生物技術(shù)是現(xiàn)在食品科學(xué)發(fā)展中最具潛力的技術(shù),其中通過基因工程改良植物的果實產(chǎn)量、品質(zhì)等已經(jīng)取得了顯著成效,而了解植物生長發(fā)育的分子機(jī)理對更好的利用基因工程獲得高品質(zhì)的食物具有重要意義。Seven in absentia（SINA）蛋白家族是一類具有泛素連接酶活性的蛋白,在其N端有一個保守的C3H4型RING結(jié)構(gòu)域和兩個鋅指結(jié)構(gòu),而C端負(fù)責(zé)形成二聚體和與底物結(jié)合。最近,我們課題組從番茄（Solanum Lycopersicum,l）基因組中發(fā)掘出了 6個SINA基因,其中之一被名為SlSINA3,該基因的編碼產(chǎn)物為E3泛素連接酶,可以特異的泛素化抗病相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子S1NAC1并促進(jìn)其降解。在本研究中,我們鑒定了所有6個SlSINA基因和其編碼產(chǎn)物的生化特性,并解析了它們在多個生理過程中的作用,包括抗病反應(yīng)和植物生長發(fā)育。生物信息學(xué)的分析揭示了 S1SINA1在氨基酸序列上的特異性。通過定量RT-PCR,我們發(fā)現(xiàn)在根、莖、葉、花等不同的組織中,所有SlSINA基因的表達(dá)水平都受到了不同程度的調(diào)控。體外泛素化實驗表明所有的SlSINA蛋白都具有依賴于RING結(jié)構(gòu)域的E3泛素酶活性,并且對于E2... 

【文章來源】：合肥工業(yè)大學(xué)安徽省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：117 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖３．３系統(tǒng)進(jìn)化樹分析??Ｆｉｇ?３．３?Ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ?ａｓｓａｙ??

合肥工業(yè)大學(xué)博士研究生學(xué)位論文??根據(jù)上述序列比對結(jié)果，選取保守區(qū)的序列片段，通過Ｎ－Ｊ法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化??樹，可以將所有植物中的ＳＩＮＡ蛋白分為５組（圖３．３）。Ｉ組是最大的一個分枝，??包括來自其中４個物種的１６個成員，但不包含水稻中的ＳＩＮＡ蛋白，并且，番茄??中的５個ＳＩＮＡ?（Ｓ１ＳＩＮＡ２、３、４、５、６）蛋白都被歸到這一組。此外，這一組中??的所有成員都具有長Ｃ末端（圖３．２），其中ＡｔＳＩＮＡＴ５參與擬南芥?zhèn)雀男纬桑??ＬｊＳＩＮＡ４是根瘤與叢枝根菌起始形成所必需的。ＩＩ、ＩＥ組都是由來自水稻的ＳＩＮＡ??蛋白組成。Ｓ１ＳＩＮＡ１屬于Ｖ組，同時，值得注意的是ＡｔＳＩＮＡＴｌ和ＡｔＳＩＮＡＴ２也被??分在Ｖ組，這兩個蛋白都在饑餓反應(yīng)中扮演重要的角色【１Ｇ１］，并且ＡｔＳＩＮＡＴ２還??參與胡蘿卜素的形成［１Ｇ２】。從圖３．３中還可以發(fā)現(xiàn)，許多物種中都有一些ＳＩＮＡ蛋??白被成對的聚在一起，如番茄中Ｓ１ＳＩＮＡ３與Ｓ１ＳＩＮＡ６、Ｓ１ＳＩＮＡ４與Ｓ１ＳＩＮＡ５，表明??這幾個蛋白之間可能在某些功能上是冗余的。通過對這些蛋白的進(jìn)化分析

定量ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測汾５／況４基因在８周大小番茄植株的不同組織進(jìn)表達(dá)水平。將新葉中??的量設(shè)為１，實驗取三次技術(shù)重復(fù)平均值，Ｔ檢驗（Ｐ?＜０．０１）??圖３．４?基因的表達(dá)模式??Ｆｉｇ?３．４?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｐａｔｔｅｒｎ?ｏｆ?ＳＩＳＩＮＡｓ??３．３?Ｓ１ＳＩＮＡ蛋白是具有泛素活性的Ｅ３連接酶??３．３．１?ＳＩＮＡＥ３活性的研宄進(jìn)展??目前所發(fā)現(xiàn)的Ｅ３泛素連接酶主要可以分為兩大類，即ＨＥＣＴ型Ｅ３與ＲＩＮＧ??型Ｅ３。根據(jù)前面的生物信息學(xué)分析，我們知道所有的Ｓ１ＳＩＮＡ蛋白序列中都包括??典型的ＲＩＮＧ－ｄｏｍａｉｎ，這意味著這些蛋白可能具有泛素連接酶的活性。目前為止，??在植物界中己經(jīng)挖掘出了?４０多個來自不同物種的５７Ｍ４或見Ｍ４－ｌｉｋｅ基因，但是完??全通過實驗確定了?Ｅ３活性的只有９個［９６，１０１，１（）３＾５，１２８】。其中有些蛋白，如ＬｊＳＩＮＡ２，??卻并沒有檢測到活性［ＩＧ４】。盡管在之前的研宄中，我們已經(jīng)證實了?Ｓ１ＳＩＮＡ３的泛素??活性ｎ〇５］，但仍然需要鑒定其它蛋白是否同樣具有Ｅ３酶功能。??泛素連接酶在植物體內(nèi)的調(diào)節(jié)可能是作為底物被另外的Ｅ３泛素化降解

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：2987744