SWEETs（Sugars Will Eventually Be Exported Transporters）是一類糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,參與植物生物進(jìn)程,對植物生長發(fā)育、響應(yīng)各種脅迫、宿主-病原體的互作中發(fā)揮作用。SlSWEET12c和SlSWEET14屬于均屬于SWEETs家族CladeIII分支,主要轉(zhuǎn)運(yùn)蔗糖。為了更好的了解SlSWEET12c和SlSWEET14基因的功能,本研究以Micro-Tom（Solanum lycopersicum）番茄為試材,利用RT-PCR技術(shù)從果實(shí)中克隆出SlSWEET12c和Sl SWEET14基因全長編碼序列。利用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)探明其在果實(shí)成熟期的時(shí)空表達(dá)特征,并構(gòu)建基因的沉默和過表達(dá)載體,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的果實(shí)注射法進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)檢測構(gòu)建載體的表達(dá)效率;然后進(jìn)行番茄的遺傳轉(zhuǎn)化,獲得轉(zhuǎn)基因株系,利用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測SlSWEET12c和SlSWEET14的表達(dá),通過高效液相色譜法檢測轉(zhuǎn)基因源葉和果實(shí)中糖組成與含量的變化。主要研究結(jié)果如下:1)時(shí)空表達(dá)特征分析顯示,Sl SWEET12c基因在番茄果實(shí)成熟過程中紅熟期的表達(dá)最顯著,呈現(xiàn)上調(diào),紅熟期果... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

番茄果實(shí)成熟過程中不同部位SlSWEET12c的相對表達(dá)水平Fig.1TherelativeexpressionlevelofSlSWEET12catdifferentdevelopmentalstagesintomato以根為對照，每組數(shù)據(jù)進(jìn)行3次試驗(yàn)重復(fù).采用Statistics17.0軟件分析

圖 2 番茄果實(shí)成熟過程中不同部位 SlSWEET14 的相對表達(dá)水平Fig.2 The relative expression level of SlSWEET14 at different developmental stages in t3.2 SlSWEET12c 和 SlSWEET14 過表達(dá)載體的構(gòu)建與檢測3.2.1 SlSWEET12c 和 SlSWEET14 cDNA 全長的獲得根據(jù)已獲得的 SlSWEET12c 的 cDNA 全長，設(shè)計(jì)過表達(dá)引物 OE12c-F 和（引物序列見附錄 1），進(jìn)行 PCR 片段擴(kuò)增，獲得 1086 bp 的目的片段（圖用設(shè)計(jì)的過表達(dá)引物 OE14-F 和 OE14-R（引物序列見附錄 1），進(jìn)行 SlSWEET片段擴(kuò)增，電泳檢測獲得 1002 bp 的目的片段（圖 3-B）。將目的條帶進(jìn)行膠到的純化產(chǎn)物進(jìn)行測序，測序成功得到的序列用 NCBI 軟件進(jìn)行 Blast 分析，全長完全匹配。

圖 2 番茄果實(shí)成熟過程中不同部位 SlSWEET14 的相對表達(dá)水平Fig.2 The relative expression level of SlSWEET14 at different developmental stages in tomato3.2 SlSWEET12c 和 SlSWEET14 過表達(dá)載體的構(gòu)建與檢測3.2.1 SlSWEET12c 和 SlSWEET14 cDNA 全長的獲得根據(jù)已獲得的 SlSWEET12c 的 cDNA 全長，設(shè)計(jì)過表達(dá)引物 OE12c-F 和 OE12c-R（引物序列見附錄 1），進(jìn)行 PCR 片段擴(kuò)增，獲得 1086 bp 的目的片段（圖 3-A）。采用設(shè)計(jì)的過表達(dá)引物 OE14-F 和 OE14-R（引物序列見附錄 1），進(jìn)行 SlSWEET14 的 PCR片段擴(kuò)增，電泳檢測獲得 1002 bp 的目的片段（圖 3-B）。將目的條帶進(jìn)行膠回收，得到的純化產(chǎn)物進(jìn)行測序，測序成功得到的序列用 NCBI 軟件進(jìn)行 Blast 分析，與 cDNA全長完全匹配。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3404481