作為植物中最大的轉(zhuǎn)錄因子家族之一,WRKY轉(zhuǎn)錄因子廣泛參與植物生長發(fā)育、衰老、物質(zhì)代謝和抗逆反應等多種生物進程,是調(diào)控植物多種生命進程不可或缺的一部分。其作為寄主-病原物互作中一個重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控子,是植物防衛(wèi)反應信號傳遞網(wǎng)絡的重要組成部分,通過正調(diào)控和負調(diào)控的協(xié)同作用,能夠使植物的抗病能力廣譜持久。本文通過生物信息學方法,共分析鑒定了蘋果基因組上132個WRKY基因,對其基因結(jié)構和分類進行了詳細的研究;選取了其中一些基因做組織表達分析;克隆了兩個蘋果WRKY基因,對其應對逆境脅迫響應進行了研究,并初步預測了其生物功能,具體結(jié)果如下:1.蘋果WRKY轉(zhuǎn)錄因子分為I、II和III類型,分別有24、79和29個成員,其鋅指結(jié)構類型分別為CX4CX22-23HXH、CX4-5CX23HXH和CX7CX23–24HXC,II組可進一步分為II-a、II-b、II-c、II-d和II-e亞組,分別有8、12、31、14和14個成員。蘋果WRKY基因不均勻分布于17條染色體中,分布最多的有13個,最少的有4個。WRKY結(jié)構域相對高度保守,絕大多數(shù)都含有WRKYGQK七肽和鋅指結(jié)構。MdWRKY基因結(jié)... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 WRKY基因的一般特性
        1.1.1 WRKY基因的分布
        1.1.2 WRKY基因的結(jié)構
        1.1.3 WRKY基因的分類
        1.1.4 WRKY基因的起源和進化
    1.2 WRKY基因的研究進展及生物學功能
        1.2.1 植物WRKY基因的研究進展
        1.2.2 WRKY基因家族參與植物生物脅迫應答過程
        1.2.3 WRKY基因家族參與植物非生物脅迫應答過程
        1.2.4 WRKY基因家族參與植物生長發(fā)育過程
        1.2.5 WRKY基因家族參與植物物質(zhì)代謝過程
        1.2.6 WRKY基因家族參與植物信號網(wǎng)絡調(diào)控
    1.3 本研究的目的意義
第二章 材料和方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 植物組織材料
        2.1.2 菌株與載體
        2.1.3 酶、生化試劑與試劑盒
        2.1.4 主要藥品、培養(yǎng)基與試劑配制
        2.1.5 主要儀器與設備
        2.1.6 PCR引物合成與測序
    2.2 試驗方法
        2.2.1 植物材料的來源
        2.2.2 植物材料的處理
        2.2.3 植物總RNA的提取
        2.2.4 反轉(zhuǎn)錄cDNA第一鏈的合成
        2.2.5 Real Time RT-PCR反轉(zhuǎn)錄
        2.2.6 PCR擴增
        2.2.7 實時熒光定量PCR
        2.2.8 目的DNA片段的回收
        2.2.9 PMDTM18-T連接反應
        2.2.10 大腸桿菌感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化與篩選
        2.2.11 農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化及篩選
        2.2.12 質(zhì)粒DNA的提取
        2.2.13 質(zhì)粒DNA的酶切鑒定
        2.2.14 蘋果MdWRKY5和MdWRKY54基因表達載體構建
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 蘋果WRKY基因家族的生物信息學分析
        3.1.1 蘋果WRKY基因序列鑒定
        3.1.3 蘋果WRKY基因進化樹分析
        3.1.4 蘋果WRKY基因家族染色體定位分析
        3.1.5 蘋果WRKY基因家族保守元件分析
        3.1.6 蘋果WRKY基因家族內(nèi)含子與外顯子分析
    3.2 蘋果WRKY基因表達分析
    3.3 蘋果MdWRKY5和MdWRKY54基因克隆、序列分析、表達分析及轉(zhuǎn)基因功能鑒定
        3.3.1 蘋果MdWRKY5和MdWRKY54基因克隆
        3.3.2 蘋果MdWRKY5和MdWRKY54基因序列同源性分析
        3.3.3 蘋果MdWRKY5和MdWRKY54基因序列進化樹分析
        3.3.4 蘋果MdWRKY5和MdWRKY54基因結(jié)構分析
        3.3.5 蘋果MdWRKY5和MdWRKY54基因受誘導表達分析
        3.3.6 蘋果MdWRKY5和MdWRKY54基因受炭疽葉枯病菌誘導表達分析
        3.3.7 蘋果MdWRKY5和MdWRKY54轉(zhuǎn)基因功能鑒定
第四章 討論
    1.蘋果WRKY基因家族生物信息學分析
    2.蘋果WRKY基因家族廣泛參與植物各種生長發(fā)育過程
    3.蘋果MdWRKY5和MdWRKY54基因響應多種非生物脅迫
    4.蘋果MdWRKY5和MdWRKY54基因響應蘋果炭疽葉枯病菌誘導
第五章 全文結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3274194