本研究以小金海棠（Malus xiaojinensis Cheng et Jiang）為試材,克隆得到MxWRKY55和MxWRKY64基因,通過序列分析、亞細(xì)胞定位分析、組織特異性表達(dá)分析和轉(zhuǎn)基因擬南芥抗性鑒定等方法,初步研究了小金海棠MxWRKY55和MxWRKY64基因的功能。根據(jù)已知的金冠蘋果部分序列設(shè)計(jì)特異性引物,以小金海棠cDNA為模板,通過PCR擴(kuò)增得到小金海棠MxWRKY55和MxWRKY64基因。MxWRKY55基因和MxWRKY64基因的開放閱讀框分別為984bp和1116 bp。亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示MxWRKY55和MxWRKY64蛋白均定位在細(xì)胞核中。半定量PCR結(jié)果顯示,MxWRKY55和MxWRKY64基因的表達(dá)具有組織特異性:在正常Hoagland營養(yǎng)液培養(yǎng)時（0 h）,MxWRKY55基因和MxWRKY64基因在所有檢測部位中都表達(dá),其中MxWRKY55基因在新葉和莖尖中的表達(dá)量較高,MxWRKY64基因只在新葉中的表達(dá)量較高。在鹽脅迫（200 mM NaCl）,低溫脅迫（2℃）,高鐵脅迫（160μM Fe-EDTA）和低鐵脅迫（4μM Fe-EDTA）下... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 植物抗逆相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的研究進(jìn)展
    1.2 WRKY轉(zhuǎn)錄因子的研究進(jìn)展
        1.2.1 WRKY類轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特征
        1.2.2 WRKY類轉(zhuǎn)錄因子的分類
        1.2.3 WRKY類轉(zhuǎn)錄因子的作用機(jī)理
        1.2.4 WRKY類轉(zhuǎn)錄因子在植物響應(yīng)非生物脅迫過程中的作用
    1.3 植物體內(nèi)鐵的營養(yǎng)
        1.3.1 鐵在植物體內(nèi)的重要作用
        1.3.2 高等植物的鐵吸收機(jī)制
    1.4 小金海棠鐵高效機(jī)理研究進(jìn)展
    1.5 蘋果中WRKY轉(zhuǎn)錄因子的研究進(jìn)展
    1.6 研究目的與意義
    1.7 技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 總RNA的提取
        2.2.2 cDNA第一鏈的合成
        2.2.3 MxWRKY55、MxWRKY64基因全長的獲得
        2.2.4 MxWRKY55、MxWRKY64基因的電泳及純化
        2.2.5 MxWRKY55、MxWRKY64基因的連接和轉(zhuǎn)化
        2.2.6 MxWRKY55、MxWRKY64基因的序列分析
        2.2.7 MxWRKY55、MxWRKY64蛋白的亞細(xì)胞定位
        2.2.8 MxWRKY55、MxWRKY64基因的半定量PCR分析
        2.2.9 MxWRKY55、MxWRKY64基因的實(shí)時熒光定量PCR分析
        2.2.10 擬南芥轉(zhuǎn)化試驗(yàn)
        2.2.11 轉(zhuǎn)基因擬南芥的耐鹽脅迫、耐低鐵脅迫和耐高鐵脅迫實(shí)驗(yàn)
        2.2.12 相關(guān)生理指標(biāo)的測定
        2.2.13 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法
3 結(jié)果與分析
    3.1 MxWRKY55基因的克隆與功能分析
        3.1.1 MxWRKY55基因的克隆與序列分析
        3.1.2 MxWRKY55蛋白的亞細(xì)胞定位
        3.1.3 MxWRKY55基因的表達(dá)分析
        3.1.4 MxWRKY55基因的功能分析
    3.2 MxWRKY64基因的克隆與功能分析
        3.2.1 MxWRKY64基因的克隆與序列分析
        3.2.2 MxWRKY64蛋白的亞細(xì)胞定位
        3.2.3 MxWRKY64基因的表達(dá)分析
        3.2.4 MxWRKY64基因的功能分析
4 討論
    4.1 MxWRKY55、MxWRKY64基因的序列分析
    4.2 MxWRKY55、MxWRKY64基因的亞細(xì)胞定位
    4.3 MxWRKY55、MxWRKY64基因的表達(dá)分析
    4.4 轉(zhuǎn)MxWRKY55、MxWRKY64基因擬南芥對低鐵脅迫、高鐵脅迫的應(yīng)答
    4.5 轉(zhuǎn)MxWRKY55、MxWRKY64基因擬南芥對鹽脅迫的應(yīng)答
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]一個甘蔗Ⅱd類WRKY轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆和表達(dá)分析[J]. 張旭,凌輝,劉峰,黃寧,王玲,毛花英,李聰娜,湯翰臣,蘇煒華,蘇亞春,闕友雄.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(23)
[2]蘋果MdWRKY18和MdWRKY40參與鹽脅迫途徑分子機(jī)理研究[J]. 許海峰,楊官顯,張靜,鄒琦,王意程,曲常志,姜生輝,王楠,陳學(xué)森.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(23)
[3]MdWRKY40介導(dǎo)提高蘋果與擬南芥對輪紋病菌的免疫抗性[J]. 周茜茜,邱化榮,何曉文,王憲璞,劉秀霞,李保華,吳樹敬,陳學(xué)森.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(21)
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[5]桃WRKY基因家族全基因組鑒定和表達(dá)分析[J]. 谷彥冰,冀志蕊,遲福梅,喬壯,徐成楠,張俊祥,周宗山,董慶龍.  遺傳. 2016(03)
[6]蘋果WRKY基因家族生物信息學(xué)及表達(dá)分析[J]. 谷彥冰,冀志蕊,遲福梅,喬壯,徐成楠,張俊祥,董慶龍,周宗山.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(16)
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博士論文
[1]蘋果鐵高效基因型生物技術(shù)的研究——MxNrampl和MxIrtl基因的克隆[D]. 戚金亮.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2003

碩士論文
[1]缺鐵脅迫下蘋果砧木垂絲海棠幼苗的生理特性和轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析[D]. 胡亞.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]蘋果MdWRKY33基因的克隆與功能分析[D]. 張遠(yuǎn)嬿.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[3]‘云香’水仙WRKY轉(zhuǎn)錄因子的克隆及功能研究[D]. 溫秀萍.福建農(nóng)林大學(xué) 2018
[4]NO介導(dǎo)小金海棠缺鐵適應(yīng)性反應(yīng)機(jī)理初步研究[D]. 李玉娜.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[5]蘋果兩個WRKY轉(zhuǎn)錄因子的克隆和表達(dá)分析[D]. 谷彥冰.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
[6]鐵脅迫對豌豆幼苗鐵代謝、光合作用及抗氧化系統(tǒng)的影響[D]. 岳麗娟.蘭州大學(xué) 2009



本文編號：3158889