發(fā)布時間：2021-03-02 12:18

　　[目的]黃花菜（Hemerocallis citrina Barni）是我國特有的經濟型蔬菜,目前急需加速分子育種進程,開發(fā)遺傳學平臺。本文旨在優(yōu)化黃花菜染色體制片技術,構建黃花菜熒光原位雜交體系,為遺傳圖譜與物理圖譜的整合提供技術基礎。[方法]以大同黃花菜（H.cv.‘DatongHuanghua’）為研究材料,分別對中期根尖細胞和粗線期花粉母細胞的制片方法進行優(yōu)化,同時以擬南芥45S rDNA和5S rDNA序列為探針,篩選和優(yōu)化黃花菜熒光原位雜交體系技術參數。[結果]中期染色體制片最佳體系:2.9μg·mL^-1濃度的八羥基喹啉溶液處理4 h,混合酶液（纖維素酶∶果膠酶=2∶1）37℃酶解160 min;粗線期染色體制片最佳體系:采集4～5 mm齡段花蕾,卡諾固定液4℃固定24 h后,混合酶液（纖維素酶∶果膠酶=2∶1）37℃酶解220 min,使用改良火焰干燥法,均可得到理想制片。采用直接標記法對45S rDNA和5S rDNA探針序列進行熒光標記,結果顯示雜交信號清晰穩(wěn)定,背景干擾小。[結論]本研究構建并優(yōu)化了黃花菜染色體制片技術及熒光原位雜交體系,可為黃... 

【文章來源】：山西農業(yè)大學學報(自然科學版). 2020,40(06)北大核心

【文章頁數】：8 頁

【部分圖文】：

不同預處理條件下染色體凝縮情況

在花蕾發(fā)育早期，通過采集不同長度花蕾并觀察花藥內花粉母細胞的細胞學特征，以確定花粉母細胞集中在粗線期時對應的花蕾長度。由圖3可以得出，花蕾處于2～3 mm齡段時，花藥內花粉母細胞多處于分裂間期和減數分裂細線期（圖3B）�；ɡ偬幱�4～5 mm齡段時，花粉母細胞多處于粗線期或粗線期之前（圖3C），此時細胞內核仁明顯，與細線期相比，由于同源染色體聯會二價體開始收縮變粗并相互纏繞，適合作為花粉母細胞粗線期染色體制片材料。當花蕾生長至4～5 mm時，花粉母細胞大多已進入減數分裂Ⅰ中期和后期（圖3D）。超過6 mm的花蕾，花粉母細胞已進入四分體時期甚至發(fā)育成花粉粒。圖3 花粉母細胞減數分裂不同時期細胞學特征

花粉母細胞減數分裂不同時期細胞學特征

【參考文獻】：
期刊論文
[1]植物生長調節(jié)劑對黃花菜鮮切花薹保鮮效果的影響[J]. 周玲玲,余翔,田福發(fā),李斌,張黎杰.  江西農業(yè)學報. 2020(04)
[2]煙草18S rDNA染色體原位雜交技術優(yōu)化研究[J]. 王金英,曹帥,黨江波,梁國魯,楊超,張艷,陳益銀.  中國煙草學報. 2019(02)
[3]萱草屬植物染色體制片技術優(yōu)化及倍性鑒定[J]. 張俊,王榮梅,王金耀,侯非凡,亢秀萍,李森,邢國明.  河北農業(yè)大學學報. 2018(03)
[4]食用黃花菜中含秋水仙堿的質證研究[J]. 湯敏娜,劉秀斌,黃嘉璐,鄧放明,曾建國.  中草藥. 2016(18)
[5]黃瓜倍性材料創(chuàng)制及染色體組成的FISH鑒定[J]. 管葦,張云霞,楊樹瓊,陳勁楓,婁群峰.  中國農業(yè)科學. 2014(17)
[6]薔薇屬3個野生種中45S rDNA和5S rDNA的物理定位[J]. 張婷,蹇洪英,田敏,王其剛,張顥,晏慧君,邱顯欽,唐開學.  園藝學報. 2014(05)
[7]橡膠樹葉片染色體制片方法的優(yōu)化[J]. 高和瓊,王英,金鴿,邱海燕,莊南生.  熱帶作物學報. 2009(05)
[8]熒光原位雜交技術在細胞遺傳學和基因圖譜繪制中的應用[J]. 趙志強,黃永,陳玲.  河南科技大學學報(醫(yī)學版). 2003(02)
[9]黃花菜品種資源研究[J]. 劉永慶,沈美娟.  園藝學報. 1990(01)

博士論文
[1]萱草屬（Hemerocallis spp.）種質資源親緣關系及種內雜交新種質選擇[D]. 朱云華.南京林業(yè)大學 2010

碩士論文
[1]梅花染色體制片技術優(yōu)化及基于熒光原位雜交的核型分析[D]. 陳晶鑫.北京林業(yè)大學 2013



本文編號：3059248