本文從珀溪蜜柚黑斑病菌Phyllosticta citriasiana的生長特性、寄主范圍、代謝活性組分、遺傳轉(zhuǎn)化及綠色熒光蛋白標(biāo)記等內(nèi)容進(jìn)行研究,取得結(jié)果如下：P. citriasiana菌絲生長對溫度敏感,人工培養(yǎng)條件下,培養(yǎng)溫度≥40℃或≤10℃時,菌絲生長完全受抑制。培養(yǎng)溫度在15℃-35℃之間,菌絲生長速率呈現(xiàn)先增長后驟降的趨勢,在培養(yǎng)溫度為25℃時菌絲生長速率最快,7d的菌落直徑達(dá)3.41cm,30℃次之（3.25cm）,它們與15℃（1.29cm）、20℃（1.49cm）和35℃（0.68cm）的生長速率存在顯著差異,表明25-30℃較適宜該菌菌絲生長。菌絲在SOA培養(yǎng)基生長速率最快（9d）,與在OA培養(yǎng)基上的生長速率存在顯著差異,OA培養(yǎng)基上添加2%的山梨醇可以促進(jìn)菌絲的生長。菌絲生長對光照強度敏感,光照強度為0 Lux（黑暗條件）時生長速率最快,而光照強度為1980 Lux條件下的生長速率顯著降低。P. citriasiana分生孢子在1%葡萄糖溶液、10%葡萄糖溶液和水中的萌發(fā)率隨著萌發(fā)時間的延長（0-72h）,萌發(fā)率先升高后降低,在萌發(fā)48h時,萌發(fā)率最高,分別為... 

【文章來源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 寄生在柑橘屬植物上的葉點霉種類及分布
    1.2 葉點霉對柑橘屬植物的危害及其生活史
    1.3 琯溪蜜柚黑斑病菌P. citriasiana的研究進(jìn)展
    1.4 葉點霉屬真菌的遺傳轉(zhuǎn)化及綠色熒光蛋白標(biāo)記
    1.5 本研究的目的和意義
第二章 Phyllosticta citriasiana的生長特性及寄主范圍測定
    2.1 材料、試劑和儀器
        2.1.1 材料
        2.1.2 試劑
        2.1.3 儀器
    2.2 試驗方法
        2.2.1 不同培養(yǎng)基對P. citriasiana菌絲生長的影響
        2.2.2 不同溫度對P. citriasiana菌絲生長的影響
        2.2.3 不同光照條件對P. citriasiana菌絲生長的影響
        2.2.4 不同培養(yǎng)液對分生孢子萌發(fā)的影響
        2.2.5 P. citriasiana菌絲和分生孢子致死溫度測定
            2.2.5.1 P. citriasiana菌絲致死溫度的測定
            2.2.5.2 P. citriasiana分生孢子致死溫度測定
        2.2.6 P.citriasiana寄主范圍測定
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 不同培養(yǎng)基對P. citriasiana菌絲生長的影響
        2.3.2 不同溫度對P. citriasiana菌絲生長的影響
        2.3.3 不同光照強度對P. citriasiana菌絲生長的影響
        2.3.4 不同培養(yǎng)液對分生孢子萌發(fā)的影響
        2.3.5 P. citriasiana菌絲和分生孢子致死溫度測定
        2.3.6 P. citriasiana寄主范圍測定
    2.4 討論
第三章 P. citriasiana培養(yǎng)濾液生物活性組分研究
    3.1 材料、試劑和儀器
        3.1.1 材料
        3.1.2 試劑
        3.1.3 儀器
    3.2 試驗方法
        3.2.1 P. citriasiana培養(yǎng)濾液的制備及生物活性測定
            3.2.1.1 P.citriasiana在不同液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)濾液活性組分的差異
            3.2.1.2 不同溫度水浴處理對P.citriasiana培養(yǎng)濾液活性組分的影響
            3.2.1.3 不同培養(yǎng)時間對P.citriasiana培養(yǎng)濾液活性物質(zhì)的影響
        3.2.2 P. citriasiana培養(yǎng)濾液活性粗提物的紫外吸收光譜特性及生物測定
            3.2.2.1 P. citriasiana培養(yǎng)濾液活性組分的提取及紫外吸收光譜特征
            3.2.2.2 不同濃度培養(yǎng)濾液粗提物對琯溪蜜柚葉片的活性測定
            3.2.2.3 P. citriasiana培養(yǎng)濾液粗提物對兩種田間雜草的活性測定
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 P. citriasiana在不同液體培養(yǎng)基上生長差異及活性組分差異
        3.3.2 不同溫度處理P. citriasiana培養(yǎng)濾液對生物活性的影響
        3.3.3 不同培養(yǎng)時間對P. citriasiana培養(yǎng)濾液生物活性的影響
        3.3.4 不同濃度P. citriasiana培養(yǎng)濾液粗提物對琯溪蜜柚葉片的生物活性測定
        3.3.5 不同方法提取的P. citriasiana活性組分紫外吸收光譜的差異
        3.3.6 P. citriasiana培養(yǎng)濾液粗提物對兩種雜草的生物活性測定
    3.4 討論
第四章 P. citriasiana原生質(zhì)體的制備和再生
    4.1 材料、試劑和儀器
        4.1.1 材料
        4.1.2 試劑
        4.1.3 儀器
    4.2 試驗方法
        4.2.1 適合P.citriasiana產(chǎn)生鮮嫩菌絲的液體培養(yǎng)基篩選
        4.2.2 不同濃度裂解酶對P. citriasiana原生質(zhì)體形成的影響
        4.2.3 不同裂解時間對P. citriasiana原生質(zhì)體形成的影響
        4.2.4 不同濃度的酶對P. citriasiana原生質(zhì)體再生的影響
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 適合P. citriasiana產(chǎn)生鮮嫩菌絲的液體培養(yǎng)基篩選
        4.3.2 不同濃度的酶對P. citriasiana原生質(zhì)體形成的影響
        4.3.3 不同裂解時間對P. citriasiana原生質(zhì)體形成的影響
        4.3.4 P. citriasiana原生質(zhì)體再生的影響因子分析
    4.4 討論
第五章 P. citriasiana的綠色熒光蛋白標(biāo)記
    5.1 材料、試劑和儀器
        5.1.1 材料
        5.1.2 試劑
        5.1.3 儀器
    5.2 試驗方法
        5.2.1 不同潮霉素濃度對P. citriasiana菌絲生長的影響
        5.2.2 pCT74質(zhì)粒DNA的抽提
2）介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化">        5.2.3 聚乙二醇-氯化鈣（PEG-CaCl₂）介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化
        5.2.4 不同因子對P. citriasiana原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化率的影響
        5.2.5 轉(zhuǎn)化子的篩選和驗證
            5.2.5.1 轉(zhuǎn)化子的PCR驗證
            5.2.5.2 轉(zhuǎn)化子的熒光顯微觀察驗證
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 不同潮霉素濃度對P. citriasiana菌絲生長的影響
        5.3.2 P. citriasiana原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化效率分析
        5.3.3 P. citriasiana轉(zhuǎn)化子的驗證
    5.4 討論
第六章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]柑橘黑斑病新病原亞洲柑橘葉點霉生物學(xué)特性[J]. 羅金水,盧松茂,余智城,林秀香,賴躍先,黃天瑞.  福建農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2016(02)
[2]琯溪蜜柚黑斑病拮抗細(xì)菌分離及鑒定[J]. 鄭域茹,林秀香,武英,王美盛,林曉蘭,羅金水.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2015(34)
[3]葉點霉屬真菌寄主(宿主)和地理分布的多樣性[J]. 吳石平,陳文,劉作易.  貴州農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(06)
[4]南非:停止向歐盟出口甜橙,柑桔出口遇困境[J]. 梁容.  中國果業(yè)信息. 2014(10)
[5]玉米紋枯病菌細(xì)胞核純化與原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化的探討[J]. 張眉,周善躍,陳旭君,李寶篤,郭澤建.  植物病理學(xué)報. 2014(03)
[6]歐盟:因發(fā)現(xiàn)黑斑病暫停進(jìn)口南非柑桔[J]. 童彤.  中國果業(yè)信息. 2013(12)
[7]琯溪蜜柚黑斑病菌防治藥劑室內(nèi)篩選試驗[J]. 林秀香,余智城,盧松茂,羅金水,張漢榮,林智明.  中國南方果樹. 2013(02)
[8]絲狀真菌啟動子研究進(jìn)展[J]. 林濤,黃建忠.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(07)
[9]巢式PCR檢測琯溪蜜柚黑斑病病原菌[J]. 鄭域茹,羅金水,張漢榮,盧松茂,林智明,王宏毅,李美桂.  熱帶作物學(xué)報. 2013(02)
[10]琯溪蜜柚黑斑病菌分離鑒定及其致病性測定[J]. 羅金水,張漢榮,盧松茂,賴躍先,林秀香,余智城,林智明,鄭域茹.  福建熱作科技. 2011(04)

博士論文
[1]中國西南地區(qū)葉點霉屬真菌分子系統(tǒng)學(xué)研究[D]. 吳石平.貴州大學(xué) 2015
[2]中國柑橘黑斑病相關(guān)的葉點霉屬真菌種類、遺傳多樣性和快速診斷技術(shù)研究[D]. 王興紅.浙江大學(xué) 2012

碩士論文
[1]琯溪蜜柚黑斑病診斷與發(fā)生規(guī)律研究[D]. 張曉彬.福建農(nóng)林大學(xué) 2014



本文編號：3053707