有機(jī)酸是決定柑橘果實(shí)內(nèi)在品質(zhì)的重要組分之一,其含量的高低與果實(shí)的衰老進(jìn)程和貯藏性能密切相關(guān)。高含量的有機(jī)酸有助于果實(shí)的保鮮,因此尋找維持高含量有機(jī)酸或減緩有機(jī)酸降解的方法來延緩柑橘果實(shí)衰老和維持果實(shí)品質(zhì)對(duì)柑橘采后研究具有重要意義。檸檬酸是柑橘果實(shí)中最主要的有機(jī)酸,其含量在采后呈波動(dòng)下降趨勢(shì)。GABA代謝支路與TCA循環(huán)緊密聯(lián)系,是調(diào)控檸檬酸含量的重要途徑,參與調(diào)控采后柑橘果實(shí)有機(jī)酸的降解。GABP（線粒體GABA轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白）是聯(lián)系GABA支路與TCA循環(huán)的紐帶,可作為調(diào)控柑橘果實(shí)采后檸檬酸代謝的關(guān)鍵點(diǎn)。尋找GABP上游調(diào)控因子,從轉(zhuǎn)錄調(diào)控水平探索GABP對(duì)柑橘果實(shí)采后檸檬酸代謝的調(diào)控機(jī)制,可為開發(fā)調(diào)控柑橘采后有機(jī)酸含量及延緩衰老的技術(shù)提供理論依據(jù)。本研究通過克隆柑橘GABP基因（CsGABP）并分析其啟動(dòng)子順式作用元件,利用轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)篩選及酵母單雜交技術(shù)驗(yàn)證調(diào)控CsGABP的候選轉(zhuǎn)錄因子,并探討其調(diào)控機(jī)制,研究結(jié)果如下:1.克隆得到HB柚和無酸柚CsGABP基因組全長(zhǎng)及啟動(dòng)子序列,并克隆HB柚、無酸柚、冰糖橙、錦橙、沙田柚五個(gè)柑橘品種CsGABP基因ORF區(qū)。發(fā)現(xiàn)HB柚和無酸柚各存在兩條... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1 前言
    1.1 課題的提出
    1.2 柑橘果實(shí)有機(jī)酸代謝調(diào)控研究
    1.3 GABA代謝研究
        1.3.1 GABA功能
        1.3.2 GABA代謝途徑
        1.3.3 GABA代謝調(diào)控
    1.4 啟動(dòng)子與轉(zhuǎn)錄因子互作研究
        1.4.1 啟動(dòng)子研究
        1.4.2 轉(zhuǎn)錄因子研究
        1.4.3 酵母單雜交
    1.5 研究目的與內(nèi)容
2 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株和載體
        2.1.3 工具酶及主要試劑
        2.1.4 酵母培養(yǎng)基及溶液配方
        2.1.5 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 HB柚和無酸柚基因組DNA提取
        2.2.2 CsGABP基因組全長(zhǎng)gDNA、ORF區(qū)及啟動(dòng)子序列克隆
        2.2.3 生物信息學(xué)分析
        2.2.4 qRT-PCR驗(yàn)證共表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子
        2.2.5 載體構(gòu)建
        2.2.6 誘餌酵母菌株構(gòu)建
        2.2.7 篩選cDNA文庫
        2.2.8 酵母單雜點(diǎn)對(duì)點(diǎn)驗(yàn)證
3 結(jié)果與分析
    3.1 CsGABP基因及啟動(dòng)子克隆
        3.1.1 CsGABP基因組全長(zhǎng)gDNA、ORF區(qū)
        3.1.2 CsGABP基因啟動(dòng)子克隆
    3.2 CsGABP-a基因啟動(dòng)子順式作用元件預(yù)測(cè)
    3.3 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)篩選候選基因
    3.4 qRT-PCR驗(yàn)證共表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子
    3.5 誘餌載體pBait-AbAi構(gòu)建
        3.5.1 元件誘餌載體構(gòu)建
        3.5.2 片段誘餌載體構(gòu)建
    3.6 誘餌酵母菌株構(gòu)建
        3.6.1 誘餌載體轉(zhuǎn)化Y1H Gold酵母
        3.6.2 誘餌酵母背景表達(dá)水平檢測(cè)
    3.7 cDNA文庫篩選
    3.8 獵物載體AD-Prey構(gòu)建
    3.9 酵母單雜點(diǎn)對(duì)點(diǎn)驗(yàn)證
        3.9.1 AD-Prey載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化誘餌酵母
        3.9.2 AD-Prey載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化誘餌酵母陽性克隆鑒定
4 討論
    4.1 酵母單雜交體系探討
    4.2 篩選的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)探討
    4.3 篩選轉(zhuǎn)錄因子在采后柑橘中功能探討
    4.4 展望
參考文獻(xiàn)
附錄I 酵母轉(zhuǎn)化方法
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]啟動(dòng)子分析方法的研究進(jìn)展[J]. 王秋巖,何淑雅,馬云,李俐娟,李斌元.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2015(14)
[2]The CONSTANS-like 4 transcription factor,AtCOL4,positively regulates abiotic stress tolerance through an abscisic acid-dependent manner in Arabidopsis[J]. Ji-Hee Min,Jung-Sung Chung,Kyeong-Hwan Lee,Cheol Soo Kim.  Journal of Integrative Plant Biology. 2015(03)
[3]轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)數(shù)據(jù)庫[J]. 陳鴻飛,王進(jìn)科.  遺傳. 2010(10)
[4]甌柑果實(shí)采后的品質(zhì)和氧化還原酶活性變化研究[J]. 陳巍,郭秀珠,黃品湖,林紹生,徐文榮,閆田力.  福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2010(04)
[5]柑橘果實(shí)采后熱處理研究進(jìn)展[J]. 王青云,龔吉軍,鐘海雁.  食品科學(xué). 2010(11)
[6]采前殼寡糖處理對(duì)柑橘果實(shí)貯藏品質(zhì)的影響[J]. 鄧麗莉,黃艷,周玉翔,曾凱芳.  食品科學(xué). 2009(24)
[7]柑橘果實(shí)發(fā)育過程中有機(jī)酸含量及相關(guān)代謝酶活性的變化[J]. 羅安才,楊曉紅,鄧英毅,李純凡,向可術(shù),李道高.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2003(08)
[8]莖部注射硒肥對(duì)金桔的生長(zhǎng)及果實(shí)品質(zhì)的影響[J]. 吳其飛,黃達(dá)明,管國(guó)強(qiáng).  水土保持學(xué)報(bào). 2002(06)
[9]臍橙果實(shí)有機(jī)酸代謝調(diào)控措施的初步研究[J]. 文濤,熊慶娥,曾偉光,劉遠(yuǎn)鵬.  四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2001(02)
[10]噴施核苷酸有機(jī)營(yíng)養(yǎng)劑改進(jìn)椪柑果實(shí)品質(zhì)的效果[J]. 姜小文,張秋明,王燦輝,袁世珍.  中國(guó)南方果樹. 2001(03)

博士論文
[1]檸檬酸代謝及轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因?qū)Ω涕俟麑?shí)酸度的調(diào)控機(jī)制[D]. 林瓊.浙江大學(xué) 2015
[2]椪柑和臍橙果實(shí)檸檬酸合成與降解相關(guān)基因表達(dá)及其調(diào)控研究[D]. 陳明.浙江大學(xué) 2013
[3]柚果實(shí)采后貯藏期間有機(jī)酸代謝的研究[D]. 孫曉華.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[4]病原誘導(dǎo)啟動(dòng)子和組織特異性啟動(dòng)子的分離克隆和功能鑒定[D]. 蔡萌.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007

碩士論文
[1]柑橘果實(shí)有機(jī)酸代謝及調(diào)控研究[D]. 趙淼.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3092300