發(fā)布時(shí)間：2021-08-09 16:56

　　表皮蠟質(zhì)的合成過程分為�；�原和脫羰基兩個(gè)途徑,其中CER4、WSD1基因參與了�；�原途徑,MAH1基因參與了脫羰基途徑。本文以紅星蘋果（Malus domestica Borkh c.v.Starkring）作為實(shí)驗(yàn)材料,克隆了MdWSD1、MdMAH1和MdCER4基因,預(yù)測(cè)了其生物學(xué)功能;研究了其在蘋果發(fā)育期和貯藏期的表達(dá)模式,檢測(cè)了發(fā)育期和貯藏期蘋果蠟質(zhì)成分和含量的變化;通過1-甲基環(huán)丙烯（1-methylcyclopropene,1-MCP）和乙烯利（ethrel,ETH）處理,研究了采前和采后乙烯調(diào)控對(duì)MdWSD1、MdMAH1、MdCER4基因表達(dá)的影響。主要結(jié)果如下:1、克隆了MdWSD1、MdMAH1、MdCER4基因片段的序列,長(zhǎng)度分別為578 bp、500 bp和509 bp,然后通過與蘋果基因組數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì),獲得三種目的基因的全長(zhǎng)序列。生物學(xué)信息分析表明:MdWSD1基因序列全長(zhǎng)2622 bp,其蛋白具有WES-acyl transf和acyl-WS-DGAT兩個(gè)蛋白保守區(qū),前者編碼蠟質(zhì)合成酶-�；鵆o A轉(zhuǎn)移酶,后者編碼酰基轉(zhuǎn)移酶;MdMAH1基因序列全長(zhǎng)21... 

【文章來(lái)源】：山東理工大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 VLCFAS的合成及相關(guān)基因
        1.1.1 VLCFAs的合成
        1.1.2 VLCFAs合成相關(guān)基因
    1.2 植物表皮蠟質(zhì)的合成及相關(guān)基因
        1.2.1 與脫羰基途徑相關(guān)的基因
        1.2.2 與�；�原途徑相關(guān)的基因
    1.3 表皮蠟質(zhì)合成調(diào)控相關(guān)基因
    1.4 表皮蠟質(zhì)分泌相關(guān)基因
    1.5 乙烯參與蠟質(zhì)合成代謝調(diào)控的研究進(jìn)展
    1.6 本課題研究的意義
第二章 Md WSD1、Md MAH1、Md CER4基因的克隆
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.1.2 儀器設(shè)備
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1.3.1 總RNA的提取
            2.1.3.2 反轉(zhuǎn)錄為cDNA
            2.1.3.3 引物的設(shè)計(jì)
            2.1.3.4 目的基因PCR擴(kuò)增
            2.1.3.5 總RNA質(zhì)量檢測(cè)
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 MdWSD1、Md MAH1、Md CER4基因的克隆
        2.2.2 Md WSD1、Md MAH1、Md CER4基因序列分析
        2.2.3 Md WSD1、Md MAH1、Md CER4基因的生物學(xué)信息分析
            2.2.3.1 Md WSD1、Md MAH1、Md CER4基因全長(zhǎng)的獲得
            2.2.3.2 Md WSD1、Md MAH1、Md CER4基因推導(dǎo)的氨基酸序列
            2.2.3.3 Md WSD1、Md MAH1、Md CER4基因同源性分析
            2.2.3.4 蛋白質(zhì)親水性和疏水性分析
            2.2.3.5 Md WSD1、Md MAH1、Md CER4基因開放閱讀框
            2.2.3.6 Md WSD1、Md MAH1、Md CER4基因蛋白結(jié)構(gòu)域的預(yù)測(cè)與分析
    2.3 小結(jié)
第三章 Md WSD1、Md MAH1和Md CER4在蘋果發(fā)育及貯藏期表達(dá)模式研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        3.1.2 儀器設(shè)備
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)方案
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
            3.1.4.1 總RNA的提取
            3.1.4.2 反轉(zhuǎn)錄為cDNA
            3.1.4.3 實(shí)時(shí)引物的設(shè)計(jì)
            3.1.4.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            3.1.4.5 蠟質(zhì)提取、衍生及測(cè)定
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.2.1 發(fā)育期Md WSD1、Md MAH1、Md CER4基因的相對(duì)表達(dá)量
        3.2.2 貯藏期MdWSD1、Md MAH1、Md CER4基因的相對(duì)表達(dá)量
    3.3 發(fā)育期和貯藏期紅星蘋果表皮蠟質(zhì)質(zhì)量分布密度及成分的變化
    3.4 小結(jié)
第四章 乙烯對(duì)采前蘋果品質(zhì)及Md WSD1、Md MAH1、Md CER4基因表達(dá)的影響
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與處理
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)方案
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.4 儀器設(shè)備
        4.1.5 實(shí)驗(yàn)方法
            4.1.5.1 總RNA的提取
            4.1.5.2 反轉(zhuǎn)錄為cDNA
            4.1.5.3 實(shí)時(shí)引物的設(shè)計(jì)
            4.1.5.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            4.1.5.5 果肉硬度的測(cè)定
            4.1.5.6 可溶性固形物含量（SSC）的測(cè)定
            4.1.5.7 可滴定酸（TA）含量的測(cè)定
            4.1.5.8 蠟質(zhì)的提取、衍生及測(cè)定
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 采前調(diào)控乙烯對(duì)果實(shí)理化性質(zhì)的影響
            4.2.1.1 對(duì)坐果率的影響
            4.2.1.2 對(duì)蘋果果實(shí)發(fā)育期生理指標(biāo)的影響
        4.2.2 采前調(diào)控乙烯對(duì)紅星蘋果發(fā)育期表皮蠟質(zhì)質(zhì)量分布密度及成分的影響
        4.2.3 采前乙烯處理后Md WSD1、Md MAH1、Md CER4基因的相對(duì)表達(dá)量
    4.3 小結(jié)
第五章 乙烯調(diào)控對(duì)采后果實(shí)蠟質(zhì)合成基因表達(dá)的影響
    5.1 材料與方法
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與處理
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)方案
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        5.1.4 儀器設(shè)備
        5.1.5 實(shí)驗(yàn)方法
            5.1.5.1 總RNA的提取
            5.1.5.2 反轉(zhuǎn)錄為cDNA
            5.1.5.3 實(shí)時(shí)引物的設(shè)計(jì)
            5.1.5.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            5.1.5.5 蠟質(zhì)的提取、衍生及測(cè)定
    5.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        5.2.1 貯藏期調(diào)控乙烯對(duì)紅星蘋果表皮蠟質(zhì)質(zhì)量分布密度及成分的影響
        5.2.2 貯藏過程中Md WSD1、Md MAH1、Md CER4基因的相對(duì)表達(dá)量
    5.3 小結(jié)
第六章 結(jié)論
第七章 討論
    7.1 采前乙烯調(diào)控對(duì)蘋果果實(shí)品質(zhì)的影響
    7.2 MdWSD1、MdMAH1、MdCER4基因的克隆
    7.3 發(fā)育期及貯藏期Md WSD1、Md MAH1、Md CER4基因的相對(duì)表達(dá)量
    7.4 乙烯調(diào)控對(duì)紅星蘋果果實(shí)表皮蠟質(zhì)合成相關(guān)基因表達(dá)的影響
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
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本文編號(hào)：3332448