番茄（Solanum lycopersicum）是世界上栽種范圍最廣的蔬菜作物之一,果實的糖分積累是決定其風(fēng)味和品質(zhì)的重要因素。蔗糖磷酸合成酶（SPS）是蔗糖合成的關(guān)鍵酶,受到多種因素調(diào)控。14-3-3蛋白是重要的內(nèi)部調(diào)節(jié)因子,可能通過與SPS互作調(diào)控其活性。本實驗室前期預(yù)測,番茄14-3-3蛋白家族成員SlTFT1和SlTFT10最可能與蔗糖代謝關(guān)鍵酶蔗糖磷酸合成酶SlSPS相互作用,進而調(diào)控番茄的糖代謝�；诖�,本研究利用煙草葉片瞬時表達技術(shù),探究了SlTFT1和SlTFT10蛋白的亞細胞定位,SlTFT1和SlTFT10基因組織特異性,利用酵母雙雜交、螢火蟲熒光素酶（LCI）互補試驗驗證其與SlSPS的相互作用,并通過對番茄植株瞬時過表達SlTFT1、SlTFT10和SlSPS基因,進一步探究14-3-3蛋白對蔗糖代謝的調(diào)控作用。本研究主要結(jié)果如下:（1）利用瞬時轉(zhuǎn)化煙草葉片的方法,發(fā)現(xiàn)SlTFT1定位于煙草的細胞質(zhì)中,SlTFT10定位于細胞核與細胞質(zhì)中。RT-qPCR技術(shù)分析表明,SlTFT1基因在番茄各組織中都有表達,表達量相對較低,因此在植株生長發(fā)育過程中有調(diào)控作用,但不... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

番茄總RNA提取Fig.2-1TotalRNAfromtomato

沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文15表2-1實時熒光定量引物序列Table2-1Primersequencesofquantitativereal-timePCR引物名稱Name序列PrimersequencesSlActinF5-GGTGTTATGGTAGGGATGGG-3R5-GCTTCTGTAAGTAGCACAGGGT-3SlTFT1F5-CGGAAATTACCGGCGATTG-3R5-AACCCGACCCGATTACGAG-3SlTFT10F5-TTGAACAGAAGGAGGAATCGC-3R5-CACTGGTAGTAGCAGAGGGAACA-32.3結(jié)果與分析2.3.1番茄SlTFT1和SlTFT10的亞細胞定位分析將空載體35S::GFP、35S::SlTFT1-GFP和35S::SlTFT10-GFP重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌EHA105后，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)瞬時轉(zhuǎn)化方法，注射煙草葉片后，制備煙草葉片原生質(zhì)體，觀察二者的定位情況（圖2-2）。結(jié)果表明，SlTFT1定位在煙草原生質(zhì)體的細胞核和細胞質(zhì)中，SlTFT10定位在煙草原生質(zhì)體的細胞核中。圖2-235S::SlTFT1-GFP和35S::SlTFT10-GFP融合蛋白在煙草原生質(zhì)體中亞細胞定位Fig.2-2Subcellularlocalizationof35S::SlTFT1-GFPand35S::SlTFT10-GFPfusionproteinsinN.benthamianaprotoplasts

第三章SlTFT1和SlTFT10與SlSPS互作驗證162.3.2SlTFT1和SlTFT10基因組織特異性表達為了研究SlTFT1和SlTFT10基因在番茄中的基因表達模式，對番茄成熟植株中不同器官中的組織特異性表達模式進行了RT-qPCR檢測（圖2-3、2-4），均以根中表達量為基準(zhǔn)1.0。在番茄成熟植株中SlTFT1基因在膨大期果實中的表達量最高，其次是葉和花，在綠熟果和成熟果中的表達量較弱，在莖中的表達量最少（圖2-3），但整體表達量都較低，說明其在番茄植株中是非特異性表達。在番茄成熟植株中SlTFT10基因在膨大期果實中的表達量最高，其次是綠熟果，在莖、葉、花中表達量較弱，在根和成熟果中的表達量是最少的。由于其在膨大期果實中表達量較其他組織高，因此其為果實特異性表達，并且具有時空表達的特性。圖2-3番茄成熟植株SlTFT1組織特異性表達數(shù)值為平均值（Means）±SD，重復(fù)三次；*表示顯著性差異Fig.2-3Tissue-specificexpressionofSlTFT1intomatomatureplantsDataweremeans(±SD)ofthreebiologicalreplicatespercultivar.The*indicatedasignificantdifference圖2-4番茄成熟植株SlTFT10組織特異性表達數(shù)值為平均值（Means）±SD，重復(fù)三次；*表示顯著性差異Fig.2-4Tissue-specificexpressionofSlTFT10intomatomatureplantsDataweremeans(±SD)ofthreebiologicalreplicatespercultivar;The*indicatedasignificantdifference

【參考文獻】：
期刊論文
[1]煙草Nt14-3-3基因的克隆及生物信息學(xué)和表達模式分析[J]. 陳倩,卓維,李佳皓,魯黎明,李立芹.  煙草科技. 2018(01)
[2]擬南芥開花抑制因子TFL1與GRFs蛋白的相互作用[J]. 袁敏,邢繼紅,王莉,葛偉娜,郭棣,張嵐.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(10)
[3]大豆14-3-3蛋白與轉(zhuǎn)錄因子蛋白GmMYB173的互作[J]. 董萌,高友菲,韓天富,東方陽,蔣炳軍.  作物學(xué)報. 2016(10)
[4]寧夏枸杞果實糖積累和蔗糖代謝相關(guān)酶活性的關(guān)系[J]. 鄭國琦,羅霄,鄭紫燕,王俊,胡正海.  西北植物學(xué)報. 2008(06)
[5]植物蛋白質(zhì)的亞細胞定位研究進展[J]. 邢浩然,劉麗娟,劉國振.  華北農(nóng)學(xué)報. 2006(S2)
[6]植物轉(zhuǎn)化酶的種類﹑特性與功能[J]. 潘秋紅,張大鵬.  植物生理學(xué)通訊. 2004(03)
[7]苦參堿對小麥旗葉中蔗糖磷酸合成酶活性的調(diào)節(jié)[J]. 王寧寧,朱建新,王淑芳,朱亮基.  南開大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2000(01)

博士論文
[1]擬南芥中性蔗糖酶基因AtNIN1（neutral invertase）的功能及其在側(cè)根發(fā)育中的調(diào)控機制研究[D]. 齊曉朋.浙江大學(xué) 2006

碩士論文
[1]番茄SlTFT1和SlTFT10基因功能的研究[D]. 姚佳羽.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]番茄TFT1和TFT10基因的表達分析及超表達載體構(gòu)建[D]. 趙曉翠.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]一種玉米14-3-3蛋白的表達純化及其蛋白互作因子篩選[D]. 郝彩環(huán).中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2009
[4]番茄果實SPS反義表達載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化的研究[D]. 劉秀根.福建農(nóng)林大學(xué) 2008



本文編號：3233534