香蕉枯萎病是一種由尖孢鐮刀菌古巴專化型（Fusarium oxysporumfsp.cubense）侵染引起的典型土傳維管束病害,對(duì)我國香蕉產(chǎn)業(yè)造成嚴(yán)重危害,目前尚無有效的防治方法。以生防為主,結(jié)合抗病品種栽培的綜合防治技術(shù)在生產(chǎn)上陸續(xù)取得成效,而篩選有效的針對(duì)香蕉枯萎病的拮抗菌株成為生防成功的關(guān)鍵因子。植物內(nèi)生放線菌能產(chǎn)生多種具有生物活性的次級(jí)代謝產(chǎn)物,在植物病害生物防治、新型殺菌劑開發(fā)等領(lǐng)域具備巨大潛力,是一種極具開發(fā)價(jià)值的微生物資源。本文從我國云南藥用密毛山梗菜（Lobeliaclavata）植株中進(jìn)行內(nèi)生放線菌的分離,以尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporium f.sp. cubense4,FOC4）為靶標(biāo)菌進(jìn)行拮抗菌篩選,并根據(jù)形態(tài)特征、培養(yǎng)性狀、生理生化特征、16SrDNA序列分析對(duì)其進(jìn)行鑒定,同時(shí)對(duì)其發(fā)酵工藝條件參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,以期為菌株的推廣應(yīng)用提供技術(shù)支持和理論依據(jù)。主要實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果如下:（1）內(nèi)生放線菌的分離與篩選:采用稀釋平板分離法,根據(jù)菌株在分離培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)及顏色,純化獲得126株內(nèi)生放線菌;經(jīng)平板對(duì)峙培養(yǎng)法篩選,得到產(chǎn)生抑菌圈直徑較大的2株放線菌... 

【文章來源】：海南大學(xué)海南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

內(nèi)生放線菌的分離與篩選

?ｗｍ?ＷｍＭ??圖３－２?ＤＪ１５和ＸＬ＆１菌株在不同培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)??Ｆｉｇ．?３－２?Ｔｈｅ?ｃｏｌｏｎｉｅｓ?ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＤＪ１５?ａｎｄ?ＸＬＧ－ｌｓｔｒａｉｎｓ?ｏｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｍｅｄｉａｓ??注：Ａ、Ｂ、Ｃ表示ＤＪ１５分別在ＩＳＰ４、ＩＳＰ５、ＩＳＰ６培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)；Ｄ、Ｅ、Ｆ表示ＸＬＧ－１??在ＩＳＰ３、ＩＳＰ５、ＩＳＰ７培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)。??Ｎｏｔｅ：?Ａ，?Ｂ?ａｎｄ?Ｃ?ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ?ｃｏｌｏｎｉｅｓ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃ?ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ?ｏｆ?ＤＪＩ?５?ｏｎ?ＩＳＰ４，??ＩＳＰ５?ａｎｄ?ＩＳＰ６?ｍｅｄｉｕｍ；?Ｄ，?Ｅ?ａｎｄ?Ｆ?ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ?ｃｏｌｏｎｉｅｓ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃ?ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ?ｏｆ??ＸＬＧ－１?ｏｎ?ＩＳＰ３，?ＩＳＰ５?ａｎｄ?ＩＳＰ７?ｍｅｄｉｕｍ．??３．２．２掃描電鏡形態(tài)特征??ＭＢ??｜?ＢＩＴ－?４ＸＫＶＪ?ＳｇｍｌＡ－ＳＥ２?ＤａｔａＤ?Ｆａｂ２０１６?■產(chǎn)＞—

??圖３－４菌株的生理生化特征??Ｆｉｇ．?３－４?Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ?ａｎｄ?ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ?ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｓｔｒａｉｎｓ??注：Ａ為ＤＪ１５淀粉水解Ｂ為ＤＪ１５明膠液化Ｃ為ＤＪ１５脲酶實(shí)驗(yàn)Ｄ為ＸＬＧ－ｌ硝酸鹽還原Ｅ??為ＸＬＧ－１脂酶實(shí)驗(yàn)（吐溫８０）??３．２．４分子生物學(xué)鑒定??（１）?１６ＳｒＤＮＡ基因序列分析??以放線菌的總ＤＮＡ作為模板，利用通用引物進(jìn)行１６Ｓ?ｒＤＮＡ的ＰＣＲ擴(kuò)增得到了??一條１５００?ｂｐ左右的條帶，與預(yù)期條帶大小相符，其凝膠電泳圖片見圖３－５所示。??圖３－５菌株１６Ｓ?ｒＤＮＡ擴(kuò)增電泳圖??Ｆｉｇ．?３－５?Ｔｈｅ?ａｇｒｏｓｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?１６Ｓ?ｒＤＮＡ?ｏｆ?ＤＪ１５?ａｎｄ?ＸＬＧ－１??２４??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]香蕉根際土壤解鉀放線菌的篩選鑒定及解鉀特性研究[J]. 陳宇豐,柯春亮,周登博,高祝芬,戚春林,張錫炎.  生物技術(shù)通報(bào). 2015(06)
[2]白刺鏈霉菌（Streptomyces albospinus）CT205菌株發(fā)酵條件優(yōu)化及其次生代謝產(chǎn)物性質(zhì)研究[J]. 王辰,張谷月,張園園,沈婷,王世梅.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(02)
[3]香蕉根際土壤解磷細(xì)菌的篩選、鑒定及解磷能力[J]. 柯春亮,陳宇豐,周登博,黃綿佳,張錫炎,高祝芬.  微生物學(xué)通報(bào). 2015(06)
[4]生物有機(jī)肥施用期對(duì)香蕉枯萎病及土壤微生物的影響[J]. 丁文娟,曹群,趙蘭鳳,劉小峰,柳影,楊盼盼,李華興.  農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào). 2014(08)
[5]兩株抗香蕉枯萎病生防菌的篩選與生防效應(yīng)研究[J]. 戴青冬,汪軍,邢益范,陳平亞,毛超,王飛燕,黃俊生.  廣東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(11)
[6]現(xiàn)代生物技術(shù)在抗生素生產(chǎn)中的應(yīng)用[J]. 李緒友.  武漢工程大學(xué)學(xué)報(bào). 2014(01)
[7]枯草芽孢桿菌CS16誘導(dǎo)香蕉抗病性相關(guān)防御酶系的研究[J]. 林陳強(qiáng),李占飛,張慧,林戎斌,林新堅(jiān),陳濟(jì)琛.  福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2013(06)
[8]菌株BM-24的分離鑒定及對(duì)香蕉枯萎病菌的抑菌活性[J]. 黃霄,陳波,周登博,譚昕,張錫炎.  植物保護(hù)學(xué)報(bào). 2013(02)
[9]鹽生海蘆筍內(nèi)生真菌S19的分離鑒定與抗氧化發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 趙育卉,李連強(qiáng),湛東銳,王惠,劉天行,辛志宏.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2013(02)
[10]虎杖內(nèi)生放線菌的分離鑒定及抗菌活性[J]. 孔亞男,陳文強(qiáng),鄧百萬,解修超,彭浩,張晶晶,劉兆迪,劉小紅.  福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2012(06)

博士論文
[1]作物枯萎病生防細(xì)菌的研究[D]. 郝曉娟.浙江大學(xué) 2006

碩士論文
[1]白僵菌和綠僵菌對(duì)幾種植物病原真菌的拮抗作用研究[D]. 夏龍蓀.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3388934