亞美尼亞葡萄風(fēng)信子（Muscari armeniacum）作為一種園林中常用的地被觀花植物,其花色是最重要的觀賞性狀。而光照作為植物生長最關(guān)鍵的環(huán)境因素之一,通過很多方式影響了葡萄風(fēng)信子花色的形成。研究葡萄風(fēng)信子花色的形成機(jī)理是花色育種工作的重中之重。目前對葡萄風(fēng)信子的花色研究已初步對其含有的花青苷物質(zhì)進(jìn)行了鑒定,并且對其花青苷合成通路上的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)基因進(jìn)行了克隆和表達(dá)分析,而且對調(diào)控其花色形成的轉(zhuǎn)錄機(jī)制進(jìn)行了初步闡明,但是光照對葡萄風(fēng)信子的影響機(jī)制尚不清楚。本研究在課題組前期相關(guān)研究的基礎(chǔ)上,篩選出葡萄風(fēng)信子光形態(tài)建成中的一個重要bZIP轉(zhuǎn)錄因子基因,通過對此轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆、序列分析、轉(zhuǎn)錄表達(dá)分析及其在煙草中的瞬時轉(zhuǎn)化分析對其功能進(jìn)行了研究,獲得以下結(jié)果:1.從亞美尼亞葡萄風(fēng)信子花中克隆到了一個bZIP轉(zhuǎn)錄因子基因,通過基因序列比對和分析發(fā)現(xiàn)其具有HY5轉(zhuǎn)錄因子特征結(jié)構(gòu)域,所以將其命名為MaHY5,GenBank登錄號MK281355。生物信息學(xué)分析顯示MaHY5基因的開放閱讀框?yàn)?38bp,編碼145個氨基酸,含有一個保守的bZIP特征結(jié)構(gòu)域;MaHY5蛋白質(zhì)屬于親水性蛋白,無信... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

轉(zhuǎn)基因酵母菌落的PCR鑒定M.DNAMarkerCK1/CK2.空白對照1-5.轉(zhuǎn)入PMaMybA-pABAi載體的酵母菌陽性克隆PCR

靨宓慕湍婦?梢員灰種粕?さ淖钚?bA濃度為600ng/mL（圖2-2）。轉(zhuǎn)入 PMaMybA-pABAi 載體的酵母菌在高濃度 1000ng/mLAbA 的培養(yǎng)基中依然能正常生長，高濃度 AbA 無法使酵母菌被抑制。圖 2-2 轉(zhuǎn)化酵母菌 AbA 濃度篩選Fig. 2-2 Transformed yeastAbAconcentration screening轉(zhuǎn)入 PMaAN2-pABAi 載體的酵母菌在轉(zhuǎn)入葡萄風(fēng)信子花 cDNA 文庫后，可以在含有600ng/mL AbA 的 SD/- Leu/AbA 培養(yǎng)基上生長，說明文庫成功轉(zhuǎn)入酵母菌，在重復(fù)劃線步驟2-3次后，獲得了48個陽性酵母菌菌株。利用Matchmaker Insert Check PCR Mix2 酶進(jìn)行 PCR 檢測后，共獲得了具有單條帶的酵母菌菌株 25 個，具有雙條帶酵母菌菌株 15 個（圖 2-3）

圖 2-3 MaMybA 啟動子篩庫結(jié)果M. DNAMarker; 圖中*表示單條帶結(jié)果Fig. 2-3 The result of the promoter of MaMybAyeast library scrM. DNAMarker; * in the figure indicates the result of a single帶的酵母菌菌株用 YPDA 培養(yǎng)基擴(kuò)繁之后提取酵母質(zhì)t 網(wǎng)站上分析，推測結(jié)果均為未知蛋白。篩選技術(shù)是酵母雙雜交系統(tǒng)的變體，是利用報告基合蛋白（如轉(zhuǎn)錄因子）之間物理相互作用的技術(shù)（Latchmaker Gold 酵母單雜交系統(tǒng)利用金擔(dān)子素 AbA 究方法被廣泛用于大規(guī)模篩選 cDNA 表達(dá)文庫中的是，雖然酵母單雜交系統(tǒng)可以用來廣泛篩選與特定 D是其鑒定效率很低。因?yàn)橹参锿暾?cDNA 文庫中

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]月季花瓣中農(nóng)桿菌介導(dǎo)的基因瞬時表達(dá)體系的優(yōu)化及其在RNAi中的應(yīng)用[J]. 王磊,陳雯,劉婭,楊若韻,陰霞,馬男,高俊平.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2014(02)
[2]轉(zhuǎn)查爾酮合酶基因?qū)煵莼ㄉ盎ㄆ鞴俚挠绊慬J]. 夏玉鳳,耿曉娜,王萬雙,趙寶華.  生物技術(shù)通報. 2010(01)
[3]黃色花形成機(jī)制及基因工程研究進(jìn)展[J]. 周琳,王雁,彭鎮(zhèn)華.  林業(yè)科學(xué). 2009(02)
[4]植物花色形成及其調(diào)控機(jī)理[J]. 趙昶靈,郭維明,陳俊愉.  植物學(xué)通報. 2005(01)
[5]藍(lán)色花卉分子育種[J]. 徐清燏,戴思蘭.  分子植物育種. 2004(01)
[6]藍(lán)光、紫外光的受體及其對CHS表達(dá)誘導(dǎo)的研究[J]. 王曼,王小菁.  植物學(xué)通報. 2002(03)

博士論文
[1]葡萄風(fēng)信子MYB和bHLH轉(zhuǎn)錄因子對花青苷合成的調(diào)控研究[D]. 陳凱利.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017

碩士論文
[1]蝴蝶蘭花色成因分析及適宜轉(zhuǎn)藍(lán)色基因的品種選擇[D]. 王琳.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017



本文編號：3110143