西雙版納黃瓜（Cucumis sativus L.var.xishuangbannanesis）是我國特有的橙黃色果肉黃瓜變種資源,果實中β-胡蘿卜素含量是普通栽培變種黃瓜的百倍,并且不同種質(zhì)間的β-胡蘿卜素含量也有明顯差異。CsPsy、CsPds、CsZds、CsLcyb、Cschyb和CsZep是類胡蘿卜素生物合成途徑中的關(guān)鍵酶基因,其表達水平可能是影響類胡蘿卜素積累的重要因素。與普通黃瓜相比,達到生理成熟度的西雙版納黃瓜瓜形呈近圓形或圓柱形,果實最大橫徑明顯大,這可能與數(shù)目較多的果實發(fā)育基因相關(guān)。在本研究中,以西雙版納變種和普通變種黃瓜為主要研究對象,基于前期轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù),評價并篩選出黃瓜果實生長發(fā)育時期表達相對穩(wěn)定的基因作為內(nèi)參基因,進而利用實時熒光定量PCR技術(shù),對不同變種黃瓜在果實不同發(fā)育時期的胡蘿卜素生物合成途徑及果實生長發(fā)育相關(guān)基因的表達量進行檢測,了解各基因在表達水平的變化規(guī)律,探討其對β-胡蘿卜素大量積累及特異果形的關(guān)系,為進一步深入揭示西雙版納黃瓜的優(yōu)異基因奠定基礎(chǔ)。試驗主要結(jié)果如下:1、基于轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù),在全基因組范圍內(nèi)篩選了5個表達相對穩(wěn)定的基因作為候選內(nèi)... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 西雙版納黃瓜概述
    1.2 類胡蘿卜素
        1.2.1 類胡蘿卜素的功能與作用
        1.2.2 類胡蘿卜素的生物合成途徑
        1.2.3 影響類胡蘿卜素生物合成的因素與調(diào)控機制
        1.2.4 合成途徑中關(guān)鍵酶基因
    1.3 果實發(fā)育
        1.3.1 細胞分裂相關(guān)蛋白
        1.3.2 細胞膨大相關(guān)蛋白
    1.4 實時熒光定量技術(shù)
        1.4.1 實時熒光定量技術(shù)原理
        1.4.2 實時熒光定量技術(shù)定量方式
    1.5 內(nèi)參基因研究進展
        1.5.1 應(yīng)用內(nèi)參基因的必要性
        1.5.2 內(nèi)參基因的必備條件
        1.5.3 傳統(tǒng)內(nèi)參基因
        1.5.4 新型內(nèi)參基因的篩選
        1.5.5 內(nèi)參基因的穩(wěn)定性評價方法
第二章 黃瓜果實穩(wěn)定內(nèi)參基因的篩選與評價
    2.1 材料與方法
        2.1.1 轉(zhuǎn)錄組測序試驗材料
        2.1.2 內(nèi)參基因篩選試驗材料及不同處理組合
    2.2 試驗方法
        2.2.1 總RNA提取方法
        2.2.2 cDNA文庫構(gòu)建及測序
        2.2.3 cDNA第1鏈的合成和gRNA的去除
        2.2.4 候選內(nèi)參基因的篩選和引物設(shè)計
        2.2.5 qRT-PCR
        2.2.6 數(shù)據(jù)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 轉(zhuǎn)錄組測序基本結(jié)果
        2.3.2 候選內(nèi)參基因的篩選
        2.3.3 引物設(shè)計和特異性檢測
        2.3.4 熒光定量PCR分析
        2.3.5 候選基因的表達穩(wěn)定性評價
    2.4 討論
第三章 西雙版納黃瓜 β- 胡蘿卜素生物合成相關(guān)基因的表達分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗材料
        3.1.2 實時熒光定量PCR
        3.1.3 qRT-PCR對轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)的驗證
        3.1.4 方差分析
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 影響黃瓜果實 β-胡蘿卜素合成的主要基因拷貝
        3.2.2 方差分析結(jié)果
        3.2.3 CsPsy1基因的表達分析
        3.2.4 CsPds、CsZds1、CsLcyb1基因的表達分析
        3.2.5 CsChyb1、CsZep基因的表達分析
    3.3 討論
第四章 黃瓜果實發(fā)育相關(guān)基因表達分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗材料
        4.1.2 表達差異基因的篩選
        4.1.3 qRT-PCR分析
        4.1.4 e-PCR引物特異性檢驗
    4.2 試驗結(jié)果
        4.2.1 RNA-seq表達分析
        4.2.2 e-PCR引物特異性檢測結(jié)果
        4.2.3 qRT-PCR分析
    4.3 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]黃瓜動蛋白參與果實發(fā)育早期細胞分裂和細胞膨大過程的研究[D]. 王燕.中國農(nóng)業(yè)科學院 2015
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碩士論文
[1]小麥ζ-胡蘿卜素脫飽和酶（ZDS）基因的克隆及序列分析[D]. 劉璐.華中科技大學 2007



本文編號：3259934