蘭州百合（Lilium davidian var.unicolor）和細(xì)葉百合（Lilium pumilum DC.Fisch.）是原產(chǎn)于我國的野生百合,具有較高的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值,但種球繁殖周期較長,繁殖系數(shù)較低。體細(xì)胞胚發(fā)生具有再生效率高,繁殖速度快等特點(diǎn),對于百合的種質(zhì)保存,種球繁殖等具有重要意義。生長素作為一種重要的植物激素,在植物生長發(fā)育過程中起重要調(diào)節(jié)作用,目前有關(guān)內(nèi)源生長素對體細(xì)胞胚發(fā)生調(diào)控機(jī)理尚未明了。本研究利用超高液相色譜-三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀對兩種百合體細(xì)胞胚發(fā)生過程中內(nèi)源生長素含量進(jìn)行了測定,根據(jù)實(shí)驗(yàn)室前期測序結(jié)果篩選出生長素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中起調(diào)控作用的miR393b及靶基因TIR1,克隆了mi R393b成熟體序列,對miR393b及靶基因TIR1進(jìn)行了表達(dá)分析。為進(jìn)一步研究內(nèi)源生長素在百合體細(xì)胞胚發(fā)生過程中的作用奠定了基礎(chǔ)。主要結(jié)論如下:1.內(nèi)源生長素含量測定兩種百合中內(nèi)源生長素含量均存在兩次峰值。在細(xì)葉百合中,培養(yǎng)15 d胚性細(xì)胞以內(nèi)起源形式出現(xiàn)時(shí)生長素含量達(dá)到最大值,培養(yǎng)42 d胚性愈傷組織Ⅱ階段出現(xiàn)第二個(gè)峰值。在蘭州百合中,培養(yǎng)12 d胚性細(xì)胞以內(nèi)起源形... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 生長素對植物體細(xì)胞胚發(fā)生的重要作用
        1.1.1 生長素合成
        1.1.2 生長素的運(yùn)輸
        1.1.3 生長素信號(hào)響應(yīng)
        1.1.4 植物內(nèi)源激素檢測研究進(jìn)展
        1.1.5 外源生長素與植物體細(xì)胞胚發(fā)生
        1.1.6 內(nèi)源生長素與植物體細(xì)胞胚發(fā)生
    1.2 microRNA調(diào)控植物體細(xì)胞胚發(fā)生研究進(jìn)展
        1.2.1 miRNA的合成
        1.2.2 miRNA的作用機(jī)制
        1.2.3 植物miRNA與體細(xì)胞胚發(fā)生
        1.2.4 植物miRNA與激素調(diào)節(jié)
        1.2.5 miR393研究進(jìn)展
    1.3 本研究的目的意義
2 百合體細(xì)胞胚發(fā)生過程中生長素含量測定
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 主要試劑及儀器
        2.1.3 溶液配制
        2.1.4 激素提取
        2.1.5 固相萃取
        2.1.6 濃縮
        2.1.7 質(zhì)譜條件
        2.1.8 色譜條件
    2.2 結(jié)果分析
        2.2.1 提取溶劑的選擇
        2.2.2 提取時(shí)間的選擇
        2.2.3 質(zhì)譜條件的選擇
        2.2.4 色譜條件的選擇
        2.2.5 線性關(guān)系和檢測極限
        2.2.6 回收率和準(zhǔn)確度
        2.2.7 百合體細(xì)胞胚各時(shí)期生長素含量變化
    2.3 討論
3 lda-miR393b和lpu-miR393b的克隆
    3.1 材料方法
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 主要試劑及儀器
        3.1.3 RNA提取
        3.1.4 miR393b特異莖環(huán)反轉(zhuǎn)錄
        3.1.5 lda-miR393b和lpu-miR393b擴(kuò)增反應(yīng)
        3.1.6 PCR產(chǎn)物純化
        3.1.7 目的片段的連接、轉(zhuǎn)化和測序
    3.2 結(jié)果分析
        3.2.1 細(xì)葉百合和蘭州百合總RNA提取
        3.2.2 lpu-miR393b和lda-miR393b的克隆
    3.3 討論
4 百合體細(xì)胞胚發(fā)生過程中miR393b及靶基因TIR1表達(dá)分析
    4.1 材料方法
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 主要試劑及儀器
        4.1.3 RNA提取
        4.1.4 qRT-PCR引物設(shè)計(jì)
        4.1.5 cDNA模板的合成
        4.1.6 miR393b及其靶基因TIR1的qRT-PCR分析
    4.2 結(jié)果分析
        4.2.1 引物特異性分析
        4.2.2 miR393b及其靶基因TIR1在百合體胚發(fā)生過程中表達(dá)及關(guān)聯(lián)分析
    4.3 討論
總結(jié)
主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]山杏體細(xì)胞胚胎發(fā)生及其組織學(xué)觀察[J]. 何炎紅,吳高殷,白玉娥,田春.  經(jīng)濟(jì)林研究. 2018(01)
[2]內(nèi)源激素對同源四倍體黑皮冬瓜自交花粉萌發(fā)生長的影響[J]. 萬正林,周艷霞,鄧儉英,李立志,武鵬,龍明華.  華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2018(01)
[3]云南重樓種子萌發(fā)過程內(nèi)源激素含量及酶活性變化研究[J]. 蘇海蘭,周先治,李希,陳敏健,卓景泰,唐建陽,封淼根,張林好.  核農(nóng)學(xué)報(bào). 2018(01)
[4]脯氨酸通過影響生長素途徑相關(guān)信號(hào)抑制擬南芥根的生長[J]. 王翠平,陳建偉,喬改霞.  植物生理學(xué)報(bào). 2017(08)
[5]光皮樺miR393及其靶基因在低氮脅迫中的表達(dá)分析[J]. 潘櫻,張儀平,朱敏慧,葉豐,林仕雄,黃蒙慧,童再康,張俊紅.  核農(nóng)學(xué)報(bào). 2017(10)
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博士論文
[1]兩種中國原產(chǎn)百合體細(xì)胞胚發(fā)生及miRNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)初步解析[D]. 張靜.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]陸地棉體細(xì)胞胚胎發(fā)生過程中miRNAs及其靶標(biāo)的鑒定和GhmiR157a/GhSPL10功能分析[D]. 王麗晨.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[3]基于基質(zhì)固相分散萃取—高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜的植物激素分析[D]. 王璐.中國科學(xué)技術(shù)大學(xué) 2014
[4]牡丹胚性愈傷組織誘導(dǎo)及胚性相關(guān)基因PsSERK的初步研究[D]. 劉藝平.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015

碩士論文
[1]百合體胚發(fā)生過程中miR166及其靶基因的鑒定與表達(dá)分析[D]. 楊越.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]基于體細(xì)胞胚發(fā)生的兩種中國原產(chǎn)百合多倍體創(chuàng)制[D]. 蓋美竹.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[3]植物激素脫落酸在草莓果實(shí)成熟著色上的研究[D]. 宋曉雋.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[4]毒莠定（PIC）調(diào)控百子蓮愈傷組織胚性誘導(dǎo)與保持生理生化基礎(chǔ)的研究[D]. 鄒夢雯.上海交通大學(xué) 2015
[5]石斛蘭離體培養(yǎng)條件優(yōu)化及其離體培養(yǎng)物的microRNA研究[D]. 吳高杰.福建農(nóng)林大學(xué) 2012
[6]液相串聯(lián)質(zhì)譜測定水稻37種內(nèi)源激素方法的研究[D]. 馬有寧.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2011
[7]柑橘中冷脅迫相關(guān)miRNAs的克隆與鑒定[D]. 張金梅.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[8]番茄果實(shí)中miRNA的克隆及表達(dá)水平鑒定[D]. 鄒臣華.重慶大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3007135