前期通過抑制差減雜交技術(shù)（Suppression Subtractive Hybridization,SSH）獲得一個(gè)412bp的cDNA片段,為探索該目標(biāo)片段的全長序列信息、在大白菜中的表達(dá)模式,并預(yù)測其生物學(xué)功能,本研究利用同源克隆擴(kuò)增目標(biāo)基因全長,利用實(shí)時(shí)熒光定量（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）、原位雜交、啟動(dòng)子特異表達(dá)等方法分析目標(biāo)基因時(shí)空表達(dá)模式。得到如下結(jié)果:1.將利用SSH技術(shù)在復(fù)等位基因控制的大白菜核雄性不育系中發(fā)現(xiàn)的育性相關(guān)片段與大白菜全基因組比對,發(fā)現(xiàn)該片段與Bra001504同源性最高。2.經(jīng)同源克隆獲得候選基因cDNA全長序列,1656bp的核苷酸序列。分析其最大開放閱讀框,發(fā)現(xiàn)該基因的表達(dá)產(chǎn)物是一個(gè)包含551個(gè)氨基酸殘基、分子量約為61.87KDa、等電點(diǎn)為9.28、且具有信號肽序列的分泌蛋白,無明顯跨膜結(jié)構(gòu)域。該蛋白還包含三個(gè)Cupredoxin suprefamily保守結(jié)構(gòu)域,其中第一和第三個(gè)保守結(jié)構(gòu)域由于沒有特定的組氨酸殘基已經(jīng)失去多銅氧化酶家族結(jié)合銅離子的生物學(xué)功能,第二個(gè)保守結(jié)構(gòu)域還保有結(jié)合銅離子的能力,因此... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 植物雄性不育的研究進(jìn)展
        1.1.1 植物雄性不育的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 白菜雄性不育類型研究及應(yīng)用
    1.2 花藥和花粉發(fā)育過程相關(guān)基因研究進(jìn)展
        1.2.1 花藥發(fā)育及小孢子發(fā)生研究
        1.2.2 小孢子發(fā)育研究
        1.2.3 花粉成熟及花粉壁開裂
    1.3 多銅氧化酶及其亞家族SKS的研究進(jìn)展
        1.3.1 多銅氧化酶各亞家族的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        1.3.2 多銅氧化酶的生物學(xué)功能研究
        1.3.3 SKS基因家族研究進(jìn)展
    1.4 研究目的與意義
第二章 大白菜花粉發(fā)育相關(guān)基因BrSKS13的克隆與分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 目的片段序列比對分析
        2.1.3 花蕾總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        2.1.4 候選基因RT-PCR驗(yàn)證
        2.1.5 大白菜候選基因序列的克隆測序
        2.1.6 候選基因序列分析及蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測
        2.1.7 候選基因系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建及同源比對分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 目標(biāo)片段Blast結(jié)果
        2.2.2 總RNA提取結(jié)果
        2.2.3 候選基因RT-PCR驗(yàn)證
        2.2.4 大白菜候選基因的核苷酸序列及開放閱讀框
        2.2.5 候選基因的蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測
        2.2.6 候選基因系統(tǒng)進(jìn)化樹及同源比對
    2.3 小結(jié)
第三章 大白菜花粉發(fā)育相關(guān)基因BrSKS13的時(shí)空表達(dá)分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 qRT-PCR分析BrSKS13在大白菜中的表達(dá)模式
        3.1.3 大白菜可育株Ⅰ-Ⅵ級花蕾原位雜交分析
        3.1.4 啟動(dòng)子特異性表達(dá)分析
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 BrSKS13在可育和不育植株各組織中的表達(dá)
        3.2.2 BrSKS13在可育花蕾各器官中的表達(dá)
        3.2.3 BrSKS13在可育株不同等級花藥中的表達(dá)
        3.2.4 原位雜交包埋材料
        3.2.5 原位雜交探針標(biāo)記
        3.2.6 原位雜交分析BrSKS13在花藥內(nèi)的表達(dá)
        3.2.7 啟動(dòng)子構(gòu)建完成的載體圖譜及PCR檢測
        3.2.8 啟動(dòng)子轉(zhuǎn)基因植株P(guān)CR檢測
        3.2.9 啟動(dòng)子轉(zhuǎn)基因植株GUS染色
    3.3 小結(jié)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀學(xué)位論文期間發(fā)表文章


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]復(fù)等位基因遺傳大白菜核雄性不育相關(guān)基因的分離與表達(dá)分析[D]. 辛喜鳳.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]白菜花粉特異基因BcSKS11在花粉發(fā)育及授粉受精中的表達(dá)分析及功能鑒定[D]. 張志仙.浙江大學(xué) 2011
[3]擬南芥類受體蛋白激酶LRR-RLK亞家族基因Atlg09970的功能研究[D]. 郭立琳.湖南師范大學(xué) 2006



本文編號：3300219