茭白（Zizania latifolia）為菰屬多年生草本植物,是我國第二大水生蔬菜。不僅營養(yǎng)豐富,同時(shí)具有保健和藥用價(jià)值。茭白膨大莖的形成與菰黑粉菌的侵染有密切關(guān)系,茭白有正常茭白、灰茭及雄茭三種表型,這三種表型與黑粉菌在茭白體內(nèi)的生長密切相關(guān)。當(dāng)黑粉菌成功侵染茭白植株后,茭白莖部組織膨大形成肥大的肉質(zhì)莖,即“正常茭”;如果植株能抵抗菰黑粉菌的侵染,從而開花結(jié)實(shí),不長茭白的稱之為“雄茭”;若黑粉菌潛育期縮短,形成黑褐色的厚垣孢子堆,使得茭白的肉質(zhì)莖中充滿黑色斑點(diǎn)的則稱之為“灰茭”。研究表明,茭白在生產(chǎn)上若連續(xù)兩年不選種,雄茭、灰茭的發(fā)生率將達(dá)到30%左右,嚴(yán)重影響農(nóng)民的經(jīng)濟(jì)效益。本課題以茭白為研究對象,研究茭白內(nèi)生真菌的種類及其培養(yǎng)條件,主要如下:（1）采用三點(diǎn)純化與單孢分離相結(jié)合的方法對茭白內(nèi)生真菌進(jìn)行分離純化,再通過分子生物學(xué)手段對其內(nèi)生真菌進(jìn)行菌絲DNA提取、真菌引物設(shè)計(jì)、目的片段PCR擴(kuò)增、目的片段膠回收、T載體連接及相應(yīng)質(zhì)粒提取等一系列手段,對所得內(nèi)生真菌進(jìn)行鑒定。通過測序得到兩個(gè)內(nèi)生真菌長度為:627 bp和618 bp,測序結(jié)果表明,分離的兩種內(nèi)生真菌為毛霉菌和煙管菌。... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

技術(shù)路線Fig.1Thetechnicalroute

圖 2 pMD19-T Simple Vector 結(jié)構(gòu)示意圖Figure 2 Structure diagram of pMD19-T Simple Vector DNA 快速抽提試劑盒、植物基因組 DNA 快速抽提試劑司、SanPreP 柱式 DNA 膠回收試劑盒（FavorPrepTi Kit）購自北京全式金，氯仿、異丙醇、無水乙醇等購自公司。酵母粉、蛋白胨等購自上海生工。（SW-CJ-2F，蘇州凈化）、凝膠成像系統(tǒng)（JY04S-3C，君儀（DYY-6C，北京六一）、PCR 擴(kuò)增儀（S1000TM，BI箱（DHG-9123A，上海三發(fā)）、數(shù)顯震蕩培養(yǎng)箱（ZHP-式離心機(jī)（TGL-16G，上海安亭）、酸度計(jì)（UB-7，北京KQ-250E，天津泰斯特）、高溫滅菌鍋（LDZX-50FBS，735BR3138，BIO-RAD）、純水機(jī)（RM220，美國艾科浦

吸取 4 ul PCR 產(chǎn)物和 1ul DNA Loading 混合均勻，進(jìn)行檢測，菌液送測序公司（上海生工）進(jìn)行檢測。測序結(jié)果s://www.ncbi.nlm.nih.gov/），MEGA 軟件對擴(kuò)增片段序列和部分進(jìn)行進(jìn)化樹分析。分析霉菌的菌落和孢子形態(tài)鑒定料為安徽省桃溪縣農(nóng)科所試驗(yàn)田的‘鄂茭 1 號’，對材料進(jìn)行消過的灰茭組織薄片平鋪于 PDA 培養(yǎng)基上，培養(yǎng) 48 h 后即有菌的延長，菌落顏色呈米白色，且周邊有白色菌絲生成。在菌落邊的白色菌絲，采用三點(diǎn)純化法進(jìn)行分離純化，在培養(yǎng)第 5d培養(yǎng)的單菌落做單孢分離試驗(yàn)，挑取單一孢子接種在 PDA 條件下進(jìn)行單菌落培養(yǎng)，如圖 3 所示。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人工濕地不同植被凈化污水效果及其氮磷累積研究[J]. 胡世琴.  水土保持研究. 2017(01)
[2]內(nèi)生菌與植物的互作關(guān)系及對藥用植物的影響[J]. 崔晉龍,郭順星,肖培根.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2017(02)
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碩士論文
[1]茭白黑粉菌二型態(tài)轉(zhuǎn)換的影響因素分析及乙醛酸循環(huán)關(guān)鍵基因功能初探[D]. 劉俊平.中國計(jì)量學(xué)院 2014
[2]茭白黑粉菌原生質(zhì)體制備及核型初步分析[D]. 王曉清.浙江大學(xué) 2013
[3]幾種藥用植物內(nèi)生真菌的分離鑒定及菌絲培養(yǎng)特性研究[D]. 謝鳳穎.東北林業(yè)大學(xué) 2012
[4]茭白膳食纖維的初步研究[D]. 黃凱豐.揚(yáng)州大學(xué) 2005
[5]茭白孕茭期間生理生化變化的研究[D]. 程龍軍.浙江大學(xué) 2002



本文編號：3230142