歐李（Cerasus humilis）為薔薇科櫻桃屬果樹,是多年生落葉矮生灌木,它抗寒、耐旱、耐瘠薄、耐鹽堿,具有固土保水、防止沙塵、減少地表徑流的作用,適應(yīng)性很強(qiáng),是優(yōu)良的生態(tài)樹種。但目前有關(guān)歐李的抗旱機(jī)制還尚不明確,本研究首先通過組織培養(yǎng)技術(shù)成功建立了歐李的再生體系,試驗(yàn)分別以葉片、莖段為外植體,通過誘導(dǎo)愈傷組織和促進(jìn)腋芽生枝能力兩種途徑對(duì)歐李（懷柔）進(jìn)行快繁。同時(shí),基于歐李抗旱性強(qiáng)的特點(diǎn),我們從前期獲得的歐李轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)出發(fā),從歐李葉片中克隆并獲得全長(zhǎng)NAC基因,并初步進(jìn)行了功能的研究。本研究一方面通過成功建立歐李快繁技術(shù),為后續(xù)歐李的遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建奠定基礎(chǔ),另一方面通過對(duì)NAC基因的初步研究,為揭示歐李抗旱的分子機(jī)制提供線索。主要研究結(jié)果如下：1、通過誘導(dǎo)愈傷組織成功建立了歐李的再生體系（1）外植體的最適消毒條件是：外植體在流水下沖洗30min,75%酒精表面消毒1.0min,1%NaClO消毒4min,無菌水涮洗6-7次。（2）以葉片為外植體誘導(dǎo)愈傷組織的最適培養(yǎng)基為：MS+30g/L蔗糖+8g/L瓊脂粉+1.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA;以莖段為外植體誘導(dǎo)愈傷... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 歐李
    1.2 歐李再生體系的建立
    1.3 NAC基因的研究進(jìn)展
    1.4 研究的內(nèi)容
    1.5 研究的技術(shù)路線
    1.6 研究的技術(shù)路線
2 歐李再生體系的建立
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 外植體最適消毒條件的摸索
        2.3.2 誘導(dǎo)愈傷組織途徑
        2.3.3 促進(jìn)腋芽生枝途徑最適PGR濃度配比摸索
        2.3.4 芽誘導(dǎo)生根階段最適PGR濃度配比摸索
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 外植體最適消毒條件的摸索結(jié)果
        2.4.2 愈傷組織誘導(dǎo)途徑結(jié)果
        2.4.3 促進(jìn)腋芽生枝途徑最適PGR濃度配比摸索結(jié)果
        2.4.4 芽誘導(dǎo)生根階段最適PGR濃度配比摸索結(jié)果
    2.5 討論
    2.6 本章小結(jié)
3 歐李NACl基因克隆及植物表達(dá)載體構(gòu)建
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 植物材料與培養(yǎng)
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 歐李總RNA提取
        3.2.2 歐李總RNA的消化及純化
        3.2.3 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA
        3.2.4 歐李NAC1基因片段的cDNA克隆和測(cè)序
        3.2.5 植物表達(dá)載體pROK2-ChNAC1的構(gòu)建
        3.2.6 歐李ChNAC1基因的生物信息學(xué)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和分析
        3.3.1 ChNAC1植物高效表達(dá)載體構(gòu)建
        3.3.2 NAC1基因的序列分析
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
4 歐李ChNAC1基因功能的初步研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        4.2.2 擬南芥的培養(yǎng)
        4.2.3 農(nóng)桿菌遺傳轉(zhuǎn)化擬南芥
        4.2.4 轉(zhuǎn)基因植株的檢測(cè)
        4.2.5 轉(zhuǎn)基因植株的形態(tài)學(xué)觀察
        4.2.6 干旱脅迫下轉(zhuǎn)基因植株葉綠素含量測(cè)定
        4.2.7 外源ABA對(duì)植株根發(fā)育的影響
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 農(nóng)桿菌EHA105浸染菌株鑒定
        4.3.2 ChNAC1轉(zhuǎn)基因擬南芥獲得
        4.3.3 ChNAC1轉(zhuǎn)基因擬南芥的PCR鑒定
        4.3.4 ChNAC1轉(zhuǎn)基因擬南芥形態(tài)特征
        4.3.5 干旱脅迫下轉(zhuǎn)基因植株葉綠素含量變化
        4.3.6 外源ABA對(duì)植株根發(fā)育的影響結(jié)果
        4.3.7 NAC1基因的表達(dá)分析
    4.4 討論
    4.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]歐李離體葉片再生體系的建立[J]. 姚婷,張開春,閆國(guó)華,王晶,張曉明.  果樹學(xué)報(bào). 2012(04)
[2]鈣果不定芽生根誘導(dǎo)研究[J]. 徐立,李志英.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2008(29)
[3]鈣果4號(hào)歐李組織培養(yǎng)技術(shù)研究[J]. 孫新政,申順先,李慶偉,陳世昌.  果樹學(xué)報(bào). 2007(01)
[4]外源植物激素對(duì)鈣果繁殖系數(shù)的影響[J]. 劉琳,鐘士傳.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2005(03)
[5]歐李的組織培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)[J]. 莊麗娟,蘇福才.  內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2005(01)
[6]植物激素對(duì)鈣果組織培養(yǎng)的影響[J]. 鐘士傳,王俠禮,于軍香,曹幫華.  山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2005(01)
[7]鈣果(歐李)組織培養(yǎng)技術(shù)研究[J]. 任清盛.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2005(01)
[8]大歐李產(chǎn)量構(gòu)成因素研究[J]. 錢國(guó)珍,蘇福才,李鳳艷,李巧玲,陳淑蘭.  內(nèi)蒙古農(nóng)牧學(xué)院學(xué)報(bào). 1998(04)
[9]歐李的組織培養(yǎng)[J]. 趙玉軍,杜俊杰,郭黃萍,杜學(xué)梅,賀小紅.  山西農(nóng)業(yè)科學(xué). 1997(03)
[10]歐李莖、葉愈傷組織的誘導(dǎo)及莖苗的再生[J]. 錢國(guó)珍,蘇福才,牛文林.  內(nèi)蒙古農(nóng)牧學(xué)院學(xué)報(bào). 1994(04)

碩士論文
[1]鹽和干旱脅迫下歐李的生理響應(yīng)及轉(zhuǎn)錄組分析[D]. 孫孟超.東北林業(yè)大學(xué) 2013
[2]鈣果組織培養(yǎng)關(guān)鍵技術(shù)的研究[D]. 杜研.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3084561