花色苷（Anthocyanins）,不僅能夠提高植株適應(yīng)和抵御逆境的能力,而且具有明顯的保健功能,是決定紅葡萄酒品質(zhì)和感官質(zhì)量的重要因素之一。植物體內(nèi)UFGT是合成花色苷的最后一個關(guān)鍵酶,直接影響花色苷的含量。本試驗以赤霞珠（Vitis vinifera L.cv Cabernet Sauvignon）葡萄為試材,在獲得ufgt基因全長的基礎(chǔ)上,制備多克隆抗體；定期對葡萄植株進行UV-C照射,在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上研究UV-C照射對ufgt表達和花色苷積累的影響,主要結(jié)果如下：擴增葡萄果實ufgt基因全長1371 bp,并構(gòu)建克隆載體。將克隆載體與表達載體pET-30a進行雙酶切,重組得到表達載體pET-ufgt。優(yōu)化蛋白表達條件,使UFGT蛋白高效表達并純化,以此為抗原,免疫新西蘭白兔,制備UFGT多克隆抗體。以赤霞珠葡萄果實為試材,研究對照和UV-C照射10 min后UFGT對花色苷含量變化規(guī)律的影響。采用熒光定量技術(shù)分析ufgt基因表達規(guī)律,結(jié)果表明UV-C照射10 min并未明顯誘導ufgt基因的表達,其表達規(guī)律與對照大致相同；采用Western-blotting技術(shù),分析UFGT... 

【文章來源】：山西農(nóng)業(yè)大學山西省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖７葡萄果實總ＲＮＡ電泳圖??Ｆｉｇ．７?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｆｒｏｍ?ｇｒａｐｅ?ｂｅｒｒｉｅｓ??

■??Ｈ??圖７葡萄果實總ＲＮＡ電泳圖??Ｆｉｇ．７?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｆｒｏｍ?ｇｒａｐｅ?ｂｅｒｒｉｅｓ??３．２?居ｆ基因的民Ｔ－ＰＣ民擴增??用Ｔａｋａｒａ公司的反轉(zhuǎn)錄試劑盒將葡萄果實總民ＮＡ反轉(zhuǎn)錄成ｃＤＮＡ，再板進行ＰＣＲ擴增，瓊脂糖凝膠檢測得到長度約為１５００?ｂｐ的基因片段，與已／ｇｆ編碼框基因大致相符。??１?Ｍ??

圖９菌液ＰＣ民鑒定目的基因??Ｍ：?ＤＬ２，０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；Ｌｉｎｅｌ－２：菌液?ＰＣ民產(chǎn)物??Ｆｉｇ．９?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?＾ｅ?ｔａｒｇｅｔ?ｇｅｎｅ?ｂｙ?ＰＣ民?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ??Ｍ：?ＤＬ２，０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?Ｌａｎｅ?１－２：化ｅ?化ｉ＊ｇｅｔ?ｇｅｎｅ?ｂｙ?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ??挑取單菌落于５ｍｌ?ＬＢ／Ａｍｐ＋液體培養(yǎng)基中３７?°Ｃ培養(yǎng)１２?ｈ，菌液用于ＰＣＲ果如圖所示：Ｌａｎｅ?１，２是菌液的ＰＣ民產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測發(fā)現(xiàn)均擴增出度約為１５００?ｂｐ的ＤＮＡ片斷，與己發(fā)表的１（／封編碼樞化閃大數(shù)相符。??３．３．２?ｙ居／基因測序序列結(jié)果和分析??�。校妹耔b定｜｜；娜的曲液１?ｍｌ送華大基因公司測序？，結(jié)果如附巧所示－，用ＤＮ將ＮＣＢＩ公布序列Ｉ；；＇測化所得巧巧化行比較，Ｉ?Ｉ的化ｌＡ＇ｉ?ｇ他萄ｙ／知化州ＩＩ］源性％，且開放閱讀沒化移＜門，ＷＷ化行－Ｋ郵的試驗。??３．４ＵＦＧＴ蛋白信息分析??３．４．１?ＵＦＧＴ蛋白一級結(jié)構(gòu)及基本信息??

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]云南‘火把梨’結(jié)構(gòu)基因UFGT及轉(zhuǎn)錄因子克隆與分析[D]. 孟富宣.西南林業(yè)大學 2014
[3]干旱區(qū)紅地球葡萄果實色素積累的光響應(yīng)機制研究[D]. 王枝翠.石河子大學 2013
[4]藍莓花色苷的提取、純化、穩(wěn)定性研究[D]. 石光.大連工業(yè)大學 2008



本文編號：3276452