山核桃（Carya cathayensis Sarg.）是重要的木本油料作物,生產(chǎn)中易受到自然逆境脅迫因素影響,尤其是高溫,高溫下嚴(yán)重限制植物光合作用致使山核桃生長,結(jié)實(shí),有機(jī)物積累等都受到影響。因此,對山核桃光合作用相關(guān)基因的開發(fā)和利用具有重要的意義。在高等植物中光合作用關(guān)鍵步驟固定CO2過程需要Rubisco酶的催化,Rubisco酶的活性由植物體內(nèi)復(fù)雜的機(jī)制進(jìn)行調(diào)控,其中大量研究已證實(shí)Rubisco activase（RCA）能夠活化并維持Rubisco酶的催化活性。同時RCA也被認(rèn)為是植物在各種不同環(huán)境脅迫下對光合作用的關(guān)鍵調(diào)控因素。因此,Rubisco活化酶的功能研究對于增強(qiáng)植物體內(nèi)Rubisco酶活性穩(wěn)定光合作用系統(tǒng),進(jìn)而提高植物適應(yīng)逆境的能力具有重要作用。本試驗(yàn)通過應(yīng)用RACE技術(shù),克隆得到了山核桃2個RCA基因的全長cDNA序列,命名為CcRCAα和CcRCAβ。序列開放閱讀框長度分別為1419bp、1302bp,推測編碼472和433個氨基酸。利用DNAMAN軟件對山核桃RCA基因與葡萄等物種的RCA氨基酸序列進(jìn)行的多重序列比對,結(jié)果表明,兩者氨基酸序列相似性很高,且... 

【文章來源】：浙江農(nóng)林大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

山核桃總RNA提�。∕:DL2000marker;1:RNA條帶）

2.2 內(nèi)參β-actin 檢驗(yàn) cDNA(M:DL2000 marker;1: β-actinphoresis map of cDNAband for house-keeping gene β-actin.β-actin band)化酶基因中間片段獲取RNA 反轉(zhuǎn)錄合成的 cDNA 第一條鏈為模板，根據(jù)比對，結(jié)合部分山核桃轉(zhuǎn)錄組序列設(shè)計的特異性T-PCR 擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng) 1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢存在一清晰的泳帶。該泳帶的大小與預(yù)測片段大片段。PCR 產(chǎn)物凝膠回收后克隆到 PMD-vector1通過 GenBank 數(shù)據(jù)庫 BLASTn，表明其與其他物

3 RCA 基因中間片段擴(kuò)增(M:DL2000 maker;1:RCA 基因片trophoresis map of PCR amplification product of partial RCA gmaker;1:RCA band) 和 3’RACE的 RCA 序列，設(shè)計 5’RACE 所需的錨定引物，即擴(kuò)的 5’RACE-Ready cDNA 為模板，以 GSP1 和 UPM按 1:100 稀釋，然后以稀釋的 PCR 產(chǎn)物為模板進(jìn)行電泳檢測，有2條泳帶，分析其它植物RCA的大小后帶。同樣方法進(jìn)行 3’RACE，以 3’RACE-Ready cD引物進(jìn)行兩次 PCR，瓊脂糖凝膠電泳檢測有 3 條泳的是特異條帶。將兩次 PCR 產(chǎn)物回收測序后，發(fā)現(xiàn)，重復(fù)試驗(yàn)兩次，結(jié)果相同。預(yù)測可能是 RCA 家族

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]嫁接辣椒根腐病抗性及其與苯丙烷類物質(zhì)代謝的關(guān)系[J]. 姜飛,劉業(yè)霞,劉偉,鄭楠,王洪濤,艾希珍.  中國蔬菜. 2010(08)
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[6]不同砧木嫁接對墨茄生長及黃萎病抗性影響的研究[J]. 鄭陽霞,李能芳,劉乃森,宋玉美.  長江蔬菜. 2005(06)
[7]番茄不同砧木材料幼苗對低溫脅迫的反應(yīng)[J]. 張娟,徐坤,孫杰.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2004(02)
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[10]水稻Rubisco活化酶在調(diào)節(jié)Rubisco活性和光合日變化中的作用[J]. 翁曉燕,陸慶,蔣德安.  中國水稻科學(xué). 2001(01)

碩士論文
[1]不同砧木嫁接山核桃對高溫脅迫的生理響應(yīng)[D]. 康玉杰.浙江農(nóng)林大學(xué) 2013



本文編號：3097893