玫瑰（Rosa rugosa Thunb.）是傳統(tǒng)的精油用花卉,玫瑰精油的主要成分為香茅醇、香葉醇等單萜醇及其乙酸酯類衍生物乙酸香茅酯、乙酸香葉酯等。我們前期研究發(fā)現,脫氧木酮糖5-磷酸還原異構酶（RrDXR）和Alcohol acyl transferase醇類乙�；D移酶（RrAAT）基因是玫瑰單萜類花香成分生物合成途徑中的關鍵基因。本研究構建了這兩個基因的超表達載體、建立了矮牽牛再生體系和遺傳轉化體系,并嘗試通過農桿菌介導法轉入矮牽牛,以驗證其功能,主要研究結果如下：1、以‘唐紅’玫瑰盛開期花瓣為試材,利用CTAB法提取其總RNA,獲取目的基因后成功構建了pCAMBIA1304-DXR和pCAMBIA1304-AAT超表達載體,并導入農桿菌EHA105保存?zhèn)溆?為目的基因轉化矮牽牛進一步驗證其功能奠定了基礎。2、試驗通過MS培養(yǎng)基直接播種無菌種子的方法繁殖矮牽�！疎AGLE’無菌材料。通過使用不同的滅菌方法添加不同濃度的激素組合,篩選出誘導矮牽牛愈傷組織產生分化以及生根的最佳滅菌方法和培養(yǎng)基,建立了矮牽牛的再生體系。實驗表明,最佳滅菌方法為采用75%的酒精消毒,種子發(fā)芽率最高為9... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數】：58 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?乂（左）和公桃（右）的ＰＣ民產物凝膠電泳檢測??Ｍ：?Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?２０００?Ａ：?的ＰＣ民產物?Ｄ：公尤欠的ＰＣ民產物??

２．２重組質粒的酶切驗證及測序分析??對構建好的重組質粒進行（ｐＣＡＭＢＩＡ１３０４－Ｚｉ邱：化化ＩＩ／化／Ｉ?；?ＰＣＡＭＢＩＡ１３０４－乂??公Ｓ化ＩＩＷｃｏＩ）雙酶切，同時雙酶切ＰＣＡＭＢＩＡ１３０４作為陰性對照，電泳檢測結果如圖２－１、??２－２所示。圖２－１結果顯示Ａ１－Ａ６均切出一條約ＨＯＯｂｐ的條帶，陰性對照Ｎ則顯示一條長??約ｌＯＯＯＯｂｐ的條帶；圖２－２結果顯示Ｄ１－Ｄ６均切出一條約１５００ｂｐ的條帶，陰性對照Ｎ同??樣顯示一條長約ｌ〇〇（Ｋ）ｂｐ的條帶，由此初步證明，心ｒ與。進？均己成功插入表達載體??ｐＣＡＭＢＩＡ１３０４。??Ｍｌ?Ｎ?ＡＩ?Ａ２?Ａ３?Ａ４?ＡＳ?Ａ６?Ｍ２??蠢帛皆??：？〇ｈｐ?一?禱尋??看、；．達麵??圖２－１重組質粒ｐＣＡＭＢＩＡ１３０４－兌的雙酶切結果??Ｍ１?：?Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?２０００?Ｍ２：Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?１５０００?Ｎ：?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?Ａ１－Ａ６：雙酶切結果??Ｆｉｇ．２－１?Ｔｈｅ?ｄｏｕｂｌｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?ｏｆ?化ｅ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｐＣＡＭ目ＩＡ１３０４－．心ｒ??Ｍｌ；?Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?２０００?Ｍ２：Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?１５０００?Ｎ：?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?Ａ１－Ａ６：?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｄｏｕｂｌｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ??雨?一??ｅ

２．２重組質粒的酶切驗證及測序分析??對構建好的重組質粒進行（ｐＣＡＭＢＩＡ１３０４－Ｚｉ邱：化化ＩＩ／化／Ｉ?；?ＰＣＡＭＢＩＡ１３０４－乂??公Ｓ化ＩＩＷｃｏＩ）雙酶切，同時雙酶切ＰＣＡＭＢＩＡ１３０４作為陰性對照，電泳檢測結果如圖２－１、??２－２所示。圖２－１結果顯示Ａ１－Ａ６均切出一條約ＨＯＯｂｐ的條帶，陰性對照Ｎ則顯示一條長??約ｌＯＯＯＯｂｐ的條帶；圖２－２結果顯示Ｄ１－Ｄ６均切出一條約１５００ｂｐ的條帶，陰性對照Ｎ同??樣顯示一條長約ｌ〇〇（Ｋ）ｂｐ的條帶，由此初步證明，心ｒ與。進？均己成功插入表達載體??ｐＣＡＭＢＩＡ１３０４。??Ｍｌ?Ｎ?ＡＩ?Ａ２?Ａ３?Ａ４?ＡＳ?Ａ６?Ｍ２??蠢帛皆??：？〇ｈｐ?一?禱尋??看、；．達麵??圖２－１重組質粒ｐＣＡＭＢＩＡ１３０４－兌的雙酶切結果??Ｍ１?：?Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?２０００?Ｍ２：Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?１５０００?Ｎ：?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?Ａ１－Ａ６：雙酶切結果??Ｆｉｇ．２－１?Ｔｈｅ?ｄｏｕｂｌｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?ｏｆ?化ｅ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｐＣＡＭ目ＩＡ１３０４－．心ｒ??Ｍｌ；?Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?２０００?Ｍ２：Ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?１５０００?Ｎ：?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?Ａ１－Ａ６：?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｄｏｕｂｌｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ??雨?一??ｅ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]玫瑰葉片直接再生及其影響因素[J]. 邢文,包穎,丁萌,傅小鵬,包滿珠,寧國貴.  華中農業(yè)大學學報. 2014(01)
[2]玫瑰自然香氣成分及含量變化分析[J]. 虞伊林,王秋云,姚雷.  上海交通大學學報(農業(yè)科學版). 2012(02)
[3]花香代謝與調控研究進展[J]. 孔瀅,孫明,潘會堂,張啟翔.  北京林業(yè)大學學報. 2012(02)
[4]陽春砂DXR超表達提高轉基因煙草DXR活性及光合色素含量[J]. 劉卉,楊錦芬,詹若挺,魏潔書,朱煥秋,陳蔚文.  廣州中醫(yī)藥大學學報. 2012(01)
[5]花香的生物合成、調控及基因工程研究進展[J]. 樊榮輝,黃敏玲,鐘淮欽,吳建設,葉秀仙.  中國細胞生物學學報. 2011(09)
[6]植物花香代謝調節(jié)與基因工程研究進展[J]. 趙印泉,周斯建,彭培好,潘會堂,張啟翔.  熱帶亞熱帶植物學報. 2011(04)
[7]玫瑰精油的開發(fā)利用[J]. 滕祥金,郝再彬,孟滕.  北方園藝. 2011(07)
[8]不同基因型矮牽牛高頻再生體系建立的研究[J]. 呂晉慧,王玄,王媛,楊明霞.  山西農業(yè)大學學報(自然科學版). 2011(02)
[9]植物萜類合成酶及其代謝調控的研究進展[J]. 岳躍沖,范燕萍.  園藝學報. 2011(02)
[10]幾種玫瑰的園林特性及開發(fā)價值[J]. 李玉舒.  北京農業(yè)職業(yè)學院學報. 2010(06)

碩士論文
[1]百合苯甲酸甲酯代謝相關LiBSMT基因的克隆與分析[D]. 王歡.北京林業(yè)大學 2015
[2]夜來香生物鐘及花香基因的克隆[D]. 呂恃衡.福建農林大學 2013
[3]玫瑰單萜代謝相關基因RrDXS和RrLIS的克隆與表達分析[D]. 李婷琳.揚州大學 2013
[4]玫瑰花香成分生物合成相關基因的克隆與表達分析[D]. 陳陳.揚州大學 2012
[5]玫瑰活體香氣和花水成分及含量變化研究[D]. 虞伊林.上海交通大學 2012
[6]中國水仙（Narcissus tazetta L.var.chinensis Roem）花香相關基因DXPS、DXR和PAL的克隆[D]. 馬傳營.福建農林大學 2010
[7]玫瑰微體快繁技術體系的建立[D]. 盧緒娟.山東農業(yè)大學 2007
[8]玫瑰精油后產物的綜合利用研究[D]. 杜鵑.新疆農業(yè)大學 2006



本文編號：3138755