蜻蜓鳳梨（Aechmea fasciata）隸屬鳳梨科,為多年生草本單子葉植物,具有非常高的觀賞價(jià)值,深受人們的喜愛。但是由于其營養(yǎng)生長期較長,所以人們一直通過控制栽培環(huán)境的溫度、光照時(shí)間和使用乙烯等激素條件調(diào)控其開花時(shí)間以滿足市場的需求,但截至目前,蜻蜓鳳梨的開花機(jī)理尚不清楚,導(dǎo)致人工催花效果不十分理想。為了解析蜻蜓鳳梨開花機(jī)理,本研究根據(jù)轉(zhuǎn)錄組中的片段信息,利用cDNA 快速末端擴(kuò)增（Rapid amplification of cDNA end,RACE）的技術(shù)從蜻蜓鳳梨中獲得一個(gè)光敏色素因子（PIFs）的cDNA全長序列,并將其命名為AfPIF4。AfPIF4基因cDNA全長1 343 bp,開放閱讀框?yàn)?296 bp,編碼431個(gè)氨基酸。利用NCBI分析氨基酸序列結(jié)果顯示:AfPIF4含有bHLH蛋白家族共有的功能結(jié)構(gòu)域bHLH,與海棗（Phoenix dactylifera）,大豆（Glycine max）,玉米（Zea mays）,番茄（Solanum lycopersicum）中的 PIF 同源性分別為52%,49%,42%,39%。進(jìn)化樹分析顯示AfPIF4與小果野芭... 

【文章來源】：海南大學(xué)海南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１：轉(zhuǎn)錄因子激活報(bào)告基因原理??Ｆｉｇｕｒｅ?１：?Ｔｈｅ?ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ?ｏｆ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ?ｆａｃｔｏｒｓ?ａｃｔｉｖａｔｅ?ｒｅｐｏｒｔ?ｇｅｎｅ??

２．２．２．１蜻蜓鳳梨材料的選取??組織特異性樣品的采集：分別選取生長溫室大棚內(nèi)，溫度控制在２５－３０°Ｃ的生長??健壯，無病害的盆栽幼株，成株（圖２），２種材料各�。持�。將每株的外圍葉剝掉，??分離根，莖，心葉，外葉；為了進(jìn)一步研究Ｊ／Ｐ／ｆＶ在蜻蜓鳳梨幼株和成株對乙烯的??響應(yīng)，我們使用乙烯對其進(jìn)行了不同時(shí)間的處理：〇ｈ，?ｌｈ，６ｈ，?２４ｈ取其莖尖，用清??水清洗干凈，放置于采樣管，液弒速凍，－８（ＴＣ保存。??圖２：蜻蜓鳳梨材料??注：Ａ：小株；Ｂ：成株；Ｃ：開花植株??Ｖ＇ｘ＾ｕｈｙＩ：?Ａｅｃｈｍｅａ?ｆａｓｃｉａｔｄ?｜）ｌａｎｔｓ??Ｎｏｔｅ：?Ａ：?Ｊｕｖｅｎｉｌｅ?ｐｌａｎ��；?Ｂ：?Ｍｉｉｌｕｒｃ?ｐｈｉｎｌ；?Ｃ：?Ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ?ｐｌｎｎｌ??１７??

３．１．１蜻蜓鳳梨ＲＮＡ的提取??本研究提取蜻蜓鳳梨心葉的總ＲＮＡ，測其ＯＤ２６Ｇ／２８（）比值分別為１．９９０９，?１．８９９１，??１．９８０５，均在１．８？２．０范圍內(nèi)，瓊脂糖凝膠電泳顯示結(jié)果（圖３），質(zhì)量達(dá)到后續(xù)所??需。??１?２?３??＊２８Ｓ??１８Ｓ??圖３：蜻蜓鳳梨心葉總ＲＮＡ的瓊脂糖凝膠電泳圖譜??注：１－３：蜻蜓鳳梨３株心葉ＲＮＡ??Ｆｉｇｕｒｅ?３：?Ａｇｒｏｓｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｅｄ?ｆｒｏｍ?ｔｈｅ?ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ?ｏｉＡ．?ｆａｓｃｉａｔａ??Ｎｏｔｅ：?１－３：?Ｔｈｅ?ＲＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｅｄ?ｆｒｏｍ?ｔｈｅ?ｃｅｎｔｒａｌ?ｌｅａｖｅｓ?ｏｉ?Ａ．?ｆａｓｃｉａｔａ??３．１．２?４／Ｐ／ｉＷ基因的克隆??３．１．２．?Ｍ／Ｐ／Ｆ４基因編碼區(qū)序列的獲得??我們通過ＲＡＣＥ技術(shù)獲得了?的５＇端序列５２８?ｂｐ?（圖５Ａ）和３１端序??列１?Ｉ９０ｂｐ?（圖５Ｂ），根據(jù)所得ｃＤＮＡ片段，尋找ｊ／Ｐ／ｆＶ的開放閱讀框?yàn)椋保玻梗??ｂｐ，推測其編碼了?４３１個(gè)氨基酸（圖４），據(jù)此再次設(shè)計(jì)帶有Ｋｐｎｌ和Ｘｂａｌ酶切位點(diǎn)??的特異性引物，利用ＰＣＲ技術(shù)擴(kuò)增得到目的片段（圖５Ｃ），測序結(jié)果顯示與ＲＡＣＥ??拼接序列相同

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3297699