神農香菊（Chrysanthemu indicum var.aromaticum）是近幾年發(fā)現(xiàn)的野菊（Chrysanthemum indicum）一變種,其花、葉、根均具有濃郁的香氣,可用于精油提取、藥材加工,是一種極具藥用開發(fā)價值和園林應用價值的植物。神農香菊主要的有效成分有兩類:揮發(fā)油、黃酮類化合物。在類黃酮代謝途徑中花色素苷生物合成途徑是其重要分支,研究類黃酮代謝途徑對園林植物花色的改良具有重大意義。MYB轉錄因子對植物類黃酮代謝途徑有重要調控作用。本研究欲從神農香菊克隆得到一 MYB基因,通過轉基因方法使CiMYB4在煙草中過量表達,初步探究CiMYB4基因的功能。再對野菊進行遺傳轉化,以期為菊花類黃酮代謝途徑的調控網(wǎng)絡提供參考,同時也為菊花花色創(chuàng)新提供理論依據(jù)。本研究以神農香菊為試驗材料,在神農香菊轉錄組數(shù)據(jù)的基礎上,分析篩選并克隆獲得了CiMYB 基因,利用生物信息學方法對CiMYB4基因進行分析;雙酶切方法構建植物過表達載體,對煙草進行遺傳轉化,初步探究CiMYB4基因的調控作用;再將CiMYB4基因轉入野菊中,為后期在CiMYB4基因對野菊類黃酮代謝途徑與花色變化的研究... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１總ＲＮＡ膠圖??

衽┫憔眨茫鄭粒??紓駛?蚩寺〖吧?鐨畔⒀Х治觶崳?２．３結果與分析??神農香菊葉片總ＲＮＡ電泳結果由圖２－１可見，提取完整性好，其中５?ｓ、１８?ｓ和２８??ｓ三條核糖體帶均清晰可見、無降解。ＲＮＡ的Ａ２６０／Ａ２３０在１．９３￣２．１２之間，??Ａ２６０／Ａ２８０在１．９５？２．０６之間，說明ＲＮＡ的純度和濃度可以進行接下來的ｃＤＮＡ合成及??基因克隆等實驗。??圖２－１總ＲＮＡ膠圖??Ｆｉｇ．２－１?Ｑｕａｎｔｉｔｙ?ｏｆ?ｅｘｔｒａｃｔｅｄ?ｔｏｔｏｌ?ＲＮＡ??２．３＿１?ｃ／鮮似基因克隆與序列分析??以ＣｉＭＹＢ４－Ｆ／ＣｉＭＹＢ４－Ｒ為引物，以由神農香菊葉片總ＲＮＡ反轉錄獲得ｃＤＮＡ為模??板，進行ＰＣＲ擴增，結果如圖２－２。２％瓊脂糖凝膠純化后，進行膠回收。膠回收產物與??ｐＵＣ－Ｔ載體連接，熱激法轉化大腸桿菌ＤＨ５ａ感受態(tài)，提取陽性客隆菌液質粒，測序并??保存。測序結果顯示與轉錄組預測序列相同。Ｃ７ＭＫ＾／基因長８４６?ｂｐ，編碼２８１個氨基酸??（圖２－３）。綜上Ｃ７Ｍ｝似基因ＯＲＦ框已成功克隆出，將序列在ＮＣＢＩ上進行登錄，登錄??號：ＭＨ１４２２１４。??

圖２－５ＴＭＰｒｅｄ預測ＣｉＭＹＢ４轉錄因子跨膜結構域??Ｆｉｇ．３－５?Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ?ｐｒｅｄｉｃｔ?ｏｆ?ＣｉＭＹＢ４?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ?ｆａｃｔｏｒ?ｂｙ?ＴＭＰｒｅｄ??

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]神農香菊CiMYB61基因的克隆及其功能的初步研究[D]. 王蕾.東北林業(yè)大學 2018
[2]野菊（Chrysanthemum indicum）ChiMYB基因克隆及其功能的初步研究[D]. 楊雪.東北林業(yè)大學 2017
[3]歐李四個花色苷相關MYB基因的克隆及遺傳轉化[D]. 鄭斌.山西農業(yè)大學 2016
[4]桑樹類黃酮3-O-葡萄糖基轉移酶基因的鑒定及功能分析[D]. 梁燕梅.西南大學 2016
[5]基于轉錄組測序的紅蓋鱗毛蕨類黃酮3’-羥化酶（F3’H）基因的克隆與表達分析[D]. 黃小芳.上海師范大學 2016
[6]擬南芥黃烷酮-3-羥化酶調控非生物脅迫抗性機理研究[D]. 孫鵬.山東農業(yè)大學 2014



本文編號：2984664