MeJA和NO誘導(dǎo)冷藏黃瓜抗冷性與抗氧化防御系統(tǒng)的關(guān)系
發(fā)布時間：2021-04-20 22:29
黃瓜（Cucumis sativus）原產(chǎn)于亞熱帶,是一種冷敏感性蔬菜,在不適宜的低溫下貯藏極易發(fā)生冷害,從而影響黃瓜的貨架期及品質(zhì)。前人研究表明,外源MeJA和NO處理可減輕采后果蔬冷害的發(fā)生,但是這兩種物質(zhì)在誘導(dǎo)抗冷性中的作用及其相互關(guān)系尚不清楚。本論文研究了MeJA和NO對冷藏黃瓜抗氧化防御系統(tǒng)的影響及其與抗冷性的關(guān)系,并用異源表達方法對CsCAT3進行了功能分析,主要研究結(jié)果如下:1.將黃瓜貯藏于不同的溫度,結(jié)果表明10℃是黃瓜的最適貯藏溫度;5℃會使黃瓜發(fā)生冷害,且在5℃下貯藏時間越長,轉(zhuǎn)到常溫20℃后貨架期最短。用0.1-10μmol·L-1的SNP和MeJA處理黃瓜,然后置于5℃貯藏。結(jié)果表明,1μmol·L-1的SNP、10μmol·L-1的MeJA處理誘導(dǎo)黃瓜抗冷性的效果較好。2.MeJA和SNP處理降低了丙二醛含量,減緩了O2·-產(chǎn)生速率,降低了H2O2含量,上調(diào)了CsCAT1和CsCAT3基因和CAT3蛋白表達,...
【文章來源】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)廣東省
【文章頁數(shù)】：185 頁
【學(xué)位級別】：博士
【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略詞表
第1章 前言
1.1 研究背景
1.2 國內(nèi)外研究進展
1.2.1 植物冷害的生理機制
1.2.1.1 冷害對膜系統(tǒng)的影響
1.2.1.2 冷害對抗氧化能力和滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的影響
1.2.2 植物冷害的分子機制
1.2.3 低溫信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及不同信號途徑的“Cross-talk”
1.2.4 與不同信號途徑的“交談”（Cross-talk）
1.2.4.1 抗冷性與抗氧化防御系統(tǒng)的關(guān)系
1.2.5 NO和MeJA在園藝作物誘導(dǎo)抗冷性中的研究進展
1.2.6 NO與MeJA之間的相互關(guān)系
1.3 研究目的意義
第2章 MeJA和NO誘導(dǎo)黃瓜抗冷性的生理機理
2.1 引言
2.2 材料與方法
2.2.1 試驗材料與處理
2.2.1.1 供試材料
2.2.1.2 試驗處理
2.2.2 表觀指標的觀察及生理指標的測定
2.2.2.1 次生病害指數(shù)觀察
2.2.2.2 果實失重率的測定
2.2.2.3 相對電導(dǎo)率測定
2.2.2.4 丙二醛MDA含量測定
2.2.2.5 活性氧及防御酶活性的測定
2O2）含量的測定"> 2.2.2.5.1 過氧化氫（H2O2）含量的測定
2.2.2.5.2 CAT活性測定
2.2.2.5.3 POD活性測定
2.2.2.5.4 SOD活性測定
2.2.2.5.5 PPO活性的測定
2
·?)產(chǎn)生速率的測定"> 2.2.2.5.6 超氧陰離子(O2
·?)產(chǎn)生速率的測定
2.2.2.5.7 PAL活性的測定
2.2.3 主要試劑及儀器設(shè)備
2.2.3.1 主要試劑
2.2.3.2 主要儀器設(shè)備
2.2.4 數(shù)據(jù)分析
2.3 結(jié)果與分析
2.3.1 不同貯藏溫度對黃瓜采后壽命的影響
2.3.2 低溫冷害條件下不同貯藏時間對采后黃瓜貯藏壽命的影響
2.3.3 不同濃度MeJA和SNP對冷藏黃瓜抗冷性的影響
2.3.3.1 不同濃度MeJA和SNP對相對電導(dǎo)率的影響
2.3.3.2 不同濃度MeJA和SNP對失重率的影響
2.3.3.3 不同濃度MeJA和SNP對次生病情指數(shù)的影響
2.3.4 MeJA和SNP處理減輕黃瓜冷害的生理機理
2.3.4.1 MeJA和SNP處理對冷藏黃瓜膜系統(tǒng)的影響
2.3.4.2 MeJA和SNP處理對冷藏黃瓜失重率的影響
2.3.4.3 MeJA和SNP處理對冷藏黃瓜次生病情指數(shù)的影響
2.3.4.4 MeJA和SNP處理對冷藏黃瓜活性氧及防御酶活性的影響
2
·?產(chǎn)生速率的影響"> 2.3.4.4.1 對O2
·?產(chǎn)生速率的影響
2O2含量的影響"> 2.3.4.4.2 對H2O2含量的影響
2.3.4.4.3 對CAT活性的影響
2.3.4.4.4 對POD活性的影響
2.3.4.4.5 對SOD活性的影響
2.3.4.4.6 對PPO活性的影響
2.3.4.4.7 對PAL活性的影響
2.4 小結(jié)
2O2在MeJA和NO誘導(dǎo)黃瓜抗冷性中的作用">第3章 H2O2在MeJA和NO誘導(dǎo)黃瓜抗冷性中的作用
3.1 引言
3.2 材料與方法
3.2.1 供試材料
3.2.2 試驗處理
3.2.3 表觀指標的觀察及生理指標的測定
3.2.3.1 次生病害指數(shù)觀察
3.2.3.2 相對電導(dǎo)率測定
3.2.3.3 活性氧及防御酶活性的測定
2O2）含量的測定"> 3.2.3.3.1 過氧化氫（H2O2）含量的測定
3.2.3.3.2 CAT活性測定
3.2.4 黃瓜CsCAT1、CsCAT3表達檢測
3.2.4.1 黃瓜果皮總RNA的提取
3.2.4.2 總RNA濃度的測定及完整性檢測
3.2.4.3 總RNA的純化及檢測
3.2.4.4 cDNA第一鏈的合成
3.2.4.5 熒光定量PCR的引物設(shè)計和篩選
3.2.5 黃瓜果皮蛋白樣品的制備與Western blot
3.2.5.1 黃瓜果皮總蛋白的提取
3.2.5.2 蛋白定量
3.2.5.3 電泳
3.2.5.4 染色和脫色
3.2.5.5 Western blot雜交步驟
3.2.5.6 制備黃瓜CsCAT3蛋白抗體
3.2.5.6.1 原核表達載體的構(gòu)建
3.2.5.6.2 蛋白的表達及可溶性分析
3.2.5.6.3 將構(gòu)建好的重組載體交由杭州華安生物技術(shù)有限公司制備抗體
3.2.6 主要試劑及儀器設(shè)備
3.2.6.1 主要試劑
3.2.6.2 主要儀器設(shè)備
3.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
3.3 結(jié)果與分析
3.3.1 DPI及其與MeJA或NO結(jié)合處理對冷藏黃瓜相對電導(dǎo)率的影響
3.3.2 DPI及其與MeJA或NO結(jié)合處理對冷藏黃瓜次生病情指數(shù)的影響
2O2含量的影響"> 3.3.3 DPI及其與MeJA或NO結(jié)合處理對冷藏黃瓜H2O2含量的影響
3.3.4 DPI及其與MeJA或NO結(jié)合處理對冷藏黃瓜CAT活性的影響
3.3.5 DPI及其與MeJA或NO結(jié)合處理對冷藏黃瓜CsCAT1表達的影響
3.3.6 DPI及其與MeJA或NO結(jié)合處理對冷藏黃瓜CsCAT3表達的影響
3.3.7 黃瓜CAT3抗體的制備
3.3.7.1 分離CsCAT3基因
3.3.7.2 重組載體雙酶切
2O2的關(guān)系"> 3.3.7.3 MeJA和NO對冷藏黃瓜CsCAT3蛋白表達的影響及其與H2O2的關(guān)系
3.4 小結(jié)
第4章 MeJA和NO在誘導(dǎo)黃瓜抗冷性中的相互作用關(guān)系
4.1 引言
4.2 材料與方法
4.2.1 供試材料
4.2.2 試驗處理
4.2.3 表觀指標的觀察及生理指標的測定
4.2.3.1 次生病害指數(shù)觀察
4.2.3.2 果實失重率的測定
4.2.3.3 相對電導(dǎo)率測定
4.2.3.4 丙二醛MDA含量測定
4.2.3.5 活性氧及防御酶活性的測定
2O2）含量的測定"> 4.2.3.5.1 過氧化氫（H2O2）含量的測定
4.2.3.5.2 CAT活性測定
4.2.3.5.3 POD活性測定
4.2.3.5.4 SOD活性測定
4.2.3.5.5 PPO活性測定
2
·?)產(chǎn)生速率的測定"> 4.2.3.5.6 超氧陰離子(O2
·?)產(chǎn)生速率的測定
4.2.3.5.7 PAL活性測定
4.2.4 黃瓜CsCAT1、CsCAT3表達檢測
4.2.5 主要試劑及儀器設(shè)備
4.2.5.1 主要試劑
4.2.5.2 儀器設(shè)備
4.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
4.3 結(jié)果與分析
4.3.1 MeJA和NO生物合成抑制劑對MeJA和NO誘導(dǎo)黃瓜抗冷性的影響
4.3.1.1 對相對電導(dǎo)率的影響
4.3.1.2 對失重率的影響
4.3.1.3 對次生病情指數(shù)的影響
4.3.1.4 對丙二醛含量的影響
4.3.2 抑制MeJA和NO的生物合成對MeJA和NO激活黃瓜抗氧化防御酶系統(tǒng)的影響
2
·?產(chǎn)生速率的影響"> 4.3.2.1 對O2
·?產(chǎn)生速率的影響
2O2含量的影響"> 4.3.2.2 對H2O2含量的影響
4.3.2.3 對CAT活性的影響
4.3.2.4 對POD活性的影響
4.3.2.5 對SOD活性的影響
4.3.2.6 對PPO活性的影響
4.3.2.7 對PAL活性的影響
4.3.2.8 對黃瓜CAT1表達的影響
4.3.2.9 對黃瓜CAT3表達的影響
4.4 小結(jié)
第5章 MeJA和NO處理黃瓜后的轉(zhuǎn)錄組分析
5.1 前言
5.2 材料與方法
5.2.1 試驗材料
5.2.2 試驗處理
5.2.3 測序建庫流程
5.2.3.1 黃瓜果皮總RNA提取
5.2.3.2 文庫構(gòu)建
5.2.3.3 庫檢
5.2.3.4 上機測序
5.2.4 生物信息分析流程
5.2.4.1 原始序列數(shù)據(jù)
5.2.4.2 測序質(zhì)量評估
5.2.4.2.1 測序錯誤率分布檢查
5.2.4.2.2 A/T/C/G含量分布檢查
5.2.4.2.3 測序數(shù)據(jù)過濾
5.2.4.3 參考序列比對分析
5.2.4.3.1 Reads在參考基因組不同區(qū)域的分布情況
5.2.4.3.2 Reads在染色體上的密度分布情況
5.2.4.4 可變剪切分析
5.2.4.5 新轉(zhuǎn)錄本預(yù)測
5.2.4.6 SNP和lnDel分析
5.2.4.7 基因表達水平分析
5.2.4.8 RNA-seq整體質(zhì)量評估
5.2.4.8.1 表達水平的飽和曲線檢查
5.2.4.8.2 均一性分布檢查
5.2.4.9 差異表達水平
5.2.4.9.1 基因表達水平對比
5.2.4.9.2 差異基因列表
5.2.4.9.3 差異表達基因篩選
5.2.4.9.4 差異基因聚類分析
5.2.4.9.5 差異基因韋恩圖
5.2.4.10 差異基因GO富集分析
5.2.4.11 差異基因KEGG富集分析
5.2.4.11.1 差異基因KEGG富集散點圖
5.2.5 相關(guān)基因qRT-PCR驗證
5.2.6 主要試劑及儀器設(shè)備
5.3 結(jié)果與分析
5.3.1 黃瓜果皮組織總RNA質(zhì)量檢測
5.3.2 測序質(zhì)量評估
5.3.3 參考序列比對分析
5.3.3.1 Reads與參考基因組比對情況
5.3.3.2 Reads在參考基因組不同區(qū)域的分布情況
5.3.3.3 Reads在染色體上的密度分布情況
5.3.4 可變剪切（alternative splicing，AS）分析
5.3.5 基因表達水平分析
5.3.6 RNA-seq整體質(zhì)量評估
5.3.7 差異基因表達分析
5.3.8 差異基因GO富集分析
5.3.9 差異基因KEGG富集分析
5.3.10 差異基因表達驗證
5.4 小結(jié)
第6章 超表達CsCAT3的擬南芥植株對低溫脅迫的反應(yīng)
6.1 前言
6.2 材料與方法
6.2.1 植物材料
6.2.2 試驗處理
6.2.3 試驗方法
6.2.3.1 黃瓜過氧化氫酶（Catalase3）基因的克隆與功能分析
6.2.3.2 pCAMBIA2300-CsCAT3基因超表達重組載體構(gòu)建
6.2.3.3 表達載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌（電擊法轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌LBA4404感受態(tài)細胞）
6.2.3.4 擬南芥的栽培和轉(zhuǎn)化
6.2.3.5 轉(zhuǎn)基因植株的篩選
6.2.3.6 轉(zhuǎn)化植株的PCR檢測
6.2.3.7 基因表達水平檢測
6.2.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥相關(guān)生理指標測定
6.2.4.1 相對電導(dǎo)率測定
2O2、O2
·?含量及細胞死亡"> 6.2.4.2 組織化學(xué)染色法檢測H2O2、O2
·?含量及細胞死亡
6.2.4.3 擬南芥CAT活性測定
6.2.5 主要試劑及儀器設(shè)備
6.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
6.3 結(jié)果與分析
6.3.1 CsCAT3生物信息學(xué)分析
6.3.1.1 CsCAT3序列分析
6.3.1.2 CsCAT3序列比對及系統(tǒng)進化樹分析
6.3.2 黃瓜CsCAT3表達載體構(gòu)建和在擬南芥中表達
6.3.2.1 重組載體構(gòu)建
6.3.2.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥植株的篩選
6.3.2.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥植株T3代PCR檢測
6.3.3 超表達CsCAT3的擬南芥植株對低溫的反應(yīng)
6.3.3.1 低溫脅迫對擬南芥葉片相對電導(dǎo)率的影響
6.3.3.2 低溫脅迫對擬南芥葉片活性氧水平及細胞活性的影響
6.3.3.3 低溫脅迫對擬南芥CAT活性的影響
6.3.3.4 低溫脅迫對擬南芥相關(guān)基因表達的影響
6.4 小結(jié)
第7章 討論
7.1 MeJA或NO處理對采后黃瓜抗氧化防御系統(tǒng)的影響及其與抗冷性的關(guān)系
2O2在MeJA、NO誘導(dǎo)黃瓜抗冷性的生理機制"> 7.2 H2O2在MeJA、NO誘導(dǎo)黃瓜抗冷性的生理機制
7.3 CAT在MeJA和NO誘導(dǎo)采后黃瓜抗冷性中的作用
7.4 MeJA和NO在誘導(dǎo)黃瓜抗氧化系統(tǒng)和抗冷性中的作用及其相互關(guān)系
全文結(jié)論
致謝
參考文獻
附錄
附錄A DPI及其與MeJA、SNP結(jié)合處理對冷藏黃瓜抗冷性的影響
附圖B 抑制內(nèi)源JA和NO的合成對NO和MeJA誘導(dǎo)黃瓜抗冷性的影響
附錄C 攻讀博士期間取得的科研成果
本文編號：3150524
【文章來源】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)廣東省
【文章頁數(shù)】：185 頁
【學(xué)位級別】：博士
【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略詞表
第1章 前言
1.1 研究背景
1.2 國內(nèi)外研究進展
1.2.1 植物冷害的生理機制
1.2.1.1 冷害對膜系統(tǒng)的影響
1.2.1.2 冷害對抗氧化能力和滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的影響
1.2.2 植物冷害的分子機制
1.2.3 低溫信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及不同信號途徑的“Cross-talk”
1.2.4 與不同信號途徑的“交談”（Cross-talk）
1.2.4.1 抗冷性與抗氧化防御系統(tǒng)的關(guān)系
1.2.5 NO和MeJA在園藝作物誘導(dǎo)抗冷性中的研究進展
1.2.6 NO與MeJA之間的相互關(guān)系
1.3 研究目的意義
第2章 MeJA和NO誘導(dǎo)黃瓜抗冷性的生理機理
2.1 引言
2.2 材料與方法
2.2.1 試驗材料與處理
2.2.1.1 供試材料
2.2.1.2 試驗處理
2.2.2 表觀指標的觀察及生理指標的測定
2.2.2.1 次生病害指數(shù)觀察
2.2.2.2 果實失重率的測定
2.2.2.3 相對電導(dǎo)率測定
2.2.2.4 丙二醛MDA含量測定
2.2.2.5 活性氧及防御酶活性的測定
2O2）含量的測定"> 2.2.2.5.1 過氧化氫（H2O2）含量的測定
2.2.2.5.2 CAT活性測定
2.2.2.5.3 POD活性測定
2.2.2.5.4 SOD活性測定
2.2.2.5.5 PPO活性的測定
2
·?)產(chǎn)生速率的測定"> 2.2.2.5.6 超氧陰離子(O2
·?)產(chǎn)生速率的測定
2.2.2.5.7 PAL活性的測定
2.2.3 主要試劑及儀器設(shè)備
2.2.3.1 主要試劑
2.2.3.2 主要儀器設(shè)備
2.2.4 數(shù)據(jù)分析
2.3 結(jié)果與分析
2.3.1 不同貯藏溫度對黃瓜采后壽命的影響
2.3.2 低溫冷害條件下不同貯藏時間對采后黃瓜貯藏壽命的影響
2.3.3 不同濃度MeJA和SNP對冷藏黃瓜抗冷性的影響
2.3.3.1 不同濃度MeJA和SNP對相對電導(dǎo)率的影響
2.3.3.2 不同濃度MeJA和SNP對失重率的影響
2.3.3.3 不同濃度MeJA和SNP對次生病情指數(shù)的影響
2.3.4 MeJA和SNP處理減輕黃瓜冷害的生理機理
2.3.4.1 MeJA和SNP處理對冷藏黃瓜膜系統(tǒng)的影響
2.3.4.2 MeJA和SNP處理對冷藏黃瓜失重率的影響
2.3.4.3 MeJA和SNP處理對冷藏黃瓜次生病情指數(shù)的影響
2.3.4.4 MeJA和SNP處理對冷藏黃瓜活性氧及防御酶活性的影響
2
·?產(chǎn)生速率的影響"> 2.3.4.4.1 對O2
·?產(chǎn)生速率的影響
2O2含量的影響"> 2.3.4.4.2 對H2O2含量的影響
2.3.4.4.3 對CAT活性的影響
2.3.4.4.4 對POD活性的影響
2.3.4.4.5 對SOD活性的影響
2.3.4.4.6 對PPO活性的影響
2.3.4.4.7 對PAL活性的影響
2.4 小結(jié)
2O2在MeJA和NO誘導(dǎo)黃瓜抗冷性中的作用">第3章 H2O2在MeJA和NO誘導(dǎo)黃瓜抗冷性中的作用
3.1 引言
3.2 材料與方法
3.2.1 供試材料
3.2.2 試驗處理
3.2.3 表觀指標的觀察及生理指標的測定
3.2.3.1 次生病害指數(shù)觀察
3.2.3.2 相對電導(dǎo)率測定
3.2.3.3 活性氧及防御酶活性的測定
2O2）含量的測定"> 3.2.3.3.1 過氧化氫（H2O2）含量的測定
3.2.3.3.2 CAT活性測定
3.2.4 黃瓜CsCAT1、CsCAT3表達檢測
3.2.4.1 黃瓜果皮總RNA的提取
3.2.4.2 總RNA濃度的測定及完整性檢測
3.2.4.3 總RNA的純化及檢測
3.2.4.4 cDNA第一鏈的合成
3.2.4.5 熒光定量PCR的引物設(shè)計和篩選
3.2.5 黃瓜果皮蛋白樣品的制備與Western blot
3.2.5.1 黃瓜果皮總蛋白的提取
3.2.5.2 蛋白定量
3.2.5.3 電泳
3.2.5.4 染色和脫色
3.2.5.5 Western blot雜交步驟
3.2.5.6 制備黃瓜CsCAT3蛋白抗體
3.2.5.6.1 原核表達載體的構(gòu)建
3.2.5.6.2 蛋白的表達及可溶性分析
3.2.5.6.3 將構(gòu)建好的重組載體交由杭州華安生物技術(shù)有限公司制備抗體
3.2.6 主要試劑及儀器設(shè)備
3.2.6.1 主要試劑
3.2.6.2 主要儀器設(shè)備
3.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
3.3 結(jié)果與分析
3.3.1 DPI及其與MeJA或NO結(jié)合處理對冷藏黃瓜相對電導(dǎo)率的影響
3.3.2 DPI及其與MeJA或NO結(jié)合處理對冷藏黃瓜次生病情指數(shù)的影響
2O2含量的影響"> 3.3.3 DPI及其與MeJA或NO結(jié)合處理對冷藏黃瓜H2O2含量的影響
3.3.4 DPI及其與MeJA或NO結(jié)合處理對冷藏黃瓜CAT活性的影響
3.3.5 DPI及其與MeJA或NO結(jié)合處理對冷藏黃瓜CsCAT1表達的影響
3.3.6 DPI及其與MeJA或NO結(jié)合處理對冷藏黃瓜CsCAT3表達的影響
3.3.7 黃瓜CAT3抗體的制備
3.3.7.1 分離CsCAT3基因
3.3.7.2 重組載體雙酶切
2O2的關(guān)系"> 3.3.7.3 MeJA和NO對冷藏黃瓜CsCAT3蛋白表達的影響及其與H2O2的關(guān)系
3.4 小結(jié)
第4章 MeJA和NO在誘導(dǎo)黃瓜抗冷性中的相互作用關(guān)系
4.1 引言
4.2 材料與方法
4.2.1 供試材料
4.2.2 試驗處理
4.2.3 表觀指標的觀察及生理指標的測定
4.2.3.1 次生病害指數(shù)觀察
4.2.3.2 果實失重率的測定
4.2.3.3 相對電導(dǎo)率測定
4.2.3.4 丙二醛MDA含量測定
4.2.3.5 活性氧及防御酶活性的測定
2O2）含量的測定"> 4.2.3.5.1 過氧化氫（H2O2）含量的測定
4.2.3.5.2 CAT活性測定
4.2.3.5.3 POD活性測定
4.2.3.5.4 SOD活性測定
4.2.3.5.5 PPO活性測定
2
·?)產(chǎn)生速率的測定"> 4.2.3.5.6 超氧陰離子(O2
·?)產(chǎn)生速率的測定
4.2.3.5.7 PAL活性測定
4.2.4 黃瓜CsCAT1、CsCAT3表達檢測
4.2.5 主要試劑及儀器設(shè)備
4.2.5.1 主要試劑
4.2.5.2 儀器設(shè)備
4.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
4.3 結(jié)果與分析
4.3.1 MeJA和NO生物合成抑制劑對MeJA和NO誘導(dǎo)黃瓜抗冷性的影響
4.3.1.1 對相對電導(dǎo)率的影響
4.3.1.2 對失重率的影響
4.3.1.3 對次生病情指數(shù)的影響
4.3.1.4 對丙二醛含量的影響
4.3.2 抑制MeJA和NO的生物合成對MeJA和NO激活黃瓜抗氧化防御酶系統(tǒng)的影響
2
·?產(chǎn)生速率的影響"> 4.3.2.1 對O2
·?產(chǎn)生速率的影響
2O2含量的影響"> 4.3.2.2 對H2O2含量的影響
4.3.2.3 對CAT活性的影響
4.3.2.4 對POD活性的影響
4.3.2.5 對SOD活性的影響
4.3.2.6 對PPO活性的影響
4.3.2.7 對PAL活性的影響
4.3.2.8 對黃瓜CAT1表達的影響
4.3.2.9 對黃瓜CAT3表達的影響
4.4 小結(jié)
第5章 MeJA和NO處理黃瓜后的轉(zhuǎn)錄組分析
5.1 前言
5.2 材料與方法
5.2.1 試驗材料
5.2.2 試驗處理
5.2.3 測序建庫流程
5.2.3.1 黃瓜果皮總RNA提取
5.2.3.2 文庫構(gòu)建
5.2.3.3 庫檢
5.2.3.4 上機測序
5.2.4 生物信息分析流程
5.2.4.1 原始序列數(shù)據(jù)
5.2.4.2 測序質(zhì)量評估
5.2.4.2.1 測序錯誤率分布檢查
5.2.4.2.2 A/T/C/G含量分布檢查
5.2.4.2.3 測序數(shù)據(jù)過濾
5.2.4.3 參考序列比對分析
5.2.4.3.1 Reads在參考基因組不同區(qū)域的分布情況
5.2.4.3.2 Reads在染色體上的密度分布情況
5.2.4.4 可變剪切分析
5.2.4.5 新轉(zhuǎn)錄本預(yù)測
5.2.4.6 SNP和lnDel分析
5.2.4.7 基因表達水平分析
5.2.4.8 RNA-seq整體質(zhì)量評估
5.2.4.8.1 表達水平的飽和曲線檢查
5.2.4.8.2 均一性分布檢查
5.2.4.9 差異表達水平
5.2.4.9.1 基因表達水平對比
5.2.4.9.2 差異基因列表
5.2.4.9.3 差異表達基因篩選
5.2.4.9.4 差異基因聚類分析
5.2.4.9.5 差異基因韋恩圖
5.2.4.10 差異基因GO富集分析
5.2.4.11 差異基因KEGG富集分析
5.2.4.11.1 差異基因KEGG富集散點圖
5.2.5 相關(guān)基因qRT-PCR驗證
5.2.6 主要試劑及儀器設(shè)備
5.3 結(jié)果與分析
5.3.1 黃瓜果皮組織總RNA質(zhì)量檢測
5.3.2 測序質(zhì)量評估
5.3.3 參考序列比對分析
5.3.3.1 Reads與參考基因組比對情況
5.3.3.2 Reads在參考基因組不同區(qū)域的分布情況
5.3.3.3 Reads在染色體上的密度分布情況
5.3.4 可變剪切（alternative splicing，AS）分析
5.3.5 基因表達水平分析
5.3.6 RNA-seq整體質(zhì)量評估
5.3.7 差異基因表達分析
5.3.8 差異基因GO富集分析
5.3.9 差異基因KEGG富集分析
5.3.10 差異基因表達驗證
5.4 小結(jié)
第6章 超表達CsCAT3的擬南芥植株對低溫脅迫的反應(yīng)
6.1 前言
6.2 材料與方法
6.2.1 植物材料
6.2.2 試驗處理
6.2.3 試驗方法
6.2.3.1 黃瓜過氧化氫酶（Catalase3）基因的克隆與功能分析
6.2.3.2 pCAMBIA2300-CsCAT3基因超表達重組載體構(gòu)建
6.2.3.3 表達載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌（電擊法轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌LBA4404感受態(tài)細胞）
6.2.3.4 擬南芥的栽培和轉(zhuǎn)化
6.2.3.5 轉(zhuǎn)基因植株的篩選
6.2.3.6 轉(zhuǎn)化植株的PCR檢測
6.2.3.7 基因表達水平檢測
6.2.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥相關(guān)生理指標測定
6.2.4.1 相對電導(dǎo)率測定
2O2、O2
·?含量及細胞死亡"> 6.2.4.2 組織化學(xué)染色法檢測H2O2、O2
·?含量及細胞死亡
6.2.4.3 擬南芥CAT活性測定
6.2.5 主要試劑及儀器設(shè)備
6.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
6.3 結(jié)果與分析
6.3.1 CsCAT3生物信息學(xué)分析
6.3.1.1 CsCAT3序列分析
6.3.1.2 CsCAT3序列比對及系統(tǒng)進化樹分析
6.3.2 黃瓜CsCAT3表達載體構(gòu)建和在擬南芥中表達
6.3.2.1 重組載體構(gòu)建
6.3.2.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥植株的篩選
6.3.2.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥植株T3代PCR檢測
6.3.3 超表達CsCAT3的擬南芥植株對低溫的反應(yīng)
6.3.3.1 低溫脅迫對擬南芥葉片相對電導(dǎo)率的影響
6.3.3.2 低溫脅迫對擬南芥葉片活性氧水平及細胞活性的影響
6.3.3.3 低溫脅迫對擬南芥CAT活性的影響
6.3.3.4 低溫脅迫對擬南芥相關(guān)基因表達的影響
6.4 小結(jié)
第7章 討論
7.1 MeJA或NO處理對采后黃瓜抗氧化防御系統(tǒng)的影響及其與抗冷性的關(guān)系
2O2在MeJA、NO誘導(dǎo)黃瓜抗冷性的生理機制"> 7.2 H2O2在MeJA、NO誘導(dǎo)黃瓜抗冷性的生理機制
7.3 CAT在MeJA和NO誘導(dǎo)采后黃瓜抗冷性中的作用
7.4 MeJA和NO在誘導(dǎo)黃瓜抗氧化系統(tǒng)和抗冷性中的作用及其相互關(guān)系
全文結(jié)論
致謝
參考文獻
附錄
附錄A DPI及其與MeJA、SNP結(jié)合處理對冷藏黃瓜抗冷性的影響
附圖B 抑制內(nèi)源JA和NO的合成對NO和MeJA誘導(dǎo)黃瓜抗冷性的影響
附錄C 攻讀博士期間取得的科研成果
本文編號：3150524
本文鏈接：http://sikaile.net/nykjlw/yylw/3150524.html
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