露地菊（Chysanthemum morifolium）為菊科菊屬多年生草本宿根植物,其株型矮壯,具有抗寒,抗旱,抗瘠薄,抗病蟲,開花繁盛和管理粗放等特性,在園林綠化中占有重要地位。露地菊是典型的短日照植物,對(duì)光周期具有依賴性,花期大多集中在9月-10月,花期通常40-50天,在高緯度的寒冷的東北地區(qū),露地菊能夠正常繁殖生長(zhǎng),但盛花期恰遇霜凍期,植株受凍萎蔫使其觀賞性明顯下降、觀賞期大幅縮短。為了滿足觀賞性和市場(chǎng)適應(yīng)性對(duì)露地菊提早開花的要求,可以通過基因工程技術(shù)導(dǎo)入外源開花途徑的相關(guān)基因,使其在露地菊中過量表達(dá),從而達(dá)到改變花期的目的。因此,快速獲得花期提前的轉(zhuǎn)基因露地菊新品種具有重要的經(jīng)濟(jì)意義和推廣價(jià)值。本試驗(yàn)以改良露地菊‘火焰’的花期出發(fā)點(diǎn),借鑒已有報(bào)道的LEAFY基因不僅控制著花序分生組織向花分生組織的轉(zhuǎn)變,而且具有調(diào)控開花時(shí)間的作用,利用分子生物學(xué)手段克隆擬南芥LEAFY基因及轉(zhuǎn)基因相關(guān)技術(shù)操作,通過甘露糖篩選體系獲得抗性植物,并進(jìn)行后期相關(guān)分子實(shí)驗(yàn)鑒定,旨在獲得花期提前的露地菊‘火焰’早花品系,從而可以為進(jìn)一步研究和探討露地菊成花誘導(dǎo)的分子機(jī)制打下良好的基礎(chǔ)。本研究的主要結(jié)果... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 植物成花途徑的研究進(jìn)展
        1.1.1 光周期途徑（Photoperiod pathway）
        1.1.2 春化途徑（Vernalization pathway）
        1.1.3 自主途徑（Autonomous pathway）
        1.1.4 赤霉素途徑（Gibberellic acid pathway）
        1.1.5 年齡途徑（Age Pathway）
        1.1.6 環(huán)境溫度通路（Ambient Temperature Pathway）
    1.2 轉(zhuǎn)基因技術(shù)在花卉育種中的重要作用
        1.2.1 轉(zhuǎn)基因菊花的研究現(xiàn)狀
        1.2.2 生物安全標(biāo)記PMI基因在轉(zhuǎn)基因技術(shù)中的應(yīng)用
    1.3 LEAFY基因的研究進(jìn)展
        1.3.1 LEAFY基因與花發(fā)育調(diào)控網(wǎng)絡(luò)
        1.3.2 LEAFY基因在復(fù)葉發(fā)育過程中的特殊性
    1.4 本研究的目的和意義
2 擬南芥AtLEAFY基因克隆
    2.1 試驗(yàn)材料
    2.2 試驗(yàn)試劑
    2.3 試驗(yàn)方法
        2.3.1 擬南芥總RNA的提取
        2.3.2 甲醛凝膠電泳擬南芥總RNA
        2.3.3 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA
        2.3.4 以cDNA為模板,進(jìn)行PCR擴(kuò)增
        2.3.5 PCR產(chǎn)物回收
        2.3.6 PCR產(chǎn)物與載體的連接
        2.3.7 重組轉(zhuǎn)化E.coli及篩選
        2.3.8 含有重組子的菌液的培養(yǎng)及菌液PCR檢測(cè)目標(biāo)基因
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 提取擬南芥RNA
        2.4.2 擬南芥AtLEAFY基因克隆PCR電泳結(jié)果
        2.4.3 測(cè)序結(jié)果
    2.5 討論
    2.6 本章小結(jié)
3 擬南芥AtLEAFY基因過表達(dá)載體的構(gòu)建
    3.1 材料與試劑
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 引物設(shè)計(jì)
        3.2.2 利用attB-LFY-F/R引物進(jìn)行第一次PCR
        3.2.3 利用attB-adapter-F/R進(jìn)行第二次PCR
        3.2.4 BP反應(yīng)
        3.2.5 LR反應(yīng)
        3.2.6 雙酶切反應(yīng)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 attB-adaptor接頭位點(diǎn)的引入
        3.3.2 BP反應(yīng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化鑒定
        3.3.3 LR反應(yīng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化鑒定
        3.3.4 雙酶切驗(yàn)證
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
4 露地菊‘火焰’的遺傳轉(zhuǎn)化及抗性植株的獲得
    4.1 材料與試劑
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 試驗(yàn)試劑
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 pCAMBIA1301-PMI-AtLFY表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        4.2.2 利用葉盤法進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化
        4.2.3 抗性植株的獲得
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 pCAMBIA1301-PMI-AtLFY表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        4.3.2 露地菊‘火焰’甘露糖篩選階段
    4.4 討論
    4.5 本章小結(jié)
5 抗性植株的分子生物學(xué)鑒定
    5.1 材料與試劑
        5.1.1 試驗(yàn)材料
        5.1.2 試驗(yàn)試劑
    5.2 試驗(yàn)方法
        5.2.1 露地菊‘火焰’抗性植株的PCR檢測(cè)
        5.2.2 初步鑒定的轉(zhuǎn)基因植株GUS染色檢測(cè)
        5.2.3 Western Blot檢測(cè)PMI蛋白
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 抗性植株的PCR檢測(cè)
        5.3.2 轉(zhuǎn)基因植株GUS染色檢測(cè)結(jié)果
        5.3.3 Western Blot檢測(cè)PMI蛋白結(jié)果
    5.4 討論
    5.5 本章小結(jié)
6 轉(zhuǎn)基因植株的表型鑒定
    6.1 材料與試劑
    6.2 試驗(yàn)方法
        6.2.1 露地菊‘火焰’組培苗的煉苗與移栽
        6.2.2 露地菊‘火焰’表型鑒定
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 轉(zhuǎn)基因露地菊‘火焰’蕾期
        6.3.2 轉(zhuǎn)基因露地菊‘火焰’露紅期
        6.3.3 轉(zhuǎn)基因露地菊‘火焰’始花期
        6.3.4 轉(zhuǎn)基因露地菊‘火焰’盛花期
        6.3.5 野生型露地菊‘火焰’盛花期
        6.3.6 轉(zhuǎn)基因各株系花期統(tǒng)計(jì)
    6.4 討論
    6.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]LEAFY（LFY）基因在花發(fā)育網(wǎng)絡(luò)調(diào)控中的研究進(jìn)展[J]. 張亞萍,習(xí)珺珺,于麗霞,李斌,高則睿,鄢波.  現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2012(09)
[2]菊花觀賞性狀和農(nóng)藝性狀基因工程改良研究進(jìn)展[J]. 洪波,史春鳳,張曉嬌,高俊平.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2009(04)
[3]Ectopic expression of a hyacinth AGL6 homolog caused earlier flowering and homeotic conversion in Arabidopsis[J]. FAN JinHui1, LI WenQing2, DONG XiuChun1, GUO Wei1 & SHU HuaiRui3 1 College of Forestry, Shandong Agricultural University, Taian 271018, China; 2 College of Biological Science, China Agricultural University, Beijing 100094, China; 3 College of Horticulture Science and Engineering, Shandong Agricultural University, Taian 271018, China.  Science in China（Series C:Life Sciences）. 2007(05)
[4]擬南芥LEAFY基因在花發(fā)育中的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控及其生物學(xué)功能[J]. 王利琳,梁海曼,龐基良,朱睦元.  遺傳. 2004(01)
[5]擬南芥LFY cDNA的克隆及轉(zhuǎn)化菊花的研究[J]. 邵寒霜,李繼紅,鄭學(xué)勤,陳守才.  植物學(xué)報(bào). 1999(03)



本文編號(hào)：3155381