內(nèi)生細(xì)菌定殖在植物內(nèi)部,能有效防治植物病害。目前內(nèi)生細(xì)菌還未在農(nóng)業(yè)上廣泛應(yīng)用,原因之一就是內(nèi)生細(xì)菌防治植物病害的機(jī)理不明確,防治效果無(wú)法控制。本實(shí)驗(yàn)室篩選到一株熒光假單胞菌R15對(duì)辣椒疫病的防治效果較高,接種實(shí)驗(yàn)證明其對(duì)辣椒疫病的防效隨著其在辣椒根內(nèi)的定殖數(shù)量增加而增加,定殖數(shù)量達(dá)到6.3×105cfu/g以上,防效達(dá)到100%,在接種后維持高防效的時(shí)間為14 d,隨后定殖量逐漸下降,防治效果也降低。本實(shí)驗(yàn)為了探索熒光假單胞菌R15防治辣椒疫病的機(jī)制,利用cDNA-AFLP技術(shù)分析辣椒接種R15和清水處理的植株在挑戰(zhàn)接種辣椒疫霉菌葉片的差異表達(dá)基因,明確R15菌株定殖高峰期針對(duì)辣椒疫霉菌侵染誘導(dǎo)的抗性基因。同時(shí)通過(guò)不同的處理方式的設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)找到熒光假單胞菌R15在辣椒根內(nèi)維持高定殖數(shù)量的方法,以保證防治效果的穩(wěn)定。cDNA-AFLP技術(shù)分析R15誘導(dǎo)辣椒對(duì)辣椒疫霉菌抗性基因的實(shí)驗(yàn):利用30對(duì)選擇性擴(kuò)增引物獲得了 137條TDFs,測(cè)序成功的為29條,其中24個(gè)基因上調(diào)表達(dá),5個(gè)基因下調(diào)表達(dá)。在NCBI中經(jīng)Blastx比對(duì)和功能分類分析發(fā)現(xiàn)內(nèi)生細(xì)菌誘導(dǎo)的基因包括:功能未知基因以及未找到同源... 

【文章來(lái)源】：南京師范大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
附錄一 縮略詞
附錄二 試劑的配制
第一章 綜述
    1 辣椒疫病的研究
        1.1 辣椒疫病的發(fā)生發(fā)展規(guī)律
        1.2 辣椒疫病的防控研究進(jìn)展
            1.2.1 農(nóng)業(yè)防控措施
            1.2.2 選育抗病品種
            1.2.3 化學(xué)防治
            1.2.4 生物防治
    2 植物內(nèi)生細(xì)菌的研究
        2.1 內(nèi)生細(xì)菌對(duì)植物的促生作用
        2.2 生物修復(fù)作用
        2.3 作為外源基因的載體
        2.4 植物保護(hù)作用
    3 熒光假單胞菌防治植物病害的作用機(jī)制
        3.1 拮抗作用
        3.2 競(jìng)爭(zhēng)作用
        3.3 誘導(dǎo)抗性
    4 cDNA-AFLP技術(shù)
        4.1 cDNA-AFLP技術(shù)的特點(diǎn)
        4.2 合適的內(nèi)切酶組合
        4.3 cDNA-AFLP技術(shù)在植物基因差異表達(dá)分析上的應(yīng)用
    5 研究的目的與意義
第二章 熒光假單胞菌R15誘導(dǎo)辣椒抗性基因分析
    1 材料
        1.1 供試材料
        1.2 酶及試劑
        1.3 主要儀器設(shè)備
    2 方法
        2.1 接種劑的準(zhǔn)備
        2.2 辣椒盆栽苗的培育
        2.3 樣品采集及總RNA的提取
        2.4 mRNA的分離純化
        2.5 雙鏈cDNA的合成和純化
        2.6 cDNA-AFLP差異分析
            2.6.1 雙酶切、連接
            2.6.2 預(yù)擴(kuò)增
            2.6.3 選擇性擴(kuò)增
            2.6.4 聚丙烯酰胺凝膠的制備
            2.6.5 預(yù)電泳
            2.6.6 電泳
            2.6.7 銀染
        2.7 差異條帶的回收、擴(kuò)增、測(cè)序
            2.7.1 特異片段的回收
            2.7.2 二次PCR
            2.7.3 擴(kuò)增產(chǎn)物回收
            2.7.4 部分差異片段克隆
            2.7.5 PCR產(chǎn)物直接測(cè)序與克隆測(cè)序
        2.8 差異基因同源性檢索
        2.9 qRT-PCR驗(yàn)證cDNA-AFLP基因表達(dá)譜
            2.9.1 辣椒葉片RNA提取
            2.9.2 單鏈cDNA反轉(zhuǎn)錄
            2.9.3 候選基因qRT-PCR分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 辣椒葉片RNA的提取
        3.2 預(yù)擴(kuò)增結(jié)果
        3.3 選擇性擴(kuò)增結(jié)果
        3.4 6%聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)果
        3.5 二次PCR檢測(cè)
        3.6 測(cè)序結(jié)果分析
        3.7 qRT-PCR的驗(yàn)證結(jié)果
    4 討論
        4.1 PCR測(cè)序與克隆測(cè)序
        4.2 接種R15菌株后挑戰(zhàn)接種辣椒疫霉菌辣椒差異基因表達(dá)特征…
        4.3 差異條帶的分析
第三章 熒光假單胞菌R15防治辣椒疫病方法的研究
    1 材料
        1.1 供試材料
        1.2 試劑
        1.3 主要儀器設(shè)備
    2 方法
        2.1 接種劑的準(zhǔn)備
        2.2 辣椒盆栽苗的培育
        2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和R15定殖數(shù)量調(diào)查方法
        2.4 對(duì)辣椒疫病防效的實(shí)驗(yàn)方法
        2.5 辣椒疫病調(diào)查方法和數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 不同處理對(duì)R15定殖量的影響
        3.2 R15定殖量與防治疫病效果的關(guān)系
        3.3 傷根處理R15定殖量與防治疫病效果的關(guān)系
        3.4 傷根接種處理R15定殖量與防治疫病效果的關(guān)系
        3.5 澆灌尿素處理R15定殖量與防治疫病效果的關(guān)系
        3.6 灌根接種處理R15定殖量與防治疫病效果的關(guān)系
    4 討論
全文總結(jié)與展望
    1 總結(jié)
    2 展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]植物內(nèi)生細(xì)菌在辣椒體內(nèi)的定殖動(dòng)態(tài)及對(duì)辣椒疫病的防治效果[J]. 付思婭,陳雙林,閆淑珍.  中國(guó)生物防治學(xué)報(bào). 2013(04)
[2]植物體內(nèi)活性氧的研究及其在植物抗逆方面的應(yīng)用[J]. 薛鑫,張芊,吳金霞.  生物技術(shù)通報(bào). 2013(10)
[3]綠針假單胞菌HG28-5對(duì)辣椒疫病的抑制活性及其根際定殖特性的研究[J]. 申順善,趙玉華,張利敬,常淑嫻,王晶晶,樸鳳植.  園藝學(xué)報(bào). 2013(08)
[4]利用cDNA-AFLP分析內(nèi)生解淀粉芽胞桿菌Fy11誘導(dǎo)辣椒差異表達(dá)基因[J]. 楊瑞先,范曉靜,邱思鑫,蔡學(xué)清,胡方平.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(12)
[5]水稻種子內(nèi)生細(xì)菌多樣性及其分泌植物生長(zhǎng)素能力的測(cè)定[J]. 姜曉宇,高菊生,徐鳳花,曹艷花,唐雪,張曉霞.  微生物學(xué)報(bào). 2013(03)
[6]沼液施用對(duì)辣椒疫病的防治效果及對(duì)土壤生物學(xué)特性的影響[J]. 曹云,常志州,馬艷,楊豪,付廣青.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(03)
[7]四種化學(xué)藥劑防治辣椒疫病盆栽藥效試驗(yàn)[J]. 章彥俊,尉文彬,馬全偉,張紅杰,孫衛(wèi)衛(wèi).  北方園藝. 2013(02)
[8]內(nèi)生菌SZ-1的定殖力及其對(duì)姜瘟病的防效[J]. 孫正祥,王豐,張昊,鄧樂(lè),周燚.  北方園藝. 2013(01)
[9]利用cDNA-AFLP技術(shù)研究辣椒核雄性不育兩用系的基因差異表達(dá)[J]. 韓清,馮淼,劉辰,馬寧,沈火林.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2012(10)
[10]不同肥料對(duì)生防菌淡紫擬青霉E7定殖的影響[J]. 潘江禹,汪軍,毛超,戴青冬,黃俊生.  廣東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(19)

博士論文
[1]辣椒應(yīng)答逆境的轉(zhuǎn)錄譜分析及相關(guān)候選基因cDNA分離與鑒定[D]. 林明.福建農(nóng)林大學(xué) 2008

碩士論文
[1]植物內(nèi)生細(xì)菌定殖及防治辣椒疫病機(jī)理的研究[D]. 付思婭.南京師范大學(xué) 2013



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