芥菜是我國南方廣泛栽植的十字花科蔬菜作物,開花時(shí)間的早晚將會(huì)影響產(chǎn)品器官的產(chǎn)量與品質(zhì)。雖然在模式植物擬南芥中已分離出大量與開花相關(guān)的基因,但是,在蔬菜作物芥菜上這些同源基因是否具有相似的功能,它們調(diào)控芥菜開花時(shí)間的分子機(jī)制究竟如何,目前并不清楚。迄今為止,有關(guān)芥菜AGL24蛋白與SOC1基因之間的作用機(jī)制仍未見報(bào)道。為了研究芥菜AGL24蛋白與SOC1基因的互作機(jī)理,本試驗(yàn)通過酵母單雜交體系和雙螢光素酶活性檢測系統(tǒng)檢測了芥菜SOC1啟動(dòng)子的全長、截短體（含CArG-box基序的3個(gè)SOC1小片段）、突變體（CArG-box基序突變后的小片段）分別與AGL24蛋白之間的相互作用,從而篩選SOC1啟動(dòng)子與AGL24蛋白的結(jié)合區(qū)域。此外還利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)AGL24轉(zhuǎn)化芥菜,從體內(nèi)驗(yàn)證轉(zhuǎn)基因植株對SOC1基因表達(dá)及開花的影響。為深入研究SOC1基因的表達(dá)調(diào)控提供一定的理論基礎(chǔ)。主要試驗(yàn)結(jié)果如下:1.芥菜AGL24基因的克隆及生物信息學(xué)分析以芥菜莖尖總RNA反轉(zhuǎn)錄cDNA第一鏈作為模板,擴(kuò)增得到的AGL24基因的cDNA序列為666 bp,預(yù)測編碼221個(gè)氨基酸殘基。通過Prot Param軟件分... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 MADS-box轉(zhuǎn)錄因子
        1.1.1 I型MADS-box轉(zhuǎn)錄因子
        1.1.2 II型MADS-box轉(zhuǎn)錄因子
    1.2 開花促進(jìn)因子AGL24
        1.2.1 AGL24基因結(jié)構(gòu)及表達(dá)模式
        1.2.2 AGL24與SVP的功能差異
        1.2.3 AGL24的一部分功能是在CO下游起作用
        1.2.4 AGL24參與調(diào)控花器官發(fā)育
    1.3 SOC1花期調(diào)控的分子機(jī)制
        1.3.1 SOC1與CO和FT
        1.3.2 SOC1與FLC和SVP
        1.3.3 SOC1與AGL24
    1.4 植物啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)特征
        1.4.1 轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)
        1.4.2 TATA框
        1.4.3 CAAT框
        1.4.4 GC框
    1.5 DNA與蛋白質(zhì)相互作用的研究方法
        1.5.1 酵母單雜交系統(tǒng)
        1.5.2 雙螢光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)
第二章 引言
第三章 芥菜SOC1啟動(dòng)子全長與AGL24相互作用分析
    3.1 材料
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 菌種及載體
        3.1.3 試驗(yàn)試劑
        3.1.4 主要儀器
    3.2 方法
        3.2.1 試驗(yàn)試劑的配制
        3.2.2 引物設(shè)計(jì)
        3.2.3 AGL24基因的克隆
        3.2.4 酵母單雜交系統(tǒng)檢測SOC1啟動(dòng)子與AGL24蛋白相互作用
        3.2.5 雙螢光素酶系統(tǒng)檢測SOC1啟動(dòng)子與AGL24蛋白相互作用
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 AGL24基因的克隆
        3.3.2 酵母表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.3.3 重組酵母菌Y1H（pAbAi-SOC1）的AbA背景濃度
        3.3.4 雙螢光素酶載體構(gòu)建
        3.3.5 SOC1啟動(dòng)子與AGL24蛋白相互作用鑒定
第四章 芥菜SOC1啟動(dòng)子截短體與AGL24相互作用分析
    4.1 材料
    4.2 方法
        4.2.1 試驗(yàn)試劑的配制
        4.2.2 引物設(shè)計(jì)
        4.2.3 酵母單雜交系統(tǒng)檢測SOC1啟動(dòng)子截短體與AGL24相互作用
        4.2.4 雙螢光素酶系統(tǒng)檢測SOC1啟動(dòng)子截短體與AGL24相互作用
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 重組酵母菌Y1H[pAbAi-SOC1-（1-3）]的AbA背景濃度
        4.3.2 SOC1啟動(dòng)子截短體雙螢光素酶載體的構(gòu)建
        4.3.3 重組質(zhì)粒的測序
第五章 芥菜SOC1的啟動(dòng)子CArG-box突變體與AGL24相互作用分析
    5.1 材料
    5.2 方法
        5.2.1 試驗(yàn)試劑的配制
        5.2.2 引物設(shè)計(jì)
        5.2.3 酵母單雜交系統(tǒng)檢測SOC1啟動(dòng)子突變體片段與AGL24相互作用
        5.2.4 雙螢光素酶系統(tǒng)檢測SOC1啟動(dòng)子突變體片段與AGL24相互作用
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 SOC1啟動(dòng)子CArG-box突變體重組酵母菌的AbA背景濃度
        5.3.2 SOC1啟動(dòng)子突變體雙螢光素酶載體的構(gòu)建
        5.3.3 重組質(zhì)粒的測序
        5.3.4 SOC1突變體片段與AGL24蛋白相互作用鑒定
第六章 農(nóng)桿菌介導(dǎo)AGL24轉(zhuǎn)化芥菜
    6.1 材料
        6.1.1 植物材料
        6.1.2 菌種及載體
        6.1.3 試驗(yàn)試劑
        6.1.4 主要儀器
    6.2 方法
        6.2.1 試驗(yàn)試劑的配制
        6.2.2 引物設(shè)計(jì)
        6.2.3 植物表達(dá)載體的構(gòu)建
        6.2.4 植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        6.2.5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化芥菜
        6.2.6 抗性芥菜植株的PCR鑒定
        6.2.7 GUS組織化學(xué)染色檢測
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 植物表達(dá)載體的構(gòu)建
        6.3.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法獲得抗性植株
        6.3.3 抗性芥菜的PCR鑒定
        6.3.4 抗性芥菜的GUS組織化學(xué)染色檢測
第七章 結(jié)論
    7.1 克隆了芥菜AGL24基因
    7.2 芥菜SOC1啟動(dòng)子全長能與AGL24蛋白相互作用
    7.3 芥菜SOC1啟動(dòng)子截短體與AGL24蛋白相互作用鑒定
    7.4 芥菜SOC1啟動(dòng)子CArG-box突變體與AGL24相互作用鑒定
    7.5 AGL24正義載體成功轉(zhuǎn)化芥菜
第八章 討論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
項(xiàng)目資助
在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]高等植物啟動(dòng)子的研究進(jìn)展[J]. 李杰,張福城,王文泉,黃麗云.  生物技術(shù)通訊. 2006(04)
[4]植物基因啟動(dòng)子研究進(jìn)展[J]. 張春曉,王文棋,蔣湘寧,陳雪梅.  遺傳學(xué)報(bào). 2004(12)
[5]玉米中與DRE元件結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子的克隆和結(jié)構(gòu)分析（英文）[J]. 秦峰,李潔,張貴友,趙軍,陳受宜,劉強(qiáng).  Acta Botanica Sinica. 2003(03)
[6]高等植物啟動(dòng)子研究進(jìn)展[J]. 李一琨,王金發(fā).  植物學(xué)通報(bào). 1998(S1)



本文編號：3201990