糙皮側(cè)耳（P.ostreatus）是我國(guó)栽培量最廣、消費(fèi)量最大的食用菌。糙皮側(cè)耳子實(shí)體成熟過程中會(huì)彈射大量孢子,數(shù)量巨大的孢子不僅會(huì)降低子實(shí)體的品質(zhì),還會(huì)引起菇農(nóng)的“蘑菇肺”。選育無孢糙皮側(cè)耳菌株對(duì)解決孢子引起的過敏反應(yīng)具有重要作用。本文將肺形側(cè)耳（Pleurotus pulmonarius）產(chǎn)孢相關(guān)基因stpp1的基因序列,與糙皮側(cè)耳轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì),得到糙皮側(cè)耳中與其同源的基因,并將獲得的基因命名為stpo1。通過反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）的方法,克隆得到了stpo1的CDS全長(zhǎng)序列;對(duì)目的基因進(jìn)行了生物信息學(xué)分析;在轉(zhuǎn)錄水平對(duì)stpo1進(jìn)行表達(dá)模式分析;利用pEASY-E2原核表達(dá)系統(tǒng)對(duì)stpo1進(jìn)行原核表達(dá);構(gòu)建了糙皮側(cè)耳stpo1過表達(dá)以及RNA干擾表達(dá)載體,以期通過對(duì)stpo1基因過表達(dá)或者沉默來研究stpo1基因與糙皮側(cè)耳孢子形成的關(guān)系。本文主要研究結(jié)果如下:1、以糙皮側(cè)耳子實(shí)體為材料,采用反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)克隆出糙皮側(cè)耳產(chǎn)孢相關(guān)基因stpo1的CDS區(qū)（長(zhǎng)度為2,556 bp）;并以基因組為模板克隆出該基因的gDNA（長(zhǎng)度為3,853 bp）。Genbank登錄號(hào)為... 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

stpp1與PC9v1.0、PC15v2.0同源基因Clustal比對(duì)結(jié)果

15圖3.2stpp1cDNA、PC9v1.0同源基因、PC15v2.0同源基因NCBIBlast結(jié)果Fig.3.2NCBIBlastofstpp1cDNA、PC9v1.0cDNA、PC15v2.0cDNA圖3.3肺形側(cè)耳stpp1與糙皮側(cè)耳轉(zhuǎn)錄組比對(duì)結(jié)果，藍(lán)框?yàn)檫x取部分Fig.3.3Blastofstpp1andP.ostreatustranscripts，bluepartasselected3.2.1.3cDNA第一條鏈的合成利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈，用作后續(xù)PCR擴(kuò)增的模板。去除基因組DNA（冰上配制）：在處理過的無RNase的微管中加入以下試劑：gDNAEraser1.0μL5xgDNAEraserBuffer2.0μLTotalRNA不超過1μgRNaseFreeH2O補(bǔ)足至10μL短暫離心，在42℃下孵育2min；cDNA第一條鏈的合成（冰上操作）：去基因組反應(yīng)液10μLPrimeScriptRTEnzymeMixI1.0μLRTPrimerMix1.0μL5xPrimeScriptBuffer24μLRNaseFreeH2O4μL37℃孵育15min，85℃5s終止反應(yīng)，迅速放回冰上，-20℃儲(chǔ)存少于一周，長(zhǎng)期保存應(yīng)置于-80℃。3.2.4糙皮側(cè)耳stpo1基因部分片段的擴(kuò)增基因片段PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系為：

肺形側(cè)耳stpp1與糙皮側(cè)耳轉(zhuǎn)錄組比對(duì)結(jié)果，藍(lán)框?yàn)檫x取部分

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3311725