隨著人們生活水平的提高,水果已經(jīng)成為幾乎每一個人的必備食物,同時水果也是最常見的致敏食物。而桃又會常常引起過敏反應(yīng)�，F(xiàn)在已經(jīng)鑒定桃過敏原有5大類。其中脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白Prup 3是引起中國人食桃過敏的最主要過敏原。桃過敏患者反映不同桃（油桃）品種引發(fā)過敏的程度不同。為明確不同桃品種間Prup3蛋白含量的差異,在研究應(yīng)用雙單抗夾心ELISA方法,對中國100多份桃核心種質(zhì)資源進行果實Pru p3含量測定。主要結(jié)果如下:1.針對桃果皮中存在大量果膠等雜質(zhì),影響后面蛋白純化等實驗,對桃蛋白粗提物用微量濃鹽酸（每50ml桃總蛋白提取液加20μl濃鹽酸）處理,經(jīng)SDS-PAGE檢測,濃鹽酸處理樣品后目的蛋白Prup 3沒有沉淀,再用間接ELISA檢測Prup 3免疫活性,結(jié)果顯示,少量濃鹽酸處理后純化得到的Prup 3的免疫活性良好。實驗所用過敏原標準品nPrup3來源于’湖景蜜露’果皮。2.研究發(fā)現(xiàn)大部分桃品種隨著桃成熟,其Prup3含量也在升高,少量品種隨著桃成熟,其Prup 3含量在降低;同一桃品種,連續(xù)兩年測定結(jié)果顯示,不同年份（2014年和2015年）,桃中的Prup3含量變化明顯。差異幅... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

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圖２－１濃鹽脧處理‘湖景蜜露’果皮去除果膠后ＳＤＳ－ＰＡＧＥ圖

?一??１０??圖２－１濃鹽脧處理‘湖景蜜露’果皮去除果膠后ＳＤＳ－ＰＡＧＥ圖。其中，Ｍ為蛋白??質(zhì)ｍａｒｋｅｒ?（丨ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，貨號ＬＣ５８００），１為果皮粗提物，２為濃ＨＣ１處理后條??帶。??Ｆｉｇ．２－１?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ｏｆ?ｐｅｃｔｉｎ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ?ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ??ａｃｉｄ．Ｍ，ｐｒｏｔｅｉｎ?ｍａｒｋｅｒ?（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，貨號?ＬＣ５８００）；?１，ｐｅａｃｈ?ｐｅｅｌ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；?２，??ｐｅａｃｈ?ｐｅｅｌ?ｅａｔｒａｃｔｉｏｎ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｂｙ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ?ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ?ａｃｉｄ．??２．４．２Ｐｒｕ?ｐ３純化結(jié)果及Ｐｒｕｐ３的定量結(jié)果??‘湖景蜜露’桃果皮蛋白粗提物中ＰｍＰ３經(jīng)陽離子交換柱層析純化后，純化結(jié)??果經(jīng)ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電泳檢測，結(jié)果如圖２－２所示，圖中顯示在約９ｋＤａ位置有單一??清晰明亮的蛋白條帶。??Ｍ?１?ｍＡＵ?—ＵＶ１．２８ＣＴ，??４〇０－?Ｉ?Ｉ?Ｉ?（?｜｜??＝Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ??＾?１°：?ｉ?ＬＪ?ｂ?Ｕ?ｉｊｊ?Ｕ?Ｌｊｉｌ??５?１０?１５?２０?２５?３０?３５?４０?４５?５０?５５?６０?６５?７０??圖２－２?純化產(chǎn)物ｎＰｒｕ?ｐ?３和陽離子交換柱圖譜。Ｍ為蛋白質(zhì)ｍａｒｋｅｒ??（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｃｎ

?３１．２５?ｎｇ／ｍＪ，?１５．６２５?ｎｇ／ｍｌ，?７．８１?ｎｇ／ｍｌ，?３．９１?ｎｇ／ｍｌ，?１．９５?ｎｇ＾ｒｎｌ，?０．９７?ｎｇ／ｍｌ，??０．４９?ｎ以ｍｌ，０．２４?ｎｇ／ｍｌ，?０．１２?ｎ以ｍｌ。每個濃度測三次，同時設(shè)置六個空白對照。??繪制擬合曲線，如圖２－３。從圖中可以看出，以ｎＰｒｕｐ?３為標準品時，最佳濃度??測定范圍是１．９５?－３１．２５ｎｇ／ｍＬ??——Ｐｒｕ?ｐ?３?’?Ｈ?ＭＡ?ｉｌｉ?？遍??３．９９??ｙ?？麄？?４．０２??３．９４??０．６１??２．４８??１２９??０．５８??０３８??０．３２????０３１??°１?１?．?１?．?■ＫＢＳＲ?０．２７??０?１?１?１０?１００?ｌＯＯＯ??ｎ?ｔｏ??ｐｒｏｔｅｉｎ（ｎｇ／ｇ）?！?厶。??圖２－３?Ｐｒｕ?ｐ３?ＥＵＳＡ定量標準曲線。??Ｆｉｇ．２－３?Ｄｏｓｅ－ｒｃｓｐｏｎｓｃ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?ｎＰｒｕ?ｐ３?ｉｎ?ＥＬＩＳＡｗｉｔｈ?ｍＡｂ?Ｂ１０－５?ａｓ??ｔｈｅ?ｃａｐｔｕｒｅ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ａｎｄ?ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ?ｍ＼ｂ?４－１?ａｓ?ｔｈｅ?ｄｅｔｅｃｔｏｒ?ａｎｔｉｂｏｄｙ．??３２??


本文編號：3127140