羅漢果在實際的種植中,每年季末因為天氣和植物營養(yǎng)消耗的原因,導(dǎo)致很多羅漢果無法成熟,這些未成熟果主要含有苦味的羅漢果苷Ⅱ,這些苷Ⅱ還未轉(zhuǎn)化成高糖苷,形成所謂的苦果。在生產(chǎn)上,這些苦果一般都是被遺棄,造成極大浪費。但羅漢果苦苷和甜苷都是以羅漢果醇為骨架,有著相同的基本骨架,只是C-3和C-24連接的葡萄糖基數(shù)量有所差異。在羅漢果甜苷合成的過程中,葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶發(fā)揮著重要作用,它將葡萄糖基逐個添加到苦味苷上,使苦味的低糖苷轉(zhuǎn)化為甜味的高糖苷。而羅漢果內(nèi)生菌長期與羅漢果互利共生,可能會與羅漢果發(fā)生基因交流,有可能從羅漢果內(nèi)生菌中篩選出產(chǎn)生糖基轉(zhuǎn)移酶的菌株。因此,研究從羅漢果內(nèi)生菌中篩選出產(chǎn)環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶（CGTase）的菌株,并對菌株進(jìn)行鑒定,再優(yōu)化該菌株的產(chǎn)酶條件,建立以硫酸銨鹽析、透析和葡聚糖凝膠柱層析為主的分離純化體系,從而得到CGTase,并測定該酶的酶學(xué)性質(zhì),最后初步探討CGTase對羅漢果苦味苷的轉(zhuǎn)化作用。主要完成的內(nèi)容如下:1.羅漢果內(nèi)生菌的分離選用75%乙醇和3%次氯酸鈉對羅漢果根、莖和果實消毒,不斷增加或減少消毒時間,根據(jù)消毒效果,對不同部位選擇不同消毒時間。再將消毒... 

【文章來源】：廣西師范大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 天然甜味劑的研究現(xiàn)狀
    1.2 羅漢果苷類及苷類轉(zhuǎn)化研究
        1.2.1 羅漢果苷類
        1.2.2 羅漢果苷類代謝
        1.2.3 羅漢果苦味果的形成
    1.3 植物內(nèi)生菌及研究進(jìn)展
        1.3.1 植物內(nèi)生菌的多樣性
        1.3.2 植物內(nèi)生菌活性成分的多樣性
        1.3.3 內(nèi)生菌與宿主植物間的相互影響
    1.4 CGTase在生物轉(zhuǎn)化中應(yīng)用
        1.4.1 CGTase的來源
        1.4.2 CGTase酶的功能
        1.4.3 CGTase酶法改性研究
    1.5 本研究的目的意義和主要內(nèi)容
        1.5.1 目的意義
        1.5.2 主要研究內(nèi)容
第二章 羅漢果根、莖、果內(nèi)生菌的分離純化
    2.1 材料與設(shè)備
        2.1.1 實驗材料與試劑
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 培養(yǎng)基
    2.2 實驗方法
        2.2.1 采樣及預(yù)處理
        2.2.2 根、莖、果表面消毒時間的優(yōu)化
        2.2.3 對照實驗的設(shè)置
        2.2.4 羅漢果內(nèi)生菌的純化
        2.2.5 內(nèi)生菌的分類及保藏
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 材料消毒時間的確定
        2.3.2 表面消毒檢測
        2.3.3 羅漢果各部位內(nèi)生菌分離純化結(jié)果
    2.4 本章小結(jié)
第三章 羅漢果內(nèi)生菌中產(chǎn)CGTase菌株的篩選及鑒定
    3.1 材料與儀器
        3.1.1 實驗材料與試劑
        3.1.2 實驗儀器
        3.1.3 溶液的配制
        3.1.4 培養(yǎng)基的配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 菌株發(fā)酵培養(yǎng)
        3.2.2 CGTase產(chǎn)生菌的初篩
        3.2.3 CGTase產(chǎn)生菌的的復(fù)篩
        3.2.4 CGTase酶活的測定
        3.2.5 CGTase產(chǎn)生菌的形態(tài)鑒定
        3.2.6 CGTase產(chǎn)生菌的分子生物學(xué)鑒定
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 產(chǎn)葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶菌株的快速篩選結(jié)果
        3.3.2 ND-6的形態(tài)鑒定
        3.3.3 菌株ND-6的16SrDNA擴(kuò)增結(jié)果
        3.3.4 菌株ND-6的16SrDNA測序結(jié)果
        3.3.5 菌株ND-6系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建
    3.4 本章小結(jié)
第四章 菌株ND-6產(chǎn)酶條件優(yōu)化
    4.1 材料與儀器
        4.1.1 實驗材料與試劑
        4.1.2 實驗儀器
        4.1.3 培養(yǎng)基
    4.2 實驗方法
        4.2.1 發(fā)酵及發(fā)酵的預(yù)處理
        4.2.2 酶活的測定
        4.2.3 單因素試驗
        4.2.4 菌株ND-6發(fā)酵條件正交試驗優(yōu)化
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 碳源種類及添加量的選擇
        4.3.2 氮源種類及添加量的選擇
        4.3.3 培養(yǎng)溫度對菌株產(chǎn)酶的影響
        4.3.4 初始pH值對菌株產(chǎn)酶的影響
        4.3.5 裝液量對菌株產(chǎn)酶的影響
        4.3.6 正交實驗優(yōu)化ND-6的發(fā)酵條件
        4.3.7 驗證試驗
    4.4 本章小結(jié)
第五章 CGTase的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)研究
    5.1 材料與試劑
        5.1.1 實驗材料與試劑
        5.1.2 實驗儀器
        5.1.3 培養(yǎng)基
        5.1.4 溶液的配制
    5.2 實驗方法
        5.2.1 粗酶的制備
        5.2.2 酶活的測定
        5.2.3 硫酸銨鹽析
        5.2.4 透析
        5.2.5 SephadexG-200凝膠過濾層析
        5.2.6 蛋白質(zhì)的測定
        5.2.7 環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的純度及相對分子量測定
        5.2.8 酶學(xué)性質(zhì)測定
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 硫酸銨鹽析
        5.3.2 凝膠過濾層析
        5.3.3 酶的純化結(jié)果
        5.3.4 SDS-PAGE凝膠電泳測定CGTaase純度及分子量
        5.3.5 pH值對酶活的影響
        5.3.6 pH值對酶穩(wěn)定性的影響
        5.3.7 溫度對酶活的影響
        5.3.8 溫度對酶熱穩(wěn)定性的影響
        5.3.9 金屬離子對酶活的影響
    5.4 本章小結(jié)
第六章 羅漢果苦味皂苷的制備及酶法改性苦味苷的研究
    6.1 材料與試劑
        6.1.1 實驗材料和試劑
        6.1.2 實驗儀器
    6.2 實驗方法
        6.2.1 羅漢果苦味苷的提取工藝
        6.2.2 羅漢果苦味苷的AB-8大孔樹脂純化
        6.2.3 羅漢果苦味苷的D330離子交換樹脂純化
        6.2.4 羅漢果苦味苷的硅膠柱層析純化
        6.2.5 CGTase對羅漢果苦味苷的轉(zhuǎn)化方法
        6.2.6 TLC檢測
        6.2.7 高效液相色譜檢測
        6.2.8 感官評價
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 大孔吸附樹脂分離結(jié)果
        6.3.2 硅膠柱分離純化結(jié)果
        6.3.3 TLC檢測結(jié)果
        6.3.4 口味評定
        6.3.5 HPLC測定
    6.4 本章小結(jié)
第七章 總結(jié)與展望
    7.1 總結(jié)
    7.2 問題與展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士期間發(fā)表論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]羅漢果塊根內(nèi)生真菌及其次級代謝產(chǎn)物的研究[D]. 付東興.廣西大學(xué) 2013
[4]高純羅漢果苷V的提取純化技術(shù)研究[D]. 李倩.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[5]人參根際土壤真菌與內(nèi)生真菌的多樣性及人參皂苷生物催化活性菌株的篩選[D]. 張薇.遼寧師范大學(xué) 2011
[6]羅漢果總苷的微生物轉(zhuǎn)化研究[D]. 司鵬鵬.上海師范大學(xué) 2011
[7]天然甜味劑羅漢果皂甙的制備、分析及特性研究[D]. 張云竹.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005
[8]產(chǎn)α-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶的菌株分離、產(chǎn)酶條件優(yōu)化與酶學(xué)特性研究[D]. 陳龍然.浙江大學(xué) 2005



本文編號：3202213