本研究以復(fù)等位基因遺傳的大白菜核雄性不育“兩用系”不育株及可育株的花藥作為研究材料,通過(guò)雙向凝膠電泳技術(shù)（2-DE）分離差異蛋白,采用MS技術(shù)和生物信息學(xué)方法對(duì)蛋白的序列及功能進(jìn)行鑒定,為大白菜雄性不育機(jī)理的研究提供一些線索。主要結(jié)果如下：1.對(duì)不同等級(jí)的不育和可育花藥進(jìn)行冷凍切片,顯微觀察顯示可育株花藥正常生長(zhǎng)發(fā)育,最后形成正常的成熟花粉粒,而不育株花藥中的花粉粒從第二等級(jí)開(kāi)始發(fā)生敗育,花粉粒逐漸干癟、皺縮,后期越來(lái)越嚴(yán)重,因此選取第二等級(jí)花藥作為實(shí)驗(yàn)材料。2.設(shè)置800μg、1000μg、1200μg三個(gè)等級(jí)對(duì)花藥蛋白上樣量進(jìn)行雙向電泳（2-DE）體系的優(yōu)化,結(jié)果表明上樣量為1000μg時(shí),2-DE圖譜分辨率較高,蛋白也較多。3.利用PDQuest8.0.1軟件對(duì)大白菜雄性不育“兩用系”花藥總蛋白的2-DE圖譜進(jìn)行分析。結(jié)果表明：在等電點(diǎn)為4.0-7.0范圍內(nèi)不育株和可育株花藥2-DE圖譜平均識(shí)別到350個(gè)左右的蛋白,Protein score C.I%大于95%的差異蛋白有38個(gè),可育花藥中特異表達(dá)的蛋白數(shù)為12個(gè),表達(dá)量上調(diào)的點(diǎn)數(shù)為24個(gè)；不育花藥中特異表達(dá)的蛋白數(shù)為17個(gè),表... 

【文章來(lái)源】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：49 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 植物細(xì)胞核雄性不育的應(yīng)用及不育機(jī)理概述
    1.2 復(fù)等位基因遺傳的大白菜細(xì)胞核雄性不育研究現(xiàn)狀
    1.3 蛋白質(zhì)組學(xué)在雄性不育研究中的應(yīng)用
    1.4 本試驗(yàn)的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 儀器設(shè)備
        2.1.3 生化試劑
    2.2 方法
        2.2.1 大白菜花藥的獲得
        2.2.2 大白菜分級(jí)花藥冷凍切片的制備
        2.2.3 大白菜花藥總蛋白提取方法
        2.2.4 蛋白裂解液
        2.2.5 蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定
        2.2.6 雙向電泳
        2.2.7 凝膠染色與脫色
        2.2.8 圖像掃描
        2.2.9 凝膠質(zhì)譜分析
        2.2.10 生物信息學(xué)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 花藥敗育時(shí)期觀察
    3.2 蛋白上樣量?jī)?yōu)化
    3.3 凝膠圖譜的分析
        3.3.1 2-DE圖譜
        3.3.2 差異蛋白的統(tǒng)計(jì)
    3.4 質(zhì)譜分析
    3.5 生物信息學(xué)分析
        3.5.1 GO（Gene Ontology）分析
        3.5.2 KEGG分析
        3.5.3 候選蛋白的生物信息學(xué)分析
4 討論
    4.1 花藥敗育時(shí)期的研究
    4.2 花藥蛋白上樣量的優(yōu)化
    4.3 差異蛋白功能預(yù)測(cè)
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]小麥雄性不育蛋白組學(xué)與泛素化修飾蛋白組學(xué)的研究[D]. 劉紅占.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014
[2]白菜花粉壁發(fā)育相關(guān)的四個(gè)多糖代謝基因的表達(dá)分析與功能鑒定[D]. 林蘇娥.浙江大學(xué) 2014
[3]白菜花粉壁發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)分析與功能驗(yàn)證[D]. 劉金龍.浙江大學(xué) 2013
[4]甘藍(lán)型油菜黃（褐）籽性狀形成的分子機(jī)理研究[D]. 蔣金金.揚(yáng)州大學(xué) 2013

碩士論文
[1]太谷核不育小麥花藥及花粉發(fā)育過(guò)程的細(xì)胞形態(tài)學(xué)研究[D]. 王艷.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]甘藍(lán)型油菜種子萌發(fā)時(shí)期油體蛋白雙向電泳分析[D]. 梁叢敏.鄭州大學(xué) 2014
[3]低磷脅迫下油菜幼苗根系蛋白雙向電泳分析[D]. 王哲.鄭州大學(xué) 2014
[4]大白菜雄性不育相關(guān)基因的分離與鑒定[D]. 宋倩.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



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