柑橘潰瘍病是由柑橘潰瘍病菌引起的一種世界性檢疫病害,危害嚴(yán)重,防治困難,對(duì)柑橘產(chǎn)業(yè)造成了巨大損失。加強(qiáng)對(duì)柑橘潰瘍病菌的檢測(cè),只能暫緩病情形勢(shì)的發(fā)展,找到抗病柑橘資源、培育抗病品種是最根本的解決途徑。本研究擬利用激光共聚焦掃描顯微鏡技術(shù)實(shí)時(shí)觀察e GFP標(biāo)記的柑橘潰瘍病菌對(duì)抗病種質(zhì)枸櫞C-05和感病種質(zhì)冰糖橙的葉片的侵染和定值過(guò)程,比較分析病原菌對(duì)不同種質(zhì)的入侵途徑、入侵量和入侵后植物組織內(nèi)變化的差異,并分析侵染后不同寄主的癥狀差異,為柑橘潰瘍病菌與柑橘不同種質(zhì)的互作研究提供了直觀的技術(shù)方法。FLS2是柑橘防御相關(guān)基因,在植物防御反應(yīng),位于質(zhì)膜的FLS2特異性識(shí)別細(xì)菌鞭毛蛋白,從而引起一系列的防御反應(yīng)。項(xiàng)目組前期研究結(jié)果表明,柑橘葉片感染柑橘潰瘍病菌后,鞭毛蛋白受體基因FLS2的表達(dá)在抗病材料中顯著上升,而在感病材料中呈下降趨勢(shì);本研究進(jìn)一步分析比較了二者在潰瘍病菌入侵后FLS2基因結(jié)構(gòu)及其啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)的差異,并分析了在抗病和感病種質(zhì)冰糖橙和枸櫞C-05中FLS2基因?qū)儾【肭值目赡茏饔�。本研究主要研究結(jié)論如下:（1）潰瘍病接種實(shí)驗(yàn)需采用完全展開(kāi)且葉面積達(dá)到最大葉面積1/2的柑橘幼葉。... 

【文章來(lái)源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：115 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 柑橘潰瘍病研究進(jìn)展
    1.2 GFP在寄主與細(xì)菌互作中的應(yīng)用
        1.2.1 GFP的理化性質(zhì)和熒光原理
        1.2.2 GFP在病原菌與寄主互作過(guò)程中的應(yīng)用
    1.3 激光共聚焦掃描顯微鏡在研究病菌互作中的應(yīng)用
    1.4 植物先天免疫系統(tǒng)研究進(jìn)展
        1.4.1 植物先天免疫系統(tǒng)的作用模式
        1.4.2 PAMPs對(duì)植物應(yīng)激反應(yīng)的誘導(dǎo)
        1.4.3 FLS2對(duì)PAMPs識(shí)別
            1.4.3.1 PRRs的分類
            1.4.3.2 FLS2 對(duì)PAMPs/MAMPs的識(shí)別
    1.5 植物啟動(dòng)子及其研究進(jìn)展
        1.5.1 啟動(dòng)子的分類和結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        1.5.2 植物啟動(dòng)子對(duì)生物脅迫的應(yīng)答
    1.6 研究的目的與意義
第二章 柑橘潰瘍病菌入侵柑橘葉片組織過(guò)程中的解剖觀察
    2.1 材料與方法
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 供試菌種
        2.1.3 潰瘍病菌菌懸液的制備
        2.1.4 病原菌接種
        2.1.5 切片和壓片的制備
        2.1.6 激光共聚焦掃描顯微鏡觀察
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 適宜接種柑橘潰瘍病菌和制片材料的選擇
        2.2.2 改善制片技術(shù)觀察活的熒光菌在葉片中的分布
        2.2.3 葉片發(fā)病癥狀的切片觀察
        2.2.4 潰瘍病菌對(duì)柑橘葉片的入侵點(diǎn)觀察
        2.2.5 不同時(shí)間點(diǎn)下潰瘍病菌侵染柑橘葉片的過(guò)程
        2.2.6 壓片觀察葉片表面潰瘍病菌量的分布差異
        2.2.7 柑橘潰瘍病菌量在植物細(xì)胞內(nèi)的定殖觀察
        2.2.8 切片觀察葉片中潰瘍病菌量的差異
        2.2.9 Z-stack的應(yīng)用和3D立體建模觀察潰瘍病菌在寄主植物中的立體分布
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
第三章 FLS2基因的克隆與序列分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 Xcc的活化與菌懸液制備
        3.1.3 活體接種及樣本采集
        3.1.4 RNA提取及cDNA合成
        3.1.5 FLS2基因擴(kuò)增引物的選擇
        3.1.6 FLS2基因的擴(kuò)增、克隆與測(cè)序
        3.1.7 FLS2基因序列拼接及生物信息學(xué)分析
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 冰糖橙和枸櫞C-05總RNA提取與FLS2基因擴(kuò)增結(jié)果
        3.2.2 冰糖橙和枸櫞C-05FLS2基因cDNA序列的生物信息學(xué)分析
        3.2.3 冰糖橙和枸櫞C-05FLS2基因氨基酸序列的分析和比較
        3.2.4 冰糖橙與枸櫞C-05FLS2蛋白結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)與分析
        3.2.5 冰糖橙與枸櫞C-05FLS2蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)與三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)與分析
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第四章 柑橘FLS2基因啟動(dòng)子的克隆與順式作用元件分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 柑橘葉片總DNA的提取
        4.1.3 FLS2-1啟動(dòng)子序列克隆
        4.1.4 FLS2啟動(dòng)子順式作用元件預(yù)測(cè)
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 柑橘總DNA提取與FLS2-1基因啟動(dòng)子的克隆測(cè)序
        4.2.2 FLS2基因啟動(dòng)子順式作用元件預(yù)測(cè)
        4.2.3 冰糖橙中FLS2-1基因啟動(dòng)子缺失序列分析
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
總結(jié)與展望
    主要結(jié)論
    創(chuàng)新點(diǎn)
    下一步工作設(shè)想
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]柑橘潰瘍病防御相關(guān)基因的鑒定及功能分析[D]. 嚴(yán)佳文.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[2]柑橘潰瘍病菌致病性影響因素的研究[D]. 劉利平.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013

碩士論文
[1]柑橘內(nèi)參基因篩選及轉(zhuǎn)pthA基因甜橙的表達(dá)分析[D]. 嚴(yán)佳文.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3180725