密羅木（Myrothamnus flabellifolia,）是迄今為止發(fā)現(xiàn)的唯一木本復(fù)蘇植物,前人從轉(zhuǎn)錄組水平對其耐旱機(jī)制進(jìn)行了初步研究,發(fā)現(xiàn)大量轉(zhuǎn)錄因子受干旱脫水誘導(dǎo)。本文從密羅木中分離克隆了脫水早期誘導(dǎo)表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子基因MfWRKY41,并對模式植物擬南芥進(jìn)行轉(zhuǎn)化,對獲得的轉(zhuǎn)基因擬南芥純系植物進(jìn)行脅迫試驗(yàn),以初步驗(yàn)證MfWRKY41基因的功能,主要獲得以下研究結(jié)果:1、密羅木MfWRKY41基因的克隆及序列分析基于密羅木MfWRKY41 uniGene序列,克隆得到長度為950bp的MfWRKY41基因完整cDNA序列。其推導(dǎo)氨基酸序列中包含高度保守的核定位信號KKRK以及由63個氨基酸殘基組成的典型的WRKY結(jié)構(gòu)域。C端包含1個Cx7Cx23HxC型鋅指結(jié)構(gòu),據(jù)此推斷MfWRKY41基因?qū)儆赪RKY家族Group Ⅲ類,并構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹進(jìn)行了驗(yàn)證。2、MfWRKY41基因在擬南芥中的過量表達(dá)及表型差異將目的基因構(gòu)建至真核表達(dá)載體,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)將其轉(zhuǎn)入模式植物擬南芥,最終獲得T2代轉(zhuǎn)基因純系植株。各轉(zhuǎn)基因植株間除Line A外,生長狀況及表型無顯著差異,Line A株系植株較W... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１正常生長與脫水后的密羅木表型比較??

圖２－１密羅木總ＲＮＡ的提取??Ｆｉｇ．２－１?Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｈｄｙｒｏｔｈａｎｎｍｓ?Ｊｌａｂｅｌｌｉｆｏｌｉａ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ??

擴(kuò)增得到長度為ｌＯＯＯｂｐ左右的ＤＮＡ片段，如圖２－２。圖中條帶位置與預(yù)期片段長度一??致，對目的條帶進(jìn)行回收純化后與克隆載體進(jìn)行連接并轉(zhuǎn)化大腸桿菌，菌液ＰＣＲ進(jìn)行陽??性檢測后挑選陽性菌液進(jìn)行測序。將測序結(jié)果與在ｕｎｉＧｅｎｅ中篩選所得的基因序列做比??對，結(jié)果顯示所得片段確為均基因。??表２－１?基因ＰＣＲ擴(kuò)增引物序列??Ｔａｂ?２－１?Ｐｒｉｍｅｒｓ?ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ?ｏｆ?ＭＪＷＲＫＹ４１?ｇｅｎｅ?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ??引物名稱?引物序列??上游引物（Ｐｒｉｍｅｒ－Ｆ）?ＴＣＣＣＣＣＧＧＧＡＴＧＧＡＧＣＡＧＡＡＧＡＡＴＴＴＧＡＴ??下游引物（Ｐｉｉｍｅｒ－Ｒ）?ＧＧＡＣＴＡＧＴＴＴＡＡＡＣＴＡＡＧＡＡＣＴＣＴＧＡＧ??圖２－２?ＲＴ－ＰＣＲ法擴(kuò)增Ａｆ／Ｗ７認(rèn)ｙｖ／基因的電泳檢測??Ｆｉｇ．２－２?Ｅｌｃｃｔｒｏｐｈｏｒｏｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＭｆＷＲＫＹ４Ｉ?ｇｅｎｅ?ｕｓｉｎｇ?ＲＴ－ＰＣＲ?ｍｅｔｈｏｄ??２．?３．?２?｝：／／基因序列及結(jié)構(gòu)分析??將克隆的甚閃測序結(jié)果與ＵｎｉＧｅｎｅ屮的序列相比對，結(jié)果顯示本次兌降所得基因確??為Ｍ／Ｗ７認(rèn)Ｐ／基閃。迸？步對１岡進(jìn)行迠因序列及結(jié)構(gòu)分析得知，??Ｖ／ＨＷｉＴＷｅＤＮＡ令長９５０ｂｐ，?ＮＣＢＩ的ＯＲＦ?Ｆｉｎｄｅｒ預(yù)測包含？個９３３ｂｐ的開放閱讀抿，??編碼３１０個氨基酸，５’和３’各包含一個９ｂｐ和８ｂｐ的非編碼區(qū)。利用ＤＮＡＭＡＮ軟件對??氨叢酸序列等進(jìn)行預(yù)測（閣２－３），結(jié)來顯小潘｜＇丨分／＋說為３５．６１＜〇３，等屯點(diǎn)０丨）為丨２．１１，??說明組成該蛋ｆｔ的氨基酸殘基中，酸性氨基酸所占比例較大。??利用ＳＭＲＡＴ在線

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]NAC轉(zhuǎn)錄因子在植物非生物脅迫相關(guān)抗性中的作用[J]. 蔡英杰,張雨,劉彧,田忠平,周蘊(yùn)薇.  北方園藝. 2015(23)
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碩士論文
[1]黃酮醇在植物鹽脅迫應(yīng)答中的作用[D]. 楊歡歡.山東大學(xué) 2015
[2]NaCl脅迫下甜菜光合能力和光保護(hù)機(jī)制的研究[D]. 程然然.山東師范大學(xué) 2014
[3]棉花GhWRKY41基因的分離與功能分析[D]. 褚曉茜.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[4]擬南芥WRKY基因家族的進(jìn)化研究[D]. 郝博濟(jì).天津大學(xué) 2014
[5]玉米WRKY家族轉(zhuǎn)錄因子基因ZmWRKY33的克隆及功能分析[D]. 黎華.揚(yáng)州大學(xué) 2011
[6]NaCl脅迫下海濱錦葵光保護(hù)機(jī)制的研究[D]. 張艷.山東師范大學(xué) 2008



本文編號：3265208