發(fā)布時(shí)間：2021-06-12 22:16

　　MYB轉(zhuǎn)錄因子普遍存在于高等植物中,在調(diào)控植物次生壁代謝過程中起重要作用。荷花（Nelumbo nucifera Gaern）是多年生水生植物,也是我國(guó)栽培面積最廣、品種資源最豐富的經(jīng)濟(jì)作物和觀賞植物之一。目前對(duì)荷花分子育種研究尚處于起步階段。本研究從荷花中分離克隆得到一個(gè)R2R3型MYB轉(zhuǎn)錄因子基因,并在擬南芥中對(duì)其功能進(jìn)行驗(yàn)證,旨在了解該基因在植物木質(zhì)素合成中的作用,為進(jìn)一步深入研究MYB轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控植物次生壁發(fā)育的分子機(jī)理以及荷花的遺傳育種改良奠定理論基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下:1.通過BLAST分析從荷花基因組里篩選與擬南芥AtMYB4序列同源性較高的荷花轉(zhuǎn)錄因子基因,根據(jù)其cDNA全長(zhǎng)開放閱讀框（open reading frame,ORF）設(shè)計(jì)特異性引物,以荷花品種’黑龍江紅蓮’幼葉為材料,通過RT-PCR擴(kuò)增得到全長(zhǎng)ORF,命名為NnMYB4。NnMYB4�；騉RF全長(zhǎng)726 bp,編碼241個(gè)氨基酸,屬于R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子G4亞組,與擬南芥AtMYB4、菊花CmMYB1、玉米ZmMYB31進(jìn)化關(guān)系較近。2.組織定量結(jié)果表明,NnMYB4基因在荷花根、莖、葉柄、劍葉、幼葉... 

【文章來(lái)源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：83 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞
前言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 MYB轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展
        1.1 MYB轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)與分類
        1.2 MYB轉(zhuǎn)錄因子的起源和進(jìn)化
        1.3 MYB轉(zhuǎn)錄因子的生物學(xué)功能
            1.3.1 參與非生物和生物脅迫應(yīng)答
            1.3.2 調(diào)控細(xì)胞代謝和植物生長(zhǎng)發(fā)育
            1.3.3 調(diào)控植物次生代謝
    2 木質(zhì)素研究進(jìn)展
        2.1 木質(zhì)素的組成和生物合成
            2.1.1 木質(zhì)素的組成
            2.1.2 木質(zhì)素的生物合成
        2.2 關(guān)鍵酶基因?qū)δ举|(zhì)素的調(diào)控作用
        2.3 R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子對(duì)木質(zhì)素合成的調(diào)控作用
第二章 荷花NnMYB4轉(zhuǎn)錄因子全長(zhǎng)ORF的克隆及序列分析
    1 材料與方法
        1.1 植物材料
        1.2 試劑與儀器
            1.2.1 試劑、菌株與載體
            1.2.2 儀器設(shè)備
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            1.3.1 ORF特異性引物設(shè)計(jì)
            1.3.2 RNA提取
            1.3.3 1st-Strand cDNA合成及檢測(cè)
            1.3.4 高保真ORF全長(zhǎng)擴(kuò)增
            1.3.5 目的片段的連接轉(zhuǎn)化
            1.3.6 重組子篩選及測(cè)序
            1.3.7 序列比對(duì)與進(jìn)化樹構(gòu)建
    2 結(jié)果與分析
        2.1 RNA提取質(zhì)量與反轉(zhuǎn)錄效果檢測(cè)
        2.2 NnMYB4全長(zhǎng)ORF的克隆
        2.3 荷花NnMYB4氨基酸序列同源性比對(duì)
        2.4 系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建
    3 討論
第三章 荷花NMYB4轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)特性及轉(zhuǎn)錄激活活性分析
    1 材料與方法
        1.1 植物材料
        1.2 試劑與儀器
            1.2.1 主要試劑和菌株
            1.2.2 儀器設(shè)備
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            1.3.1 荷花總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
            1.3.2 荷花NnMYB4基因的Real time-PCR分析
            1.3.3 荷花NnMYB4的亞細(xì)胞定位轉(zhuǎn)化載體構(gòu)建
            1.3.4 洋蔥表皮細(xì)胞瞬時(shí)表達(dá)
            1.3.5 顯微鏡觀察
            1.3.6 酵母表達(dá)載體構(gòu)建
            1.3.7 酵母感受態(tài)的制備與轉(zhuǎn)化
            1.3.8 陽(yáng)性克隆篩選
    2 結(jié)果與分析
        2.1 荷花NnMYB4組織定量表達(dá)特性
        2.2 亞細(xì)胞定位分析
        2.3 NnMYB4轉(zhuǎn)錄激活活性分析
    3 討論
第四章 荷花NnMYB4轉(zhuǎn)錄因子的功能分析
    1 材料與方法
        1.1 植物材料
        1.2 試劑與儀器
            1.2.1 試劑及菌株
            1.2.2 儀器設(shè)備
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            1.3.1 NnMYB4正義表達(dá)載體的構(gòu)建
            1.3.2 擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化
            1.3.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥的陽(yáng)性篩選及分子鑒定
            1.3.4 擬南芥橫截面切片觀察
            1.3.5 細(xì)胞壁總木質(zhì)素含量測(cè)定
            1.3.6 木質(zhì)素、纖維素合成關(guān)鍵酶基因的表達(dá)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 轉(zhuǎn)基因擬南芥鑒定
        2.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥表型及花序莖橫截面觀察
        2.3 荷花NnMYB4轉(zhuǎn)錄因子對(duì)木質(zhì)素合成的影響
        2.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥木質(zhì)素、纖維素合成關(guān)鍵酶基因表達(dá)量分析
    3 討論
全文結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄
發(fā)表論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3226389