發(fā)布時(shí)間：2021-08-11 22:58

　　辣椒、大蒜均具有較高的營養(yǎng)價(jià)值和獨(dú)特的風(fēng)味,是蔬菜作物和調(diào)味品之一,但辣椒病毒病廣泛發(fā)生,造成減產(chǎn)30%-50%甚至絕收；大蒜無性繁殖過程中病毒可在植物體內(nèi)逐代積累,導(dǎo)致種性退化。辣椒、大蒜的病毒病防治,需要有快速、有效的檢測方法,以確定病毒感染情況或脫毒效果與質(zhì)量。本研究以辣椒的煙草花葉病毒（Tobacco Mosaic Virus,TMW）、黃瓜花葉病毒（Cucumber Mosaic Virus, CMV）、馬鈴薯Y病毒（Potato Virus Y, PVY）、蠶豆萎蔫病毒-2 （Broad Bean Vascula Wilt Virus-2, BBWV-2）和大蒜的韭蔥黃條病毒（Leek Yellow Stripe Virus, LYSV）、洋蔥黃矮病毒（Onion Yellow Dwarf Virus, OYDV）、蔥潛隱病毒（Shallot Latent Virus, SLV）、青蔥X病毒屬病毒（Allexiviruses）為研究對象,分別建立了四重RT-PCR檢測體系,并用這兩個(gè)體系分別對湖南辣椒、大蒜病毒發(fā)生情況進(jìn)行了研究。此外,對湖南長沙、茶陵Allexivirus... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

疑似感病辣椒FYg1symptomofsuspectedpepper

２．３．１辣椒葉片總ＲＮＡ提取??Ｗ湖南省長沙市湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)蔬菜基地、株洲市體陵縣辣椒主產(chǎn)區(qū)疑似感病辣椒??葉片為材料（圖１），提取總ＲＮＡ，通過１．２％的瓊脂糖凝膠電泳檢測提取結(jié)果（圖２），??結(jié)果表明，能清晰地看到總ＲＮＡ的２８Ｓ、１８Ｓ條帶，且條帶沒有出現(xiàn)明顯彌散，ＲＮＡ完??整性較好，能被后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。??Ｈ??圖１疑似感病辣椒??Ｆｉｇ?１?ｓｙｍｐ化ｍ?ｏｆ?ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ?ｐｅｐｐｅｒ??１７??

椒病毒單重ＲＴ－ＰＣ民檢測體系的建立??據(jù)北京全式金生物有限公司ＰＣＲ擴(kuò)增試劑２?Ｘ?Ｔａｑ?Ｍａｓｔｅｒ?Ｍｉｘ常用的ＰＣＲ反應(yīng)體??行辣椒ＴＳＷＶ、ＣＭＶ、ＴＭＶ、ＰＶＹ和ＢＢＷＶ－２單重ＰＣＲ擴(kuò)增，針對擴(kuò)增的結(jié)果，??ＰＣＲ反應(yīng)的種種因素（如ＰＣＲ反應(yīng)循環(huán)數(shù)、引物濃度等）進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，由不度的實(shí)驗(yàn)得出最適宜的退火溫度，通過比較試驗(yàn)結(jié)果確定最佳單重ＰＣＲ反應(yīng)體??序。單重ＰＣＲ體系組分包括２ＸＴａｑ?Ｍａｓｔｅｒ?Ｍｉｘ?１２．５?ＵＬ，上、下游特異性引物??，模板ＣＤＮＡ２?＂Ｌ，?ｄｄＥｂＱ補(bǔ)足至２５?ＵＬ。單重ＰＣ民反應(yīng)程序?yàn)�；９�?#176;Ｃ預(yù)變９４°Ｃ變性３０ｓ；?５７’Ｃ退火３０ｓ；?７２°Ｃ延伸Ｉｍｉｎ；循環(huán)數(shù)為３５；最后７２°Ｃ延伸ｌＯｍｉｎ用該體系對疑似感病辣椒樣品進(jìn)行單重ＲＴ－ＰＣＲ擴(kuò)增，單重ＰＣ民擴(kuò)增引物序列果表明，不能從樣品中擴(kuò)增出大小為２５化Ｐ?（ＴＳＷＶ）的特異性條帶，能擴(kuò)增??為３２３ｂｐ?（ＣＭＶ）、２巧?ｂｐ?（ＴＭＶ）、４８０ｂｐ?（ＰＶＹ）和?１０５７ｂｐ?（ＢＢＷＶ－２）條帶，條帶大小與試驗(yàn)設(shè)計(jì)相符，見圖３、４、５、６，說明樣品未被ＴＳＷＶ侵染，ＣＭＶ、ＴＭＶ、ＰＶＹ和ＢＢＷＶ－２侵染。運(yùn)用該體系篩選出被ＣＭＶ、ＴＭＶ、ＰＶＹ??Ｖ－２四種病毒復(fù)合侵染的辣椒樣品。??Ｍ?１?２?３?４?５?６?７??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]貴州辣椒病毒病的種類檢測[J]. 王莉爽,陳文,譚清群,陳小均,吳石平,何海永,楊學(xué)輝.  貴州農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(08)
[2]甜椒脈斑駁病毒（PVMV）在海南的發(fā)現(xiàn)與檢測[J]. 梁潔,王健華,章紹延,余乃通,張雨良,王祥,劉志昕.  熱帶作物學(xué)報(bào). 2015(05)
[3]重慶辣椒病毒病病原初步鑒定和分析[J]. 郭思瑤,童艷,黃婭,羅信福,青玲.  園藝學(xué)報(bào). 2015(02)
[4]2.0%好普水劑防治辣椒病毒病的效果[J]. 張春冬.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(04)
[5]幾種新疆加工型辣椒種子病毒的檢測和鑒定[J]. 張強(qiáng),羅明,李克梅,張春竹,楚金平,馬建江.  西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2014(06)
[6]辣椒抗黃瓜花葉病毒病研究進(jìn)展[J]. 郭廣君,刁衛(wèi)平,劉金兵,潘寶貴,戈偉,王述彬.  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2014(S1)
[7]辣椒輕斑駁病毒（PMMoV）新疆加工型辣椒分離物的鑒定和致病型分析[J]. 張強(qiáng),張春竹,李克梅,羅明,楚金平.  中國農(nóng)學(xué)通報(bào). 2014(25)
[8]大蒜X病毒逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測方法的建立[J]. 趙桐,李長紅,周前進(jìn),陳先鋒,陳炯,陳劍平.  浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2013(06)
[9]辣椒病毒病發(fā)生的綜合治理[J]. 陳言.  蔬菜. 2013(09)
[10]中國馬鈴薯Y病毒的檢測鑒定及CP基因的分子變異[J]. 高芳鑾,沈建國,史鳳陽,方治國,謝聯(lián)輝,詹家綏.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(15)

碩士論文
[1]重慶辣椒病毒病的病原鑒定及多重RT-PCR檢測體系的構(gòu)建[D]. 黃婭.西南大學(xué) 2015
[2]新疆辣椒和茄子上兩種病毒的分子鑒定[D]. 張建云.石河子大學(xué) 2013
[3]三種大蒜病毒的RT-PCR及多重RT-PCR檢測研究[D]. 許蕊.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[4]大蒜莖尖脫毒體系的建立與病毒電鏡檢測分析[D]. 馬雯.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[5]北疆大蒜病毒病的調(diào)查和洋蔥黃矮病毒的鑒定及序列分析[D]. 陳棟.石河子大學(xué) 2008



本文編號：3337060