病毒致病因子與寄主因子的互作對(duì)病毒致病性的影響一直是病毒分子生物學(xué)的一個(gè)研究熱點(diǎn)。SVBV P6蛋白是一個(gè)RNA沉默抑制子和癥狀決定子,與病毒的致病性緊密相關(guān)。但迄今為止,尚未見(jiàn)到SVBV P6蛋白與森林草莓蛋白互作的研究報(bào)道。本研究以SVBV P6為誘餌蛋白篩選感染SVBV森林草莓的酵母cD NA文庫(kù),獲得與其互作的寄主因子鋅指蛋白ZFP。酵母雙雜交、雙分子熒光互補(bǔ)（BiF C）和免疫共沉淀（Co-IP）試驗(yàn)方法驗(yàn)證了P6蛋白和ZFP蛋白在體外和體內(nèi)互作;ZFP蛋白能夠影響P6蛋白在植物體內(nèi)聚集、表達(dá)以及減輕P6蛋白介導(dǎo)PVX在本氏煙上的癥狀表型;蛋白酶體抑制劑MG132能夠抑制ZFP介導(dǎo)P6蛋白的降解。本研究的開(kāi)展對(duì)揭示SVBV P6蛋白與草莓鋅指蛋白ZFP互作分子機(jī)制以及寄主植物和雙鏈DNA病毒之間防御和反防御機(jī)理奠定了理論基礎(chǔ)。1 P6蛋白與ZFP蛋白互作驗(yàn)證酵母雙雜交驗(yàn)證P6與ZFP互作將pGAD-ZFP+pGBK-P6及pGAD-P6+pG BK-ZFP分別共轉(zhuǎn)化酵母,結(jié)果發(fā)現(xiàn),共轉(zhuǎn)化的酵母菌均能夠在選擇培養(yǎng)基平板上生長(zhǎng),說(shuō)明P6能夠與ZFP互作。BiFC驗(yàn)證P6蛋白與ZF... 

【文章來(lái)源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：51 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
文獻(xiàn)綜述
    1 草莓鑲脈病毒基本特征及其編碼的P6蛋白的功能
        1.1 草莓鑲脈病毒基本特征、分布及危害
        1.2 草莓鑲脈病毒的分類(lèi)及基因組編碼的蛋白
        1.3 P6蛋白在CaMV各ORF翻譯過(guò)程中的作用
    2 植物病毒致病因子與寄主因子的互作
    3 植物鋅指蛋白的生物學(xué)特性及功能
        3.1 鋅指蛋白的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)
        3.2 鋅指蛋白ZFP對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育的影響
        3.3 鋅指蛋白的抗逆作用
        3.4 鋅指蛋白的抗菌作用
        3.5 鋅指蛋白的抗病毒作用
        3.6 鋅指蛋白能與病毒蛋白互作
    4 泛素/26S蛋白酶體降解系統(tǒng)在植物抗病響應(yīng)中的作用
        4.1 泛素/26S蛋白酶體降解系統(tǒng)
        4.2 UPS的組成
        4.3 26S蛋白酶體
        4.4 泛素/26S蛋白酶降解系統(tǒng)對(duì)植物-病原物互作的響應(yīng)
引言
材料與方法
    1 供試材料
        1.1 病樣來(lái)源
        1.2 植物材料
        1.3 菌種載體、質(zhì)粒
        1.4 酶和化學(xué)試劑
        1.5 抗生素使用
        1.6 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 草莓總DNA提取
        2.2 植物總RNA提取
        2.3 PCR產(chǎn)物純化、回收和連接載體
            2.3.1 PCR產(chǎn)物連接
        2.4 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.5 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌
        2.6 陽(yáng)性克隆的PCR鑒定
        2.7 質(zhì)粒提取及質(zhì)粒鑒定
        2.8 農(nóng)桿菌瞬時(shí)浸潤(rùn)
        2.9 載體構(gòu)建
        2.10 酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)(Yeasttwo-hybridsystem,Y2H)
            2.10.1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母(PEG/醋酸鋰法)小量制備法,用于單轉(zhuǎn)和雙轉(zhuǎn)
            2.10.2 互作驗(yàn)證
        2.11 BIFC實(shí)驗(yàn)(Bimolecularfluorescencecomplementation,BiFC)
        2.12 DAPI染色實(shí)驗(yàn)
        2.13 免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)
        2.14 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)
        2.15 載體構(gòu)建
結(jié)果與分析
    1 SVBVP6蛋白與森林草莓鋅指蛋白ZFP互作鑒定
        1.1 酵母雙雜交(Y2H)驗(yàn)證P6蛋白與ZFP蛋白互作
        1.2 雙分子熒光互補(bǔ)驗(yàn)證(BiFC)P6與ZFP在植物體內(nèi)互作
        1.3 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)(Co-IP)驗(yàn)證P6與ZFP在植物體內(nèi)互作
    2 森林草莓鋅指蛋白ZFP基因的序列比較及分子進(jìn)化分析
        2.1 森林草莓鋅指蛋白ZFP核苷酸序列與其他植物鋅指蛋白相似性比較
        2.2 森林草莓鋅指蛋白ZFP基因系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析
    3 鋅指蛋白ZFP基因在SVBV感染的森林草莓中的差異表達(dá)
    4 鋅指蛋白ZFP亞細(xì)胞定位及其與P6蛋白共定位鑒定
    5 森林草莓鋅指蛋白ZFP介導(dǎo)P6在植物體內(nèi)泛素化降解研究
        5.1 ZFP蛋白能夠影響P6蛋白聚集
        5.2 森林草莓ZFP蛋白影響P6蛋白在植物體內(nèi)表達(dá)
        5.3 半體內(nèi)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)26S蛋白酶體抑制劑MG132對(duì)P6蛋白降解的抑制作用
        5.4 體內(nèi)驗(yàn)證蛋白酶體抑制劑能抑制ZFP介導(dǎo)P6蛋白降解
    6 植物ZFP蛋白對(duì)P6蛋白介導(dǎo)PVX在本氏煙上癥狀表型的的影響
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]草莓鑲脈病毒研究進(jìn)展[J]. 肖敏,張志宏.  遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué). 2005(04)



本文編號(hào)：3180906