歐李（Cerasus humilis）為薔薇科櫻桃屬果樹,是多年生落葉矮生灌木,它抗寒、耐旱、耐瘠薄、耐鹽堿,具有固土保水、防止沙塵、減少地表徑流的作用,適應性很強,是優(yōu)良的生態(tài)樹種。但目前有關歐李的抗旱機制還尚不明確,本研究首先通過組織培養(yǎng)技術成功建立了歐李的再生體系,試驗分別以葉片、莖段為外植體,通過誘導愈傷組織和促進腋芽生枝能力兩種途徑對歐李（懷柔）進行快繁。同時,基于歐李抗旱性強的特點,我們從前期獲得的歐李轉錄組數(shù)據(jù)出發(fā),從歐李葉片中克隆并獲得全長NAC基因,并初步進行了功能的研究。本研究一方面通過成功建立歐李快繁技術,為后續(xù)歐李的遺傳轉化體系的構建奠定基礎,另一方面通過對NAC基因的初步研究,為揭示歐李抗旱的分子機制提供線索。主要研究結果如下：1、通過誘導愈傷組織成功建立了歐李的再生體系（1）外植體的最適消毒條件是：外植體在流水下沖洗30min,75%酒精表面消毒1.0min,1%NaClO消毒4min,無菌水涮洗6-7次。（2）以葉片為外植體誘導愈傷組織的最適培養(yǎng)基為：MS+30g/L蔗糖+8g/L瓊脂粉+1.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA;以莖段為外植體誘導愈傷... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 歐李
    1.2 歐李再生體系的建立
    1.3 NAC基因的研究進展
    1.4 研究的內容
    1.5 研究的技術路線
    1.6 研究的技術路線
2 歐李再生體系的建立
    2.1 實驗材料
    2.2 實驗試劑和儀器設備
    2.3 實驗方法
        2.3.1 外植體最適消毒條件的摸索
        2.3.2 誘導愈傷組織途徑
        2.3.3 促進腋芽生枝途徑最適PGR濃度配比摸索
        2.3.4 芽誘導生根階段最適PGR濃度配比摸索
    2.4 結果
        2.4.1 外植體最適消毒條件的摸索結果
        2.4.2 愈傷組織誘導途徑結果
        2.4.3 促進腋芽生枝途徑最適PGR濃度配比摸索結果
        2.4.4 芽誘導生根階段最適PGR濃度配比摸索結果
    2.5 討論
    2.6 本章小結
3 歐李NACl基因克隆及植物表達載體構建
    3.1 實驗材料
        3.1.1 植物材料與培養(yǎng)
    3.2 實驗方法
        3.2.1 歐李總RNA提取
        3.2.2 歐李總RNA的消化及純化
        3.2.3 反轉錄合成cDNA
        3.2.4 歐李NAC1基因片段的cDNA克隆和測序
        3.2.5 植物表達載體pROK2-ChNAC1的構建
        3.2.6 歐李ChNAC1基因的生物信息學分析
    3.3 實驗結果和分析
        3.3.1 ChNAC1植物高效表達載體構建
        3.3.2 NAC1基因的序列分析
    3.4 討論
    3.5 本章小結
4 歐李ChNAC1基因功能的初步研究
    4.1 實驗材料
    4.2 試驗方法
        4.2.1 植物表達載體轉化農桿菌
        4.2.2 擬南芥的培養(yǎng)
        4.2.3 農桿菌遺傳轉化擬南芥
        4.2.4 轉基因植株的檢測
        4.2.5 轉基因植株的形態(tài)學觀察
        4.2.6 干旱脅迫下轉基因植株葉綠素含量測定
        4.2.7 外源ABA對植株根發(fā)育的影響
    4.3 結果與分析
        4.3.1 農桿菌EHA105浸染菌株鑒定
        4.3.2 ChNAC1轉基因擬南芥獲得
        4.3.3 ChNAC1轉基因擬南芥的PCR鑒定
        4.3.4 ChNAC1轉基因擬南芥形態(tài)特征
        4.3.5 干旱脅迫下轉基因植株葉綠素含量變化
        4.3.6 外源ABA對植株根發(fā)育的影響結果
        4.3.7 NAC1基因的表達分析
    4.4 討論
    4.5 本章小結
結論
參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的學術論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]歐李離體葉片再生體系的建立[J]. 姚婷,張開春,閆國華,王晶,張曉明.  果樹學報. 2012(04)
[2]鈣果不定芽生根誘導研究[J]. 徐立,李志英.  安徽農業(yè)科學. 2008(29)
[3]鈣果4號歐李組織培養(yǎng)技術研究[J]. 孫新政,申順先,李慶偉,陳世昌.  果樹學報. 2007(01)
[4]外源植物激素對鈣果繁殖系數(shù)的影響[J]. 劉琳,鐘士傳.  安徽農業(yè)科學. 2005(03)
[5]歐李的組織培養(yǎng)與快速繁殖技術[J]. 莊麗娟,蘇福才.  內蒙古農業(yè)大學學報(自然科學版). 2005(01)
[6]植物激素對鈣果組織培養(yǎng)的影響[J]. 鐘士傳,王俠禮,于軍香,曹幫華.  山東農業(yè)大學學報(自然科學版). 2005(01)
[7]鈣果(歐李)組織培養(yǎng)技術研究[J]. 任清盛.  中國農學通報. 2005(01)
[8]大歐李產量構成因素研究[J]. 錢國珍,蘇福才,李鳳艷,李巧玲,陳淑蘭.  內蒙古農牧學院學報. 1998(04)
[9]歐李的組織培養(yǎng)[J]. 趙玉軍,杜俊杰,郭黃萍,杜學梅,賀小紅.  山西農業(yè)科學. 1997(03)
[10]歐李莖、葉愈傷組織的誘導及莖苗的再生[J]. 錢國珍,蘇福才,牛文林.  內蒙古農牧學院學報. 1994(04)

碩士論文
[1]鹽和干旱脅迫下歐李的生理響應及轉錄組分析[D]. 孫孟超.東北林業(yè)大學 2013
[2]鈣果組織培養(yǎng)關鍵技術的研究[D]. 杜研.甘肅農業(yè)大學 2007



本文編號：3084561