萵苣（Lactuca sativa L.）是世界上重要的蔬菜作物。2013-2015年冬季,在湖南省的萵苣上發(fā)現(xiàn)一種危害嚴(yán)重的葉斑病。田間癥狀為葉片大量黃褐色壞死斑點,圓形至橢圓形,病斑直徑2-10mm不等。通過組織分離法,分離純化該萵苣葉斑病的病原,形態(tài)學(xué)結(jié)合分子生物學(xué)將其鑒定為囊狀匍柄霉（Stemphylium vesicarium）,編號Sv HN-02。將Sv HN-02與實驗室前期獲得的含有真菌病毒的匍柄霉屬弱毒菌株WS-01（Stemphylium solani）對峙培養(yǎng)后,發(fā)現(xiàn)該真菌病毒可水平轉(zhuǎn)移至菌株Sv HN-02,并對寄主真菌產(chǎn)生影響,結(jié)果如下:1、萵苣葉斑病葉上分離純化得到的菌株Sv HN-02經(jīng)柯赫氏法則驗證確定為萵苣葉斑病的病原。形態(tài)學(xué)結(jié)合分子生物學(xué)將菌株Sv HN-02鑒定為S.vesicarium。這是首次發(fā)現(xiàn)S.vesicarium引起萵苣葉斑病。研究了Sv HN-02的部分生物學(xué)特性,發(fā)現(xiàn)其在p H7的培養(yǎng)基上生長最快,最適生長溫度為25℃。2、Sv HN-02與前期本實驗室分離的帶真菌病毒的弱毒菌株WS-01對峙培養(yǎng)后,通過試驗確定了該病毒可以水平轉(zhuǎn)... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

萵苣葉斑病田間發(fā)病癥狀Figure2-1Symptomsoflettuceleafspot分離純化的病原菌在PDA、PCA和V8三種培養(yǎng)基上生長速度差別很小

圖 2-2 從左至右依次為菌株（SvHN-02）在 A1:PDA、A2:PCA 和 A3:V8 培養(yǎng)基上培養(yǎng) 8 d 后的菌落形態(tài)圖：B1：菌株（SvHN-02）分生孢子；B2: 菌株（SvHN-02）分生孢子梗；和 B3：菌株（SvHN-02）分生孢子萌發(fā)Figure 2-2 From left to right strains （SvHN-02） medium for 8 d after the colony morphologydiagram in A1:PDA: B1: A2:PCA, andA3:V8 strains （SvHN-02） conidia; strain B2: （SvHN-02）sterigmata; and B3 Strain （SvHN-02） conidia germination2.3.2 形態(tài)鑒定通過觀察、測量分離純化后獲得的病原菌 SvHN-02 的形態(tài)特征包括分生孢子的大小及長寬比，參照 Simmons E G（1969; 1985）和張?zhí)煊睿?009）《中國真菌志》進(jìn)行微觀形態(tài)學(xué)的鑒定。觀察結(jié)果與 Koike, S T（2013）年報道的孢子形態(tài)相似，從形態(tài)學(xué)初步鑒定為 Stemphylium vesicarium.。

苣葉斑病病菌進(jìn)行鑒定，采用分子生物學(xué)方，使用 ITS4/ITS5，微管蛋白β（BT）和延伸擴(kuò)增后，取 5 μL PCR 產(chǎn)物采用 1%瓊脂糖凝膠右的 3 條帶（見圖 2-3），并送 PCR 產(chǎn)物到鉑 NCBI BLAST 比對。結(jié)果顯示：rDNA-.1）一致性為 99%，與 Stemphylium solani（Aα（TEF1 -α）與 Stemphylium vesicarium（JF3 lycopersici（KU599924.1）一致性為 94%；β-icarium（JQ671944.1）一致性為 97%，與為 94%。運(yùn)用 MEGA6.0 采用鄰接法分別對三圖 2-3，圖 2-3C）。綜合系統(tǒng)發(fā)育樹可知， 歸為一類，據(jù)此，將 SvHN-02 鑒定為 Stemp

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[2]番茄灰葉斑病病原鑒定及其生物學(xué)特性研究[D]. 韓長志.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[3]大蒜葉枯病病原生物學(xué)及病菌毒素培養(yǎng)條件研究[D]. 張志強(qiáng).西北農(nóng)林科技大學(xué) 2007
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本文編號：3040108