薄皮甜瓜（Cucumis melo var.makuwa Makino）因其果實(shí)香氣濃郁、甜脆多汁,深受大眾喜愛,是一種重要的經(jīng)濟(jì)作物。甜瓜果實(shí)的產(chǎn)量和品質(zhì)是影響經(jīng)濟(jì)效益的重要因素,而提高植株抗逆性和增加果實(shí)芳香性則可有效提高收益。植物脂氧合酶（lipoxygenase,LOX）在防御逆境脅迫和合成香氣物質(zhì)進(jìn)程中均有重要作用,因此研究LOX基因功能可為通過基因工程提高植株抗逆性、改良果實(shí)品質(zhì)提供理論依據(jù)。甜瓜LOX基因家族有CmLOX01^CmLOX18共18個(gè)基因,其中Cm LOX18屬于13-LOX type II型,為了進(jìn)一步驗(yàn)證Cm LOX18功能,本試驗(yàn)以薄皮甜瓜‘玉美人’為試材,克隆和分析了CmLOX18啟動(dòng)子序列,研究不同逆境脅迫對(duì)啟動(dòng)子活性影響;通過病毒誘導(dǎo)基因沉默（VIGS）獲得CmLOX18沉默植株,研究其在防御高溫脅迫中的作用;同時(shí)構(gòu)建了CmLOX18超表達(dá)載體,使其在花后不同時(shí)期果實(shí)中瞬時(shí)表達(dá),探究基因在香氣合成中的作用。主要研究結(jié)果如下:1.以甜瓜嫩葉DNA為模板,TA克隆獲得Cm LOX18啟動(dòng)子1500bp序列,命名為p18T-LOX1... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 脂氧合酶分類
    1.2 脂氧合酶代謝途徑
    1.3 脂氧合酶在逆境脅迫中的作用
        1.3.1 LOXs與非生物脅迫
        1.3.2 LOXs與生物脅迫
        1.3.3 LOXs與激素、信號(hào)類物質(zhì)
    1.4 脂氧合酶在果實(shí)成熟和香氣合成中的作用
        1.4.1 LOXs與果實(shí)香氣合成
        1.4.2 LOXs與乙烯合成
    1.5 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株及質(zhì)粒
        2.1.3 酶及生化試劑
        2.1.4 培養(yǎng)基及試劑配制
        2.1.5 測(cè)序及引物合成
    2.2 方法
        2.2.1 CmLOX18啟動(dòng)子的克隆
        2.2.2 CmLOX18啟動(dòng)子分析
        2.2.3 CmLOX18啟動(dòng)子表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.4 CmLOX18啟動(dòng)子表達(dá)載體轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌
        2.2.5 CmLOX18啟動(dòng)子在煙草葉片中的瞬時(shí)表達(dá)
        2.2.6 煙草葉片的逆境處理
        2.2.7 煙草葉片的GUS組織化學(xué)染色和GUS熒光定量
        2.2.8 CmLOX18基因的克隆
        2.2.9 CmLOX18基因沉默表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.10 甜瓜種子吸收法—TRV誘導(dǎo)CmLOX18基因沉默
        2.2.11 CmLOX18超表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.12 CmLOX18在甜瓜果實(shí)中瞬時(shí)表達(dá)
        2.2.13 植物活體熒光蛋白信號(hào)檢測(cè)
        2.2.14 脂氧合酶(LOXs)活性的測(cè)定
        2.2.15 實(shí)時(shí)熒光定量qRT–PCR分析基因表達(dá)量
        2.2.16 相關(guān)逆境指標(biāo)測(cè)定
        2.2.17 軟件
3 結(jié)果與分析
    3.1 CmLOX18啟動(dòng)子克隆、分析及瞬時(shí)表達(dá)載體的構(gòu)建
    3.2 CmLOX18啟動(dòng)子對(duì)非生物脅迫的響應(yīng)
    3.3 CmLOX18啟動(dòng)子對(duì)信號(hào)物質(zhì)的響應(yīng)
    3.4 CmLOX18啟動(dòng)子對(duì)激素的響應(yīng)
    3.5 CmLOX18基因的全長(zhǎng)ORF區(qū)克隆
    3.6 CmLOX18基因沉默表達(dá)載體的構(gòu)建及沉默植株的獲得
    3.7 CmLOX18基因?qū)Ω邷孛{迫的響應(yīng)
    3.8 CmLOX18基因超表達(dá)載體的構(gòu)建及農(nóng)桿菌侵染的甜瓜果肉變化
    3.9 甜瓜果實(shí)發(fā)育不同時(shí)期農(nóng)桿菌侵染后對(duì)CmLOX18的影響
    3.10 甜瓜果實(shí)發(fā)育不同時(shí)期農(nóng)桿菌侵染后對(duì)熒光素酶(LUC)的影響
    3.11 甜瓜果實(shí)發(fā)育不同時(shí)期農(nóng)桿菌侵染后對(duì)LOXs酶活性的影響
    3.12 甜瓜果實(shí)發(fā)育不同時(shí)期農(nóng)桿菌侵染后對(duì)LOX途徑下游香氣合成相關(guān)基因表達(dá)的影響
4 討論
    4.1 CmLOX18啟動(dòng)子對(duì)非生物脅迫、激素和信號(hào)類物質(zhì)的響應(yīng)
    4.2 CmLOX18在防御高溫脅迫中的作用
    4.3 CmLOX18在薄皮甜瓜果實(shí)香氣合成中的作用
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[2]薄皮甜瓜脂氧合酶CmLOX10和CmLOX13的原核表達(dá)、生化特性及啟動(dòng)子分析[D]. 曹嵩曉.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]柿9-脂氧合酶基因在植物衰老和抗逆反應(yīng)中的功能研究[D]. 侯亞莉.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
[4]甜瓜α-甘露糖苷酶基因的克隆、表達(dá)特性及功能分析[D]. 烏斯呼吉日嘎拉.內(nèi)蒙古大學(xué) 2014
[5]甜瓜醇脫氫酶基因家族成員鑒定、分類及表達(dá)調(diào)控[D]. 靳亞忠.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014

碩士論文
[1]甜瓜CmLOX09對(duì)逆境脅迫、激素和信號(hào)物質(zhì)的響應(yīng)及對(duì)番茄的遺傳轉(zhuǎn)化[D]. 鞠立君.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]接種枯萎病菌對(duì)甜瓜脂氧合酶活性及CmLOXs表達(dá)的影響[D]. 邵琪.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]OsWRKY12啟動(dòng)子序列響應(yīng)SA、MeJA和ET應(yīng)答元件的鑒定[D]. 黃詩瑋.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[4]花生脂氧合酶及其相關(guān)基因表達(dá)與黃曲霉產(chǎn)毒抗性的關(guān)系[D]. 婁慶任.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2013



本文編號(hào)：3170502