隨著設(shè)施栽培面積不斷擴大,連作現(xiàn)象越來越嚴重,也成為了亟待解決的問題,而采用合理的輪、間、套作是解決蔬菜連作障礙的有效途徑。本課題組多年的研究發(fā)現(xiàn),設(shè)施栽培分蘗洋蔥伴生番茄后,能有效地減輕番茄病害的發(fā)生,促進番茄植株的生長,產(chǎn)量增加5⁸%。目前已有很多分蘗洋蔥的化感作用分子機理的研究報道,而基因?qū)Ψ痔Y洋蔥化感作用的調(diào)控還尚不清楚。本研究以分蘗洋蔥、番茄為試材,利用課題組前期通過的RNA-Seq高通量測序、表達譜DGE結(jié)果確定的與分蘗洋蔥化感作用相關(guān)的兩個基因Chi、Pal,采用分子克隆的方法進行3’RACE擴增,首次從分蘗洋蔥中克隆得到Acad Chi、Acad Pal基因全長,構(gòu)建了超表達載體轉(zhuǎn)化到擬南芥中。研究驗證基因相關(guān)功能,應用q RT-PCR、PCR-DGGE、Illumian Miseq測序技術(shù)等研究其對根區(qū)微生物群落分布及豐度、多樣性的影響,驗證了擬南芥根系分泌物對番茄的化感效應及對番茄黃萎病菌抑菌效應。旨在為揭示分蘗洋蔥伴生番茄機理的研究提供理論依據(jù),對研究分蘗洋蔥化感作用及其在設(shè)施栽培的應用具有一定的指導意義。本研究的主要結(jié)論如下:1.采用熒光定... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

酚類物質(zhì)的主要代謝途徑Fig.1-1Mainmetabolicpathwayofphenolics1.2.3.2酚酸類物質(zhì)對植物的影響

東北農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學博士學位論文6圖1-2 酚類化合物的基本分類Fig. 1-2 Basic classification of phenolic compounds酚類化合物在植物中有許多重要的生理功能，對植物的品質(zhì)、產(chǎn)量等起著至關(guān)重要的作用。作為植物葉、莖、表皮、花、果實等器官的著色劑；酚類化合物對諸如傷害、侵染、光過�；� UV 輻射等逆境脅迫有防御作用，起到保護植物的作用；作為細胞壁的結(jié)構(gòu)成分，類黃酮和酚酸參與細胞壁的組成； 酚類化合物是植物化感作用的生化分子；酚類化合物還可以充當信號分子；一些類黃酮還是一些物種的雄性育性、抗微生物制劑、取食抑制劑、植物和固氮細菌間的起到支撐植物的作用識別信號。酚類物質(zhì)對植物生長發(fā)育有一定的調(diào)節(jié)作用，其中一元酚會抑制植物的生長，而二元酚或多元酚對植物生長卻有促進作用[70]。1.2.3.3 酚酸類物質(zhì)對土壤微生物的影響土壤是生態(tài)系統(tǒng)中物質(zhì)循環(huán)和能量轉(zhuǎn)化的重要場所，土壤微生物多樣性與活性的保持是農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)健康、穩(wěn)定的基礎(chǔ)[71]。土壤微生物一方面在對促進植物生長、改善土壤結(jié)構(gòu)、促進養(yǎng)分循環(huán)等方面起到重要作用[72]。另一方面，植物也會通過分泌根系分泌物、殘茬分解等方式影響土壤微生物的活性和群落結(jié)構(gòu)。酚酸物質(zhì)能夠抑制微生物產(chǎn)生氣體與脂肪酸，并且可減少微生物對其生長介質(zhì)的消耗[73]。根際微生物在分解有機物質(zhì)的過程中

分蘗洋蔥化感相關(guān) Chi 基因的克隆與功能分析5 ×BP ClonaseTM 反應緩沖液 2 μl、BP ClonaseTM 酶混合物 1 μl, 補充 TE) 至 10 μl。反應體系置 25℃溫育 2 h 后加入 2 μl 蛋白酶 K 溶液，37℃溫育 BP 反應。將反應產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至 50μl E.coli DH 5α 感受態(tài)細胞中。轉(zhuǎn)化后涂布含素的 LB 篩選培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)過夜。挑取單菌落至 5 ml 含 50 mg/l 卡那霉 培養(yǎng)基中，37℃ 培養(yǎng)過夜。2 LR 反應 反應的目的在于將已經(jīng)重組入 Entry 載體的目標基因再克隆到表達載體 SO表達克隆。LR 反應體系中包括 Entry 克隆 100～300 ng、SOL2095 載體 1 μeTM 反應緩沖液 2 μl、LR ClonaseTM 酶混合物 1 μl，補充 TE 緩沖液 ( pH反應體系置 25℃ 溫育 2 h 后加入 2 μl 蛋白酶 K 溶液，37℃ 溫育 10 min應，載體構(gòu)建圖（見圖 3-1）。 反應產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化及陽性克隆的鑒定將 LR 反應產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌菌株 DH 5對重組質(zhì)粒進行測序鑒定，以確定是否構(gòu)建到超表達載體中。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：2956929