìn)行該病毒的RT-PCR檢測(cè),17份樣品的檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性,平均檢出率為12.7%,從中華獼猴桃、美味獼猴桃和其他雜交種或野生種上均檢測(cè)到該病毒。2.設(shè)計(jì)了用于CLBV外殼蛋白基因（coat protein gene,cp）序列擴(kuò)增的引物,測(cè)定了 5個(gè)CLBV分離物的完整cp序列,全長(zhǎng)均為1092核苷酸（nt）,分離物間cp基因核苷酸和編碼氨基酸序列相似性分別為83.2%-99.7%和9... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１＜：１＾￥的基因組結(jié)構(gòu)示意圖（￥＾＾以《／．，２００１）??Ｍｔｒ：甲基轉(zhuǎn)移酶，ＡｌｋＢ：烷烴羥化酶，Ｐ－Ｐｒｏ：類木瓜蛋白酶，Ｈｅｌ：解旋酶，ＲｄＲｐ：?ＲＮＡ聚合酶，ＭＰ：??

＿Ｇ７８?ａｒｅ?ｉｓｏｌａｔｅｓ?ｒｅｆｅｒｒｅｄ?ｆｒｏｍ?ＧｅｎＢａｎｋ．??在基于該病毒印基因核苷酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)中（圖２．１－Ａ），除Ｍ３－Ａ單獨(dú)為??一分支外，本研宄所獲得ＣＬＢＶ獼猴桃分離物與新西蘭報(bào)道的獼猴桃其他分離物聚??為一組（組Ｉ），來(lái)自柑橘及其近緣種的分離物聚為另一組（組ＩＩ）。在組Ｉ中，ＡＨ１４??和Ｚ３與新西蘭報(bào)道的獼猴桃分離物親緣關(guān)系較近，ＡＨ１２，?Ｇ１５和ＡＨ１７則與這些??分離物親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。在基于該病毒ＣＰ氨基酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)中（圖２．１－Ｂ），??除來(lái)自柑橘及其近緣種的分離物聚在一組外

?華中農(nóng)業(yè)大學(xué)２０１６屆碩士研宄生學(xué)位（畢業(yè)）論文???第三章來(lái)源于稱猴桃的ＣＬＢＶ全基因組序列測(cè)定??美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心（ＮＣＢＩ）數(shù)據(jù)庫(kù)中總共收錄了?１０條ＣＬＢＶ的全基??因組序列，寄主分別來(lái)自法國(guó)柑橘、新西蘭獼猴桃、美國(guó)德維脫桔橙、新西蘭柑橘、??新西蘭檸檬。根據(jù)ＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)ＣＬＢＶ和序列分析結(jié)果，本研宄與己報(bào)道分離物序??列相似性較低，故本研宄選取感染ＣＬＢＶ分離物ＡＨ１７獼猴桃樣品為材料，結(jié)合高??通量測(cè)序和常規(guī)ＲＴ－ＰＣＲ技術(shù)對(duì)該樣品的ＣＬＢＶ全基因組進(jìn)行擴(kuò)增，并進(jìn)行序列分??析。??３．１試驗(yàn)材料??２０１４年６月在安徽六安采集表現(xiàn)明顯黃斑花葉癥狀和皺縮的中華獼猴桃“金艷”??葉片（圖３．１）。經(jīng)液氮速凍后，一部分送北京百邁克生物科技有限公司進(jìn)行�。遥危�??測(cè)序，其它樣品于－８０?°Ｃ超低溫保存，用于ＣＬＢＶ的全基因組擴(kuò)增。??


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