菊花（Chrysanthemum morifolium）原產(chǎn)我國(guó),為菊科菊屬栽培種,是我國(guó)十大傳統(tǒng)名花和世界四大切花之一,也是重要的盆栽和園林地被植物,具有很高的觀賞和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。我國(guó)是菊花的起源中心和菊屬種質(zhì)資源的分布中心,雖然其種質(zhì)資源極其豐富,栽培品種繁多,花色、花型豐富,但菊花缺少藍(lán)色、藍(lán)紫色類新穎花色品種。因此,利用基因工程技術(shù)對(duì)菊花進(jìn)行藍(lán)色花色新品種培育,對(duì)豐富菊花花色極有重要意義。藍(lán)色花色轉(zhuǎn)基因除受體品種須具備催化F3’5’H基因產(chǎn)物合成飛燕草素及其衍生物的能力外,高頻再生體系和遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立則是進(jìn)行藍(lán)色菊花轉(zhuǎn)基因育種的前提條件之一。二氫楊梅素（DHM）飼喂實(shí)驗(yàn)表明’南農(nóng)緋玉’、’QX-144’、’南農(nóng)粉羽’和’南農(nóng)宮粉’可合成較多的飛燕草素（吳慧瑩,2015）。為此,本研究旨在建立上述品種的高頻再生體系,進(jìn)而建立相應(yīng)的遺傳轉(zhuǎn)化體系。并利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對(duì)已建立再生體系的藍(lán)色轉(zhuǎn)基因受體品種’南農(nóng)粉翠,進(jìn)行VtF3’5’的轉(zhuǎn)化。主要研究結(jié)果如下:1.以’南農(nóng)緋玉’、’QX-144’、’南農(nóng)粉羽’和’南農(nóng)宮粉,為材料,利用不同分化培養(yǎng)基,研究了不同激素濃度配比對(duì)菊花不定芽發(fā)生... 

【文章來(lái)源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞表
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 菊花再生體系及遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究進(jìn)展
        1.1 再生體系的建立
        1.2 菊花遺傳轉(zhuǎn)化效率的影響因素
            1.2.1 農(nóng)桿菌菌株的選擇
            1.2.2 預(yù)培養(yǎng)
            1.2.3 農(nóng)桿菌濃度和侵染時(shí)間
            1.2.4 抗生素的選用
            1.2.5 共培養(yǎng)
            1.2.6 延遲培養(yǎng)
        1.3 菊花轉(zhuǎn)基因研究進(jìn)展
            1.3.1 花色合成基因的轉(zhuǎn)化
            1.3.2 提高抗性的轉(zhuǎn)基因
            1.3.3 株型改良的轉(zhuǎn)基因
            1.3.4 改變菊花花期的基因工程
    2 花色呈色機(jī)理
        2.1 花的呈色機(jī)理
        2.2 花色素的生物合成途徑
        2.3 影響藍(lán)色花呈色的因素
            2.3.1 花色素苷的種類及花色呈色
            2.3.2 助色素與藍(lán)色花色呈色
            2.3.3 液泡pH
    3 花色基因工程研究進(jìn)展
        3.1 利用反義RNA和共抑制技術(shù)改良花色
        3.2 引入外源物種基因
        3.3 升高液泡的pH
        3.4 F3'5'H基因的轉(zhuǎn)基因及藍(lán)色花基因工程育種現(xiàn)狀
    4 本研究的目的意義
第二章 菊花遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 植物材料
        1.2 主要化學(xué)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
        1.4 培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 無(wú)菌苗的獲得
        2.2 菊花不定芽的分化
            2.2.1 外植體和再生途徑選擇
            2.2.2 直接誘導(dǎo)不定芽再生培養(yǎng)基的篩選
            2.2.3 菊花組培苗的生根培養(yǎng)
        2.3 抗生素的篩選試驗(yàn)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 直接誘導(dǎo)芽再生培養(yǎng)基對(duì)菊花不定芽再生的影響
        3.2 抗生素濃度對(duì)菊花'南農(nóng)粉羽'不定芽再生及生根的影響
            3.2.1 不同濃度的潮霉素對(duì)菊花葉片不定芽再生的影響
            3.2.2 不同濃度的潮霉素對(duì)菊花生根的影響
    4 討論
        4.1 影響菊花高頻再生體系的因素
            4.1.1 基因型
            4.1.2 再生途徑
            4.1.3 激素組合對(duì)再生的影響
        4.2 抗生素選擇壓對(duì)不定芽再生及生根的影響
第三章 VtF3'5'H基因轉(zhuǎn)化'南農(nóng)粉翠'的研究
    1 試驗(yàn)材料
        1.1 植物材料
        1.2 菌株和植物表達(dá)載體
        1.3 培養(yǎng)基
        1.4 主要儀器及設(shè)備
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 農(nóng)桿菌的培養(yǎng)與活化
        2.2 轉(zhuǎn)化方法
        2.3 轉(zhuǎn)基因植株的獲得
        2.4 轉(zhuǎn)基因菊花植株的PCR檢測(cè)
            2.4.1 總DNA的提取
            2.4.2 PCR反應(yīng)體系
        2.5 轉(zhuǎn)基因菊花中的RT-PCR檢測(cè)
            2.5.1 RNA的提取
            2.5.2 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
            2.5.3 RT-PCR反應(yīng)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 VtF3'5'H轉(zhuǎn)基因菊花的再生
        3.2 轉(zhuǎn)基因菊花中的PCR檢測(cè)
        3.3 轉(zhuǎn)基因菊花中VtF3'5'H基因表達(dá)的RT-PCR檢測(cè)
    4 討論
全文結(jié)論及創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄Ⅰ
附錄Ⅱ
附錄Ⅲ
附錄Ⅳ
附錄Ⅴ
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文、申請(qǐng)專利
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基因工程及花色素合成途徑在花色改良中的研究進(jìn)展[J]. 馮歡,易姝利,左佳琦,謝佳恒,黃萱.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2014(02)
[2]菊花花青素苷合成關(guān)鍵基因表達(dá)與花色表型的關(guān)系[J]. 韓科廳,趙莉,唐杏姣,胡可,戴思蘭.  園藝學(xué)報(bào). 2012(03)
[3]利用灰色關(guān)聯(lián)分析法選擇適宜轉(zhuǎn)藍(lán)色基因的百合品種[J]. 張萍,劉雅莉,祁銀燕,化占勇.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2010(20)
[4]農(nóng)桿菌介導(dǎo)的藍(lán)色基因轉(zhuǎn)化中國(guó)水仙[J]. 戴藝民,林江波,王偉英,鄒暉,吳水金,林一心.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2010(02)
[5]轉(zhuǎn)基因香石竹中F3’5’H基因的克隆、表達(dá)和免疫學(xué)鑒定[J]. 白藍(lán),賈軍偉,孫建萍,李鵬,趙明文,潘愛(ài)虎.  植物生理學(xué)通訊. 2010(02)
[6]風(fēng)信子DFR基因全長(zhǎng)cDNA的克隆及序列分析[J]. 祁銀燕,劉雅莉,李莉,王躍進(jìn).  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2009(24)
[7]石蒜凝集素基因轉(zhuǎn)化切花菊及抗蚜性鑒定[J]. 何俊平,陳發(fā)棣,陳素梅,房偉民,繆恒彬,羅火林.  西北植物學(xué)報(bào). 2009(11)
[8]菊花新品系葉片外植體不定芽再生體系的研究[J]. 馮君偉,佟友麗,趙飛,李玉花.  北方園藝. 2009(02)
[9]觀賞向日葵花青素苷合成途徑同源基因的克隆與表達(dá)[J]. 張劍亮,潘大仁,周以飛,王占成,華樹(shù)妹,侯黎麗,隨粉粉.  園藝學(xué)報(bào). 2009(01)
[10]植物花色的表現(xiàn)機(jī)理[J]. 張菊平,吳正景,張興志,劉保國(guó).  生物學(xué)通報(bào). 2009(01)

博士論文
[1]部分菊花近緣種屬植物黑斑病苗期抗性及hrfA基因轉(zhuǎn)化菊花的研究[D]. 許高娟.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[2]菊花側(cè)芽形成過(guò)程中內(nèi)源激素變化及DgLsL基因遺傳轉(zhuǎn)化研究[D]. 姜貝貝.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[3]菊花花色形成的表型分析[D]. 白新祥.北京林業(yè)大學(xué) 2007
[4]根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的AP1基因轉(zhuǎn)化菊花的研究[D]. 呂晉慧.北京林業(yè)大學(xué) 2005
[5]逆境誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子DREB1A基因轉(zhuǎn)化地被菊花的研究[D]. 洪波.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005
[6]根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)SAG12-ipt和3DN-iaaL基因轉(zhuǎn)化切花菊及抗早衰研究[D]. 鄭麗.西南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2003

碩士論文
[1]藍(lán)色花色轉(zhuǎn)基因受體菊花品種篩選及其再生體系建立[D]. 吳慧瑩.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]切花菊轉(zhuǎn)CcSOS1與CcSOS1-CdICE1雙價(jià)基因研究[D]. 安娟.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]鴛鴦茉莉花瓣色素合成關(guān)鍵酶基因cDNA及CHS基因啟動(dòng)子的克隆[D]. 曹玉婷.福建農(nóng)林大學(xué) 2012
[4]梅PGIP基因轉(zhuǎn)化盆栽小菊的研究[D]. 于淼.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[5]菊花再生體系的建立及根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)DAD1基因轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化[D]. 周涌.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[6]菊花品種再生體系和遺傳轉(zhuǎn)化的初步探索[D]. 韓偉.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[7]菊花再生體系的建立及用PPMADS5基因進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化的研究[D]. 王蔚林.首都師范大學(xué) 2007
[8]根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)PCFH基因轉(zhuǎn)化菊花的研究[D]. 王歡.北京林業(yè)大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3266567