金針菇[Flammulina velutiper（Fr.）Sing]是著名的食用菌工廠化生產品種,其生長周期短,出菇產量高,且營養(yǎng)豐富,具有抗癌、防心腦血管疾病等功效。然而在工廠化栽培金針菇過程中由于低溫控制所需能耗較大,企業(yè)運營成本增加。巨大口蘑（Tricholoma giganteum）是高溫型食用菌品種,食藥用價值高,貯藏性好且抗逆性強。但是由于其菌絲生長速度慢,出菇周期長,還無法全面普及市場;原生質體融合技術在食用菌領域上是一項重要的育種技術,相比于傳統(tǒng)的雜交技術,它具有省時省力、目的性強等特點。本研究意在利用原生質體融合技術培育出能在中高溫環(huán)境下生長出菇的金針菇新菌株和生長周期短的巨大口蘑新菌株。本研究對來源不同的金針菇和巨大口蘑菌株進行了親本菌株的篩選,優(yōu)勢菌株原生質體經雙親滅活后利用PEG進行融合,最后獲得與親本有遺傳差異性的菌株4株,采用分子生物學ISSR分析方法對其進行了鑒定,同時,還研究了它們的生物學特性。主要研究結果如下:1、親本菌株的篩選。本研究以菌絲生長速度、原生質體產量和原生質體的單核化程度為指標,最終篩選確定JD03以及KD04作為原生質體融合的親本菌株。... 

【文章來源】：華南農業(yè)大學廣東省

【文章頁數】：79 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 金針菇概述
        1.1.1 金針菇的生物學特性
        1.1.2 金針菇的產業(yè)現狀
        1.1.3 金針菇育種的研究進展
    1.2 巨大口蘑概述
        1.2.1 巨大口蘑的生物學特性
        1.2.2 巨大口蘑產業(yè)現狀
    1.3 原生質體育種技術研究進展
        1.3.1 原生質體育種技術簡介
        1.3.2 原生質體育種技術在食用菌領域的應用
        1.3.3 食用菌原生質體的制備和再生
        1.3.4 食用菌原生質體誘變技術
        1.3.5 食用菌原生質體融合技術
            1.3.5.1 化學融合法
            1.3.5.2 物理融合法
        1.3.6 原生質體融合標記技術
            1.3.6.1 形態(tài)學標記
            1.3.6.2 營養(yǎng)缺陷型標記
            1.3.6.3 滅活原生質體標記
            1.3.6.4 熒光染色標記
            1.3.6.5 抗藥性標記
            1.3.6.6 其他標記方法
        1.3.7 融合子的篩選鑒定
            1.3.7.1 遺傳標記的檢測
            1.3.7.2 融合子的生物學鑒定
    1.4 本研究的內容、目的與意義
        1.4.1 研究內容
        1.4.2 研究的目的與意義
    1.5 技術路線圖
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 供試菌株
        2.1.2 基礎培養(yǎng)基
    2.2 主要儀器設備及試劑
        2.2.1 主要儀器設備
        2.2.2 主要試劑
        2.2.3 主要試劑的配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 菌株活化培養(yǎng)及生長速度測定
            2.3.1.1 測定方法
            2.3.1.2 金針菇及其單孢菌株菌絲生長速度的測定
            2.3.1.3 巨大口蘑及其單孢菌株菌絲生長速度的測定
        2.3.2 菌株原生質體制備及再生
            2.3.2.1 金針菇菌絲液體培養(yǎng)
            2.3.2.2 巨大口蘑菌絲液體培養(yǎng)
            2.3.2.3 酶液的配制
            2.3.2.4 測定方法
            2.3.2.5 金針菇原生質體制備的步驟
            2.3.2.6 巨大口蘑原生質體制備的步驟
        2.3.3 原生質體單核化程度的測定
            2.3.3.1 測定方法
            2.3.3.2 金針菇原生質體單核化比例測定
            2.3.3.3 巨大口蘑原生質體單核化比例測定
        2.3.4 親本的選擇
        2.3.5 金針菇與巨大口蘑原生質體融合工藝優(yōu)化
            2.3.5.1 融合方法
            2.3.5.2 融合率的計算
            2.3.5.3 試驗設計
        2.3.6 融合菌株的篩選
            2.3.6.1 融合菌株的挑取與培養(yǎng)
            2.3.6.2 菌落形態(tài)特征比較
            2.3.6.3 融合菌株與親本菌株的菌絲顯微結構觀察
            2.3.6.4 拮抗實驗
            2.3.6.5 融合菌株與親本菌絲生長速度比較
            2.3.6.6 融合菌株與親本袋栽培養(yǎng)生長速度比較
            2.3.6.7 融合菌株與親本液體發(fā)酵培養(yǎng)比較
        2.3.7 融合菌株的ISSR鑒定
            2.3.7.1 菌絲培養(yǎng)
            2.3.7.2 液體發(fā)酵培養(yǎng)
            2.3.7.3 基因組DNA的提取
            2.3.7.4 基因組DNA電泳檢測：
            2.3.7.5 ISSR-PCR擴增及電泳
            2.3.7.6 數據分析
        2.3.8 融合菌株的生物學特性研究
            2.3.8.1 測定方法
            2.3.8.2 最適碳源篩選
            2.3.8.3 最適氮源篩選
            2.3.8.4 融合菌株母種培養(yǎng)基優(yōu)化
            2.3.8.5 融合菌株原種培養(yǎng)基篩選
3 結果與分析
    3.1 金針菇及其單孢菌株菌絲生長速度比較
    3.2 巨大口蘑及其單孢菌株菌絲生長速度比較
    3.3 金針菇及其單孢菌株原生質體產量比較
    3.4 巨大口蘑及其單孢菌株原生質體產量比較
    3.5 原生質體單核化程度比較
        3.5.1 金針菇及其單孢菌株原生質體單核化程度
        3.5.2 巨大口蘑及其單孢菌株原生質體單核化程度
    3.6 原生質體釋放過程與方式
    3.7 親本的選擇
    3.8 金針菇與巨大口蘑融合工藝優(yōu)化結果
    3.9 原生質體融合觀察
    3.10 融合菌株的篩選
        3.10.1 菌落形態(tài)觀察
        3.10.2 融合菌株與親本菌株的菌絲顯微結構觀察
        3.10.3 拮抗作用的觀察
        3.10.4 親本及融合菌株生長速度比較
        3.10.5 融合子袋栽培養(yǎng)生長速度比較
        3.10.6 融合子與親本液體發(fā)酵培養(yǎng)速度比較
        3.10.7 融合菌株篩選結果
    3.11 融合子的ISSR鑒定結果
        3.11.1 融合子與親本的ISSR分析
        3.11.2 融合子與親本的遺傳相似系數
        3.11.3 聚類分析
    3.12 融合菌株生物學特性研究
        3.12.1 融合菌株最適碳源選擇
        3.12.2 融合菌株最適氮源選擇
        3.12.3 融合菌株母種培養(yǎng)基優(yōu)化結果
            3.12.3.1 融合菌株R13母種培養(yǎng)基優(yōu)化結果
            3.12.3.2 融合菌株R14母種培養(yǎng)基優(yōu)化結果
            3.12.3.3 融合菌株R15母種培養(yǎng)基優(yōu)化結果
        3.12.4 融合菌株原種培養(yǎng)基的篩選結果
4 結論與討論
    4.1 結論
        4.1.1 親本的選擇
        4.1.2 金針菇與巨大口蘑原生質體融合最佳工藝
        4.1.3 融合菌株的篩選與鑒定
            4.1.3.1 融合菌株形態(tài)學觀察
            4.1.3.2 分子生物學鑒定
        4.1.4 融合菌株生物學特性研究
            4.1.4.1 融合菌株的平板培養(yǎng)基優(yōu)化
            4.1.4.2 融合菌株的原種培養(yǎng)基優(yōu)化
    4.2 討論
        4.2.1 原生質體的制備
        4.2.2 親本的選擇
        4.2.3 親本滅活標記處理
        4.2.4 原生質體的釋放方式
        4.2.5 融合子的篩選與鑒定
        4.2.6 融合子的穩(wěn)定性
    4.3 創(chuàng)新之處及不足
    4.4 展望
致謝
參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]原生質體融合構建纖維素發(fā)酵產油脂菌株的研究[D]. 張淑君.山東農業(yè)大學 2012
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[5]杏鮑菇與秀珍菇融合育種技術研究[D]. 張鵬.福建農林大學 2012
[6]木質素降解酶遺傳轉化體系在食用菌品種選育中的應用[D]. 李曉靜.福建農林大學 2012
[7]雙孢蘑菇單孢雜交育種及其遺傳分析[D]. 弋淮.四川農業(yè)大學 2011
[8]冬蟲夏草無性型原生質體制備及種群遺傳多樣性研究[D]. 肖巖巖.安徽農業(yè)大學 2011
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本文編號：3149132