葡萄作為一種重要的世界性經(jīng)濟(jì)果樹,在國內(nèi)外廣泛栽培。但是具有優(yōu)良品質(zhì)的歐洲葡萄通常比較容易感染多種病原菌。常規(guī)雜交育種可以培育出抗病優(yōu)質(zhì)的葡萄新品種,但育種周期長(zhǎng)、見效慢,而且雜交后代性狀分離復(fù)雜多樣。通過基因工程手段改良葡萄的抗病性逐漸受到廣泛的關(guān)注和重視。WRKY轉(zhuǎn)錄因子是近年來新發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,與低溫、干旱等非生物脅迫和一些病原菌引起的生物脅迫密切相關(guān)。本研究從中國野生毛葡萄‘商-24’中克隆了抗病相關(guān)基因VqWRKY3,構(gòu)建了異源表達(dá)載體轉(zhuǎn)化擬南芥,并對(duì)轉(zhuǎn)基因擬南芥進(jìn)行抗病功能研究。取得的主要結(jié)果如下:1.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析了VqWRKY3在中國野生毛葡萄‘商-24’受白粉病處理后葉片中的表達(dá)情況。結(jié)果表明VqWRKY3基因可受葡萄白粉菌誘導(dǎo)表達(dá)上調(diào),在處理24h基因表達(dá)量達(dá)到峰值,處理24h后表達(dá)下降。分析VqWRKY3基因在中國野生毛葡萄‘商-24’不同組織器官的表達(dá)情況。結(jié)果表明,VqWRKY3在根、莖、葉、花、卷須、果實(shí)等不同組織中均有表達(dá),在根和卷須中的表達(dá)量較高,在花中的表達(dá)量次之,而在莖、葉和果實(shí)中的表達(dá)量較最低。2.采用同源序列法從中國野生毛葡萄... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 植物抗病機(jī)制
    1.2 植物中轉(zhuǎn)錄因子的研究
    1.3 WRKY轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展
        1.3.1 WRKY轉(zhuǎn)錄因子概述
        1.3.2 WRKY轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        1.3.3 WRKY轉(zhuǎn)錄因子的分類與進(jìn)化
        1.3.4 WRKY轉(zhuǎn)錄因子的功能
        1.3.5 WRKY轉(zhuǎn)錄因子在不同物種全基因組范圍內(nèi)的研究
    1.4 葡萄WRKY轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展
    1.5 研究的目的和意義
第二章 VqWRKY3基因克隆及表達(dá)分析
    2.1 材料
        2.1.1 葡萄材料
        2.1.2 引物
        2.1.3 試劑、儀器設(shè)備
        2.1.4 質(zhì)粒及菌種
    2.2 方法
        2.2.1 材料處理
        2.2.2 總RNA的提取及cDNA第一鏈的合成
        2.2.3 白粉菌處理后葡萄VqWRKY3基因的表達(dá)模式分析
        2.2.4 VqWRKY3基因克隆及測(cè)序
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 VqWRKY3在不同組織器官中的表達(dá)分析
        2.3.2 VqWRKY3在白粉菌處理后的表達(dá)模式分析
        2.3.3 VqWRKY3基因克隆與序列比對(duì)
    2.4 討論
第三章 VqWRKY3轉(zhuǎn)基因擬南芥抗病功能研究
    3.1 材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 病原菌
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要儀器
        3.1.5 質(zhì)粒及菌種
    3.2 方法
        3.2.1 VqWRKY3植物過量表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.2 GV3101農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備
        3.2.3 VqWRKY3植物過量表達(dá)載體電擊轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌感受態(tài)GV3101
        3.2.4 菌液PCR檢測(cè)
        3.2.5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的擬南芥轉(zhuǎn)化
        3.2.6 轉(zhuǎn)基因擬南芥鑒定及株系篩選
        3.2.7 轉(zhuǎn)基因擬南芥抗病性鑒定
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 VqWRKY3植物過量表達(dá)載體構(gòu)建
        3.3.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥陽性植株的獲得及抗病株系篩選
        3.3.3 VqWRKY3轉(zhuǎn)基因擬南芥對(duì)擬南芥白粉病的抗性分析
        3.3.4 VqWRKY3轉(zhuǎn)基因擬南芥對(duì)PstDC3000的抗性分析
        3.3.5 VqWRKY3轉(zhuǎn)基因擬南芥對(duì)灰霉病的抗性分析
        3.3.6 PAMP處理后VqWRKY3轉(zhuǎn)基因擬南芥胼胝質(zhì)的積累情況
    3.4 討論
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3379023