發(fā)布時間：2021-03-18 18:25

　　對羊肚菌菌種退化機(jī)理進(jìn)行初步研究。通過對正常羊肚菌菌種進(jìn)行數(shù)次轉(zhuǎn)接得到退化羊肚菌材料,將正常菌絲和退化菌絲分別用特定的染色試劑處理,觀察菌絲清除活性氧的能力、線粒體膜電位高低變化和線粒體形態(tài)變化,從而探究菌種退化出現(xiàn)的原因。轉(zhuǎn)接后的羊肚菌發(fā)生明顯退化,正常菌絲經(jīng)氯化硝基四氮唑藍(lán)（nitro blue tetrazolium,NBT）染色后,在光學(xué)顯微鏡下呈現(xiàn)淡藍(lán)紫色,退化菌絲在一段時間后形成藍(lán)紫色物質(zhì);正常菌絲經(jīng)熒光染料線粒體紅色熒光探針（Mito-Tracker Red CMXRos）染色后,在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)紅色熒光,而退化菌絲僅有微弱的紅色熒光;經(jīng)過熒光染料線粒體綠色熒光探針（Mito-Tracker Green）染色后的正常菌絲里有明顯的線粒體亮斑,退化菌絲的線粒體則沒有。試驗初步明確羊肚菌菌絲退化的機(jī)理,為羊肚菌菌絲退化研究提供理論依據(jù)。 

【文章來源】：食品研究與開發(fā). 2020,41(10)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

羊肚菌第一代到第十五代部分菌絲生長狀態(tài)

羊肚菌NBT染色結(jié)果見圖2。為了檢驗菌絲清除活性氧的能力，參考Lara-Ortiz等[16]所描述的NBT法對羊肚菌Mor 10和Mor 7正常菌種及退化菌種菌絲內(nèi)活性氧（reactive oxygen species,ROS）進(jìn)行定性測定，在顯微鏡下，用40倍鏡觀察染色后的玻片；結(jié)果顯示，正常菌絲經(jīng)NBT還原后僅僅出現(xiàn)顏色較淡的藍(lán)紫色，而退化菌絲經(jīng)NBT還原后呈現(xiàn)出明顯的藍(lán)紫色物質(zhì)，說明了退化菌種清除活性氧的能力降低，正常菌種清除活性氧的能力大于退化菌種。

為了比較Mor 10和Mor 7正常菌種及退化菌種細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位的差異，根據(jù)Mito-Tracker Red CMXRos顯現(xiàn)紅色熒光的激發(fā)波長為579 nm，發(fā)射波長為599 nm，選擇熒光濾光塊轉(zhuǎn)盤上的綠色熒光濾光塊，比例尺代表100μm。經(jīng)過線粒體膜電位依賴性熒光染料Mito-Tracker Red CMXRos對菌種Mor 10和Mor 7的菌絲染色后，將制作好的玻片放置在熒光倒置顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)這兩種菌種的正常菌絲均能顯示出熒光，而退化菌絲內(nèi)則觀察不到明顯的熒光，該試驗結(jié)果表明，正常菌種線粒體膜電位高于退化菌種。圖3 羊肚菌線粒體膜電位染色結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3088727