黃瓜（Cucumis sativus L.）是重要的設(shè)施栽培作物,設(shè)施土壤鹽漬化嚴(yán)重制約了黃瓜的生產(chǎn)。microRNA（miRNA）通過作用于靶基因參與調(diào)控植物對非生物逆境的抗性。課題組前期通過對高通量測序結(jié)果分析,得到了一些在鹽脅迫下差異表達(dá)的黃瓜miRNAs。本研究在此基礎(chǔ)之上,進(jìn)一步挖掘響應(yīng)鹽脅迫的關(guān)鍵miRNAs的功能。主要結(jié)合轉(zhuǎn)基因技術(shù)和耐鹽性鑒定,篩選出一種或多種在鹽脅迫中發(fā)揮作用的miRNAs,并且對其響應(yīng)鹽脅迫的機(jī)理做初步的探究,為黃瓜耐鹽性研究提供參考。本研究主要結(jié)果如下:1.結(jié)合高通量測序結(jié)果和qRT-PCR驗(yàn)證,篩選出miR166和miR319可能響應(yīng)黃瓜鹽脅迫。根據(jù)課題組前期測序得到的10種在鹽脅迫下差異表達(dá)的miRNAs,挑選出和鹽逆境相關(guān)靶基因作為這些miRNAs預(yù)測靶基因。通過qRT-PCR分析miRNA和預(yù)測靶基因之間的關(guān)系,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在黃瓜的葉片和根尖中,miR166負(fù)調(diào)控其預(yù)測靶基因;在黃瓜根尖中,miR319負(fù)調(diào)控其預(yù)測靶基因。2.獲得miR166和miR319的純合過表達(dá)轉(zhuǎn)基因擬南芥。以黃瓜“津春2號”的DNA作為模板,克隆miR166和miR31... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

miRNA與其預(yù)側(cè)靶垂因表達(dá)盆之間的關(guān)系

注：Ｌ表示葉片，Ｒ表示根系??Ｆｉｇ．３－１１?Ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?ｋｅｙ?ｓａｌｔ－ｔｏｌｅｒａｎｔ?ｇｅｎｅｓ?ｉｎ?ｍｉＲ１６６?Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ??ｔｈａｌｉａｎａ??Ｎｏｔｅ：?Ｌ?ｍｅａｎｓ?ｔｈｅ?ｌｅａｆ，?Ｒ?ｍｅａｎｓ?ｔｈｅ?ｒｏｏｔ??

?位點(diǎn)，突變靶基因位點(diǎn)（陰性對照），與ｍｉＲＮＡ序列完全互補(bǔ)的靶基因位點(diǎn)（陽??性對照）。如圖３－１４，根據(jù)ｍｉＲ１６６的預(yù)測靶基因結(jié)果，分別設(shè)計(jì)與預(yù)測靶位點(diǎn)相??對應(yīng)陰性對照和陽性對照序列。??Ｅｖ：?????ｍｉＲＮＡ?：?????Ｔａｒ：?？??Ｔａｒｇｅｔ??Ｍ－ｔａｒ?：??Ｍｕｔａｎｔ?ｔａｒｇｅｔ?）??ＧＦＰ????Ｐ－ｔａｒ?：?Ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｔａｒｇｅｔ?ｊ?ＧＦＰ?????圖３－１３農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草瞬時(shí)轉(zhuǎn)化載體構(gòu)建圖??Ｆｉｇ．３－１３?Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ－ｍｅｄｉａｔｅｄ?ｔｒａｎｓｉｅｎｔ?ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ?ｉｎ?Ｔｏｂａｃｃｏ．??注：ＥＶ：空載，ｍｉＲＮＡ：?ｍｉＲＮＡ的前體序列，Ｔａｒ：?ｍｉＲＮＡ的靶基因位點(diǎn)，Ｍ－ｔａｒ：?ｍｉＲＮＡ??靶基因的突變位點(diǎn)，Ｐ－ｔａｒ：?ｍｉＲＮＡ靶基因的完全互補(bǔ)位點(diǎn)。??Ｎｏｔｅ：?ＥＶ：?ｅｍｐｔｙ?ｖｅｃｔｏｒ，?ｍｉＲＮＡ：?ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ?ｏｆ?ｍｉＲＮＡ，?Ｔａｒ：?ｔａｒｇｅｔ?ｇｅｎｅ?ｓｉｔｅｓ?ｏｆ?ｍｉＲＮＡ，?Ｍ－ｔａｒ：??ｍｕｔａｔｉｏｎ?ｓｉｔｅｓ?ｏｆ?ｍｉＲＮＡ?ｔａｒｇｅｔ，?Ｐ－ｔａｒ：?ｃｏｍｐｌｅｔｅ?ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ?ｓｉｔｅｓ?ｏｆ?ｔａｒｇｅｔ?ｇｅｎｅｓ?ｏｆ?ｍｉＲＮＡ．??▲?Ｂ??＾?ｍｉＲＮＡ?２１?ＣＣＣＣＵＵＡＣＵＵＣＧＧＡＣＣＡＧＧＣＵ?１????Ｃｓａ７Ｇ４５２９４０：?＃?ＳＳＩ?ｃｏｇｇａａｕｇａａｇｃｃｕｇｇｕ＾ｃｇｇ?５７１?Ｃｓａ７Ｇ４５２９４０：５

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3034598