發(fā)布時間：2021-03-21 20:51

　　乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)負(fù)調(diào)控因子Raf類蛋白激酶CTR在植物生長發(fā)育過程中有著重要的作用,番茄CTR屬于多基因家族,有LeCTR1, LeCTR2, LeCTR3, LeCTR4個成員,其中LeCTR4有多個剪切本,其生物學(xué)作用目前尚不清楚。在乙烯條件下,LeCTR1的表達(dá)量上升,隨著果實的成熟,LeCTR1的表達(dá)量也會隨之上升。LeCTR3和LeCTR4在葉片中表達(dá)量較高,并且對乙烯不敏感。表明多基因家族成員有著各自不同的功能。本研究通過克隆LeCTR4sv1發(fā)現(xiàn)了一個新的LeCTR4svZS轉(zhuǎn)錄本,分析發(fā)現(xiàn)其具有Raf類蛋白激酶CTR4的結(jié)構(gòu),并有miR1917剪切位點,并通過番茄組織特異性表達(dá)研究,弄清其在番茄發(fā)育過程中的時空表達(dá)模式,通過構(gòu)建LeCTR4svZS和抗miR1917剪切的mLeCTR4svZS的超表達(dá)植株。為進(jìn)一步了解乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和選擇性剪切奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下：1.在中蔬六號番茄中,克隆得到CTR4一個新的轉(zhuǎn)錄本（CTR4svZS）,通過序列比對,發(fā)現(xiàn)其序列比NCBI數(shù)據(jù)庫的CTR4sv1ORF區(qū)多了一段序列,運用生物信息學(xué)手段發(fā)現(xiàn)CTR4svZS具有CTR家族基因... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 乙烯
    1.2 乙烯轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑
        1.2.1 乙烯受體
        1.2.2 CTR基因家族
        1.2.3 EIN2,EIN5,EIN6,EIN7及下游轉(zhuǎn)錄因子
    1.3 miRNA簡介
    1.4 選擇性剪切
    1.5 研究的目的與意義
2 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 材料處理與采集
        2.1.2 實驗藥品及載體
    2.2 試驗方法
        2.2.1 番茄CTR4svZS基因克隆
        2.2.2 生物信息學(xué)分析
        2.2.3 qRT-PCR分析番茄CTR基因家族成員表達(dá)量變化
        2.2.4 qRT-PCR分析番茄miRNA1917表達(dá)量變化
        2.2.5 脫落率調(diào)查
        2.2.6 CTR4svZS（miR1917位點未突變）轉(zhuǎn)基因重組質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.7 CTR4svZS（miR1917位點突變）轉(zhuǎn)基因重組質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.8 CTR4svZS（miR1917位點未突變）及mCTR4svZS（miR1917位點突變）重組質(zhì)粒農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        2.2.9 CTR4svZS（miR1917位點未突變）及mCTR4svZS（miR1917位點突變）轉(zhuǎn)基因番茄遺傳轉(zhuǎn)化
        2.2.10 T0代轉(zhuǎn)基因番茄植株陽性鑒定
3 結(jié)果與分析
    3.1 番茄CTR4svZS序列分析
    3.2 生物信息學(xué)分析
        3.2.1 蛋白理化分析
        3.2.2 二級結(jié)構(gòu)域分析
        3.2.3 系統(tǒng)進(jìn)化樹
        3.2.4 外顯子內(nèi)含子分析
    3.3 番茄CTR家族成員在番茄生長發(fā)育不同時期的qRT-PCR分析
    3.4 CTR4svZS及miR1917在番茄發(fā)育不同時期qRT-PCR分析
    3.5 低溫脅迫下CTR基因家族成員qRT-PCR分析
    3.6 低溫脅迫下CTR4svZS及miRl917 qRT-PCR分析
    3.7 脫落率調(diào)查
    3.8 乙烯及1-mcp處理對CTR基因家族不同成員表達(dá)量的影響
        3.8.1 非處理條件下,CTR基因家族成員表達(dá)量分析
        3.8.2 乙烯處理對CTR基因家族成員的影響
        3.8.3 1-mcp處理對CTR基因家族成員的影響
    3.9 Gateway TOPO入門重組質(zhì)粒菌落PCR電泳檢測
    3.10 LR反應(yīng)構(gòu)建轉(zhuǎn)基因終載重組質(zhì)粒
    3.11 CTR4svZS及mCTR4svZS轉(zhuǎn)基因植株獲得
    3.12 T0代轉(zhuǎn)基因番茄PCR擴(kuò)增檢測
4 結(jié)果與討論
    4.1 CTR4svZS是CTR4基因的一個新的轉(zhuǎn)錄本
    4.2 乙烯對番茄CTR基因家族成員的表達(dá)調(diào)控
    4.3 低溫脅迫對番茄CTR基因家族的表達(dá)調(diào)控
    4.4 miR1917在果實成熟和脫落中的表達(dá)變化
    4.5 CTR4svZS突變及CTR4svZS未突變轉(zhuǎn)基因番茄T0代植株獲得
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3093523