番茄是一種重要的蔬菜作物,同時(shí)也是研究漿果果實(shí)發(fā)育的模式植物。番茄果實(shí)大小和形狀不僅決定其產(chǎn)量還和其品質(zhì)性狀直接相關(guān)。番茄果實(shí)發(fā)育的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)非常復(fù)雜,轉(zhuǎn)錄因子在其中扮演著十分重要的角色。本實(shí)驗(yàn)室之前為了揭示番茄早期果實(shí)發(fā)育的調(diào)控網(wǎng)絡(luò),通過(guò)對(duì)早期果實(shí)多個(gè)時(shí)期的子房壁和胚珠進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,發(fā)現(xiàn)了多個(gè)在早期果實(shí)子房壁或胚珠中特異表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子。本研究中利用CRISPR/Cas9技術(shù)獲得了早期果實(shí)子房壁特異表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子Solyc11g008830（SlAS2）的突變體,與野生型Moneymaker（MM）相比,該突變體的果實(shí)變小、縱橫比增加、果皮細(xì)胞層數(shù)減少和果皮厚度變薄,表明SlAS2參與調(diào)控番茄果實(shí)發(fā)育。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),該突變體5天和綠熟時(shí)期的果實(shí)果皮中細(xì)胞層數(shù)較野生型顯著減少,說(shuō)明突變體果實(shí)形態(tài)的改變有可能是由SlAS2的突變抑制了番茄果皮中的細(xì)胞分裂造成的。不僅如此,SlAS2突變體的花瓣明顯變小,葉片極性改變,而且葉片呈杯狀和針狀,因此SlAS2具有和擬南芥中同源基因AS2相似的功能,也在葉極性發(fā)育和頂端分生組織維持中發(fā)揮重要作用。SlTKN3（Solyc05g005090）作為擬南... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

番茄果實(shí)的發(fā)育過(guò)程（Azzietal.,2015）

圖 2.1 果形分析的示意圖Fig 2.1 Schematic diagram of fruit shape analysis報(bào)告實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)使用的載體是雙熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒 pluc-35Rlu90（SlTKN3）大約 3-kb 左右的啟動(dòng)子，之后通過(guò)無(wú)到雙熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒 pluc-35Rluc 的 luc 上N3 pro-LUC 。從 MM 果實(shí)的 cDNA 中擴(kuò)增 S2）cDNA 全長(zhǎng)，之后通過(guò)雙酶切連接的方式ag 的 35S 下游，即得到效應(yīng)因子 CaMV35S-SlAS1 和效應(yīng)因子構(gòu)建所用的引物。之后將報(bào)告因子和效準(zhǔn)備好的菌液打入煙草葉片中，2 天后收集煙草葉910）和 Promega 公司的 GLOMAX 20/20 LUMINO素酶活性，相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。引物詳轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的分析slas2-cr1 0 DPA果實(shí)中提取的總RNA送去公司建庫(kù)

國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第二章 SlAS2 和 SlTKN3 調(diào)控番茄果實(shí)發(fā)育的功能研.2 結(jié)果與分析.2.1 SlAS2基因的組織表達(dá)分析我們前期的研究結(jié)果顯示，SlAS2 在 0 DPA、1 DPA、2 DPA 和 5 DPA 的子房壁中表達(dá)水平，而在胚珠中幾乎不表達(dá)，而且在 0 DPA 的子房壁中表達(dá)水平較其他幾個(gè)時(shí)期更高，表明 SlA一個(gè)早期果實(shí)子房壁特異表達(dá)基因（Zhang et al., 2016）。為了進(jìn)一步驗(yàn)證 RNA-seq 的結(jié)果，利用定量 PCR 技術(shù)檢測(cè) SlAS2 在栽培番茄 MM 不同發(fā)育時(shí)期子房壁和胚珠中的表達(dá)水平， SlAS2 在 0 DPA、2 DPA、5 DPA、10 DPA 和 20 DPA 果實(shí)子房壁中的表達(dá)水平很高，而在各期的胚珠中幾乎不表達(dá)（圖 2.2A）。其中 SlAS2 在 0 DPA 和 2 DPA 時(shí)期的果實(shí)子房壁中表達(dá)較其他幾個(gè)時(shí)期更高，該結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)一致。不僅如此，我們還利用 SlAS2 啟動(dòng)子驅(qū)US 報(bào)告基因的表達(dá)，然后對(duì)轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株的早期果實(shí)進(jìn)行 GUS 染色。發(fā)現(xiàn) SlAS2 在 0 D 5 DPA 的子房壁、橫隔和胎座中均表達(dá)，在 0 DPA 時(shí)的表達(dá)活性較高，而在兩個(gè)時(shí)期的胚珠乎不表達(dá)（圖 2.2B）。


本文編號(hào)：3144754