芥菜（Brassica juncea Czern.et Coss.）,十字花科蕓薹屬作物,是我國重要的栽培蔬菜、油料作物和調(diào)料作物,具有很高的經(jīng)濟(jì)價值。紫葉芥作為葉用芥菜的一種,花青素含量顯著高于一般葉用芥菜。本研究在張?zhí)饦?gòu)建的六世代遺傳群體的基礎(chǔ)上,以紫色芥菜自交系品種（L17-P）和綠色芥菜自交系品種（L17-G）為主要研究材料,基于劉麗艷（2015）和張?zhí)穑?017）的研究結(jié)果,對位于B02染色體上的候選基因Bj.Pur（轉(zhuǎn)錄因子MYB90）進(jìn)行克隆分析和遺傳轉(zhuǎn)化。研究結(jié)果如下:1、Bj.Pur基因編碼的蛋白結(jié)構(gòu)分析。將Bj.Pur基因編碼的242個氨基酸序列信息提交至NCBI Conserved domains（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/cdd）進(jìn)行蛋白結(jié)構(gòu)域與功能分析,結(jié)果顯示N端高度保守的MYB結(jié)構(gòu)域位于8-105個氨基酸的位置,屬于R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子,且該蛋白與蘿卜的轉(zhuǎn)錄因子MYB114-like相似性較高,為92%。2、花青素含量和葉綠素含量的比較分析。對紫色芥菜自交系品種（L17-P）和綠色芥菜自交系品種（L17-G）及雜交后代F... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1 前言
    1.1 花青素的研究進(jìn)展
        1.1.1 花青素總述
        1.1.2 花青素的功能
        1.1.3 外界因素對于花青素合成的影響
            1.1.3.1 光照對于花青素合成的影響
            1.1.3.2 溫度對于花青素合成的影響
            1.1.3.3 糖對花青素合成的影響
            1.1.3.4 植物激素對花青素合成的影響
            1.1.4.1 花青素的合成代謝途徑
            1.1.4.2 花青素合成代謝途徑中的結(jié)構(gòu)基因
    1.2 MYB轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展
        1.2.1 MYB轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 MYB轉(zhuǎn)錄因子的功能
            1.2.2.1 MYB轉(zhuǎn)錄因子參與植物次生物質(zhì)的代謝
            1.2.2.2 MYB轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控植物生長發(fā)育代謝
            1.2.2.3 MYB轉(zhuǎn)錄因子參與植物激素應(yīng)答
        1.2.3 MYB轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控顏色差異機(jī)制
    1.3 十字花科蕓薹屬作物紫色形狀基因定位的研究進(jìn)展
    1.4 十字花科蕓薹屬類植物遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展
    1.5 本課題研究背景和意義
2 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌種及載體
            2.1.2.1 供試菌種
            2.1.2.2 載體
        2.1.3 主要生化試劑
        2.1.4 相關(guān)試劑和培養(yǎng)基的配制
            2.1.4.1 培養(yǎng)基的配制
            2.1.4.2 相關(guān)試劑的配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 植物材料的處理
            2.2.1.1 脅迫材料的處理
            2.2.1.2 脅迫材料的取樣
        2.2.2 相關(guān)色素含量的測定
        2.2.3 分子標(biāo)記的開發(fā)
            2.2.3.1 總DNA的提取
            2.2.3.2 SSR標(biāo)記的篩選和基于SNP位點的引物設(shè)計
        2.2.4 qRT-PCR表達(dá)量分析
            2.2.4.1 Trizol法提取植物總RNA
            2.2.3.2 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
            2.2.3.3 qRT-PCR檢測
        2.2.5 表達(dá)載體的構(gòu)建
            2.2.5.1 PCR反應(yīng)體系及產(chǎn)物的回收
            2.2.5.2 質(zhì)粒的提取
            2.2.5.3 線性化載體的制備
            2.2.5.4 同源重組法構(gòu)建表達(dá)載體
            2.2.5.5 重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化
            2.2.5.6 重組產(chǎn)物的鑒定
        2.2.6 芥菜遺傳轉(zhuǎn)化
        2.2.7 煙草瞬時表達(dá)
            2.2.7.1 煙草侵染注射
            2.2.7.2 煙草GUS染色
3 結(jié)果與分析
    3.1 蛋白結(jié)構(gòu)分析
    3.2 親本及雜交F_1 代的花青素與葉綠素含量的比較分析
    3.3 與Bj.Pur基因連鎖的標(biāo)記的篩選
    3.4 花青素合成相關(guān)基因的表達(dá)量分析
        3.4.1 蓮座期不同部位葉片Bj.Pur(BjMYB90)表達(dá)量分析
        3.4.2 開花期植株不同部位Bj.Pur(BjMYB90)表達(dá)量分析
        3.4.3 蓮座期花青素合成相關(guān)基因表達(dá)量分析
        3.4.4 環(huán)境脅迫下花青素合成相關(guān)基因在紫葉芥中的表達(dá)量分析
    3.5 候選基因Bj.Pur(BjMYB90)的遺傳轉(zhuǎn)化與功能驗證
        3.5.1 p35s:P-MYB90 超表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.5.2 擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化
        3.5.3 芥菜遺傳轉(zhuǎn)化
    3.6 Bj.Pur(BjMYB90)基因啟動子序列的克隆與分析
        3.6.1 Bj.Pur(BjMYB90)基因啟動子序列的克隆
        3.6.2 啟動子GUS報告基因載體的構(gòu)建
    3.7 不同芥菜種質(zhì)資源中產(chǎn)生葉色差異機(jī)制的初步探究
        3.7.1 插入片段差異的探究
        3.7.2 啟動子差異的探究
4 討論
    4.1 Bj.Pur基因的功能探究
    4.2 芥菜葉色差異機(jī)制探究
    4.3 后續(xù)工作計劃
參考文獻(xiàn)
附錄1 :qPCR過程中所用引物
附錄2 :41 份綠色芥菜材料和11 份紫色芥菜材料品種一覽表
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]利用CRISPR/Cas9技術(shù)敲除擬南芥轉(zhuǎn)錄因子MYB40的兩種可變剪接體[J]. 李孟湛,尹紅菊,李丁丁,劉亞琪,王鎖民.  草業(yè)學(xué)報. 2019(01)
[2]小蘭嶼蝴蝶蘭R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子分析[J]. 王雪霽,梁立雄,李潞濱,王濤.  林業(yè)科學(xué)研究. 2018(03)
[3]觀賞羽衣甘藍(lán)BoMYB114基因編碼區(qū)的克隆及序列分析[J]. 王玉書,王歡,龐彩燕.  分子植物育種. 2018(14)
[4]芥菜類蔬菜雜種優(yōu)勢利用的研究進(jìn)展與展望[J]. 萬正杰,李海渤,姚培杰,劉旭佳,徐玉穎,傅廷棟,鄒瑞昌,徐躍進(jìn).  華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2018(01)
[5]芥菜類蔬菜產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀及研究前景思考（英文）[J]. 范永紅,沈進(jìn)娟,董代文.  Agricultural Science & Technology. 2017(03)
[6]蕓薹屬物種（B.napus,B.rapa,B.oleracea,B.juncea,B.nigra）MYB28家族的分子進(jìn)化[J]. 陸俊杏,白輝揚(yáng),張濤.  分子植物育種. 2017(02)
[7]植物轉(zhuǎn)錄因子MYB基因家族的研究進(jìn)展[J]. 牛義嶺,姜秀明,許向陽.  分子植物育種. 2016(08)
[8]MicroRNA828負(fù)調(diào)控缺磷脅迫誘導(dǎo)的番茄花青素生物合成[J]. 賈小云,劉慧,沈潔,李芳,丁娜,孫巖,高昌勇,李潤植.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(15)
[9]小麥R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子TaMYB3-4D的克隆及功能分析[J]. 王延謙,張波,陳文杰,劉登才,劉寶龍,張懷剛.  西北植物學(xué)報. 2015(04)
[10]R2R3MYB轉(zhuǎn)錄因子在果樹花青素合成中的調(diào)控作用[J]. 李永杰,謝讓金,鄧烈.  中國南方果樹. 2014(06)

博士論文
[1]甜橙CsMYBF1基因的功能鑒定和調(diào)控機(jī)理研究[D]. 劉朝陽.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]番茄花青素缺失基因Hoffman’s Anthocyaninless的圖位克隆及功能分析[D]. 邱正坤.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
[3]甘藍(lán)型油菜紫葉基因BnaA.PL1定位和候選基因分析[D]. 李海渤.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[4]桃花青苷著色及原花青素合成的調(diào)控機(jī)制研究[D]. 周暉.中國科學(xué)院研究生院(武漢植物園) 2015
[5]大白菜紫紅色基因定位和候選基因分析[D]. 張淑江.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2014
[6]白菜花青苷和黃酮醇苷自然變異及遺傳機(jī)制研究[D]. 郭寧.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2014
[7]小麥MYB轉(zhuǎn)錄因子的功能研究[D]. 張立超.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2013
[8]油菜種子高油酸低亞麻酸的遺傳控制及等位基因特異標(biāo)記開發(fā)[D]. 楊慶勇.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[9]芥菜型油菜胞質(zhì)不育Hau CMS不育相關(guān)基因的鑒定及其功能分析[D]. 景兵.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[10]蕓薹屬植物花青素生物合成代謝途徑調(diào)控機(jī)制的研究[D]. 張彬.重慶大學(xué) 2011

碩士論文
[1]草莓FvMYB6-like基因的克隆及功能分析[D]. 石偉佳.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]蘋果MdMYB2基因的克隆及功能鑒定[D]. 曲豐佳.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[3]桑椹花青素合成相關(guān)miRNAs的鑒定及其功能研究[D]. 趙懷寧.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[4]玉米ZmMYB59轉(zhuǎn)錄因子的亞細(xì)胞定位、啟動子功能鑒定及在煙草中的表達(dá)分析[D]. 孫彩霞.浙江農(nóng)林大學(xué) 2017
[5]芥菜紫葉基因Bj.Pur定位及候選基因分析[D]. 張?zhí)?華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[6]番茄SlMYB102基因的克隆及耐鹽功能的初步鑒定[D]. 陳麗琛.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[7]辣椒素合成結(jié)構(gòu)基因及MYB轉(zhuǎn)錄因子的克隆和功能驗證[D]. 周欣.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[8]紅梨果皮著色相關(guān)R2R3型MYB轉(zhuǎn)錄因子基因功能分析[D]. 王智敏.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
[9]番茄miR858的克隆與干旱應(yīng)答及其對花青素生物合成的負(fù)調(diào)控機(jī)制研究[D]. 沈潔.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[10]大豆誘導(dǎo)型NAC轉(zhuǎn)錄因子基因啟動子克隆及功能研究[D]. 楊丹.山東大學(xué) 2015



本文編號：3203845